1、ICS 65.020 CCS B 16 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 5371.2 2021 粮食作物种传病害控制技术规程 第 2 部分：谷子线虫病 2021 - 04 - 26 发布 2021 - 05 - 26 实施 河北省市场监督管理局 发布 DB13/T 5371.2 2021 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 2020标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 DB13/T 5371粮食作物种传病害控制技术规程分为 7个部分： 第 1部分： 谷子白发病 ； 第 2部分： 谷子线虫病 ； 第 3部分： 谷子粒黑穗病； 第 4部分： 玉米丝
2、黑穗病 ； 第 5部分： 小麦散黑穗病； 第 6部分： 高粱黑穗病； 第 7部分： 糜子黑穗病。 。 本 文件 为 DB13/T 5371的第 2部分。 本 文件 由河北省农林科学院提出。 本 文件 起草单位：河北省农林科学院谷子研究所。 本 文件 主要起草人：李志勇 、 白辉 、 董志平 、 马继芳 、 刘佳 、 王永芳 、 全建章 、 刘磊 、 张梦雅 、 勾建军 、 李秀芹 、 毕章宝 、 于卫红 、 赵跃峰、 李瑞德 、蔡晓玲、姜红艳 。 DB13/T 5371.2 2021 1 粮食作物种传病害控制技术规程 第 2 部分：谷子线虫病 1 范围 本 文件 规定了 谷子线虫病的 病情分级
3、、 控制原则和控制技术 。 本 文件 适用于 谷子线虫病的控制 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样 GB 4404.1 粮食作物种子 第 1部分：禾谷类 GB/T 15671 农作物薄膜包衣种子技术条件 NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 DB13/T 2338.5 谷子抗病虫性鉴定技术规程 第 5部分：线虫病 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.
4、1 谷子线虫病 由贝西滑刃线虫（ Aphelenchoides bessyi Christie）引发的种传病害，土壤也可传播，属于外 寄生的非系统性病害。线虫随着植株的生长逐渐迁移至穗部，并大量繁殖，侵染花器和子房，致使子 房受损、柱头萎缩，不能结实。 谷子线虫病症状和发生规律见附录 A。 3.2 种传病害 以种子携带病原物传播为主的病害。 3.3 无病种子 不携带谷子线虫病活体线虫的种子。 3.4 农田清洁生产 预防病原物污染 作物或农田土壤的农业生产方式。在作物或农田野生寄主上的病原物扩散前将病 部彻底清理出田间，并进行灭活处理 ，减少或者消除 病原物 对 作物或农田土壤等 环境 的污染。
5、 4 病情分级 DB13/T 5371.2 2021 2 无病地块：没有谷子线虫病发生的地块；零星发病地块：谷子线虫病发病率在 1%以下；常发地块： 谷子线虫病发病率在 1% 5%；重病地块：谷子线虫病发病率在 5%以上。 5 控制原则 以生产和使用无病种子为前提，农田清洁生产为重点，根据病情分级对不同发生程度的地块采用 分级治理的原则。多措并举控制重病地块；种子处理等技术防控常发地块；农田清洁生产控制零星发 生地块； 重点保护无病地块。实现地块病情逐年降级，由点到片再到面，逐步实现不用农药控制病害 的目的。 6 控制技术 6.1 无病种子生产 6.1.1 无病原种（亲本） 6.1.1.1 选
6、用无病原种（亲本） 常规谷子品种选用无病原线虫的原种进行繁种；谷子杂交种选用无病原线虫的不育系和恢复系进 行制种。 种子质量 应符合 GB 4404.1的规定 。 6.1.1.2 温汤浸种 播种前， 用 55 56 温 水 浸种 10 min， 晾干后备用。 6.1.1.3 药剂处理种子 选用 40%辛硫磷乳油，按照种子重量的 0.2% 0.3%对谷子原种（亲本）进行拌种，避光堆闷 4h后晾 干。药剂使用应符合 NY/T 1276规 定，包衣种子质量应符合 GB/T 15671规定。 6.1.2 建立无病繁（制）种基地 6.1.2.1 无病地块繁（制）种 在无谷子线虫病地块建立繁（制 ）种基地
7、，确保繁 （制 ）种田周边 300 m之内没有谷子线虫病发生。 6.1.2.2 轮作倒茬地块繁（制）种 选用 4年内没有种植谷子的田块作为繁（制）种田。 6.1.3 农田清洁生产 在 灌浆中期 拔 除田间直立、不灌浆或部分籽粒灌浆的暗褐色谷子线虫病病穗。 带 离谷田， 集中深 埋 （ 30 cm） 或烧毁 。 6.1.4 种子带虫检测 通过以下技术对种子带贝西滑刃线虫情况进行检测，发现种子带线虫则不能作为无病种子使用。 6.1.4.1 田间目测 DB13/T 5371.2 2021 3 谷子灌浆期，观察 田间是否有直立、不灌浆或部分籽粒灌浆暗褐色谷子线虫病病穗。 6.1.4.2 分离检测 取适
8、量种子放在单层纱布或细纱网内，把包有种子的纱布或纱网放在 玻璃 漏斗中， 在漏斗中加水 使待检种子浸在水中，漏斗下接一段橡皮管，橡皮管由弹簧夹夹住。室温下静止 12 h 24 h， 打开弹 簧夹，收集底部 5毫升水样，线虫数量少时可离心富集，显微镜下对水样进行镜检 。 镜检发现线虫，视 为种子带线虫。 6.1.4.3 分子检测 利用 PCR技术对种子进行贝西滑刃线虫检测。 种子取样 参 照 GB/T 3543.2执行。 检测 技术见附录 B。 6.2 田间控制技术 根据谷子线虫病在当地的发生情况， 因地制宜选用下列相应病情级别的控制技术 。 6.2.1 重病地块控制 6.2.1.1 土壤深翻
9、谷子线虫病发生严重田块，秸秆不应作为饲料使用，谷子收获后深翻 30 cm。 6.2.1.2 轮作倒茬 实行 4年以上轮作。选择玉米、高粱、大豆、花生、蔬菜、甘薯、油料等非寄主作物进行轮作。 6.2.1.3 选用抗病品种 种植品种应符合 DB13/T 2338.5的规定。 6.2.1.4 选用无病种子 禁止从病区调运种子，选用无病原线虫的谷子种子。 种子质量 应符合 GB 4404.1的规定。 6.2.1.5 药剂处理种子 选用农药对谷子常规种子和杂交种子进行处理，方法 同 6.1.1.3。 6.2.1.6 农田清洁生产 同 6.1.3。 6.2.2 常发地块控制 6.2.2.1 轮作倒茬 实行
10、 3年以上轮作。可选择轮作倒茬的作物同 6.2.1.2。 6.2.2.2 选用抗病品种 同 6.2.1.3。 6.2.2.3 选用无病种子 同 6.2.1.4。 DB13/T 5371.2 2021 4 6.2.2.4 药剂处理种子 同 6.2.1.5。 6.2.2.5 农田清洁生产 同 6.1.3。 6.2.3 零星发病地块控制 6.2.3.1 选用无病种子 同 6.2.1.4。 6.2.3.2 药剂处理种子 同 6.2.1.5。 6.2.3.3 农田清洁生产 同 6.1.3。 6.2.4 无病地块保护 6.2.4.1 选用无病种子 同 6.2.1.4。 6.2.4.2 药剂处理种子 同 6
11、.2.1.5。 DB13/T 5371.2 2021 5 A A 附 录 A （资料性） 谷子线虫病症状及发病规律 A.1 症状 谷子病 原线虫可感染 谷子的根、茎、叶、叶鞘、花、穗和籽粒，但主要为害花器、子房，只在穗 部表现症状。感病植株的花初呈暗绿色，渐变黄褐色，后呈暗褐色。发病重的植株抽穗后即表现症状。 因大量线虫寄生于花部破坏子房，因而不能开花，即使开花也不能结实，颖片多张开，籽粒秕瘦，尖 削，表面光滑有光泽，病穗瘦小，直立不下垂。发病轻的植株症状多不明显，能开花结实，但只有靠 近穗主轴的部分小花形成浅褐色的病粒。不同品种症状差异明显。红秆或紫秆品种的病穗向阳面的护 颖在灌浆至乳熟期变
12、为红色或紫色，以后褪成黄褐色。而绿秆品种无此症状，直到成熟时护颖仍为苍 绿色 。 A.2 发病规律 谷子线虫病主要随种子传播，带虫种子是主要初侵染源，秕谷落入土壤或作为饲料制作的粪肥也 可传播。混在土壤中或保持在室内的线虫至少 能存活 3年以 上。谷子病原线虫为外寄生，谷子播种后， 在谷粒、秕籽的壳皮内侧卷曲休眠越冬 的成虫和幼虫遇湿复苏， 感染 胚根及幼芽，拔节前大部分线虫 仍在根部和种壳内，并有少量繁殖。拔节后线虫逐渐向叶鞘转移，在叶鞘内侧繁殖。适当的高温 (25 30 )能促使 线 虫更为活跃 ， 若此时雨水较多，植物体表存在水膜 ， 线虫可在植株体表水膜中迅速迁 移至地上部分，尤其在孕
13、穗以后 ,适宜的温湿条件及穗 部丰富的营养，线虫向上迁移更为显著。 谷子苗 期地上部分线虫数量一直较少，而 幼穗形成后，线虫转移到穗部为害并 大量繁殖，此时线虫繁殖极快， 开花末期达到高峰，每穗有 12000 20000条线虫，造成子房受损、柱头萎缩，不能结实；至谷子成熟 时，又以幼虫、成虫主要在谷粒、秕籽的内外颖内侧休眠越冬，而护颖内侧线虫较少，胚和胚乳内没 有线虫。在生长期间，特别是在穗期，线虫能随雨水或植株间接触而传播到临近的健株或健穗上。另 外，发病轻的病穗仍能正常结实，为此 ， 病田中外观健康的穗粒，实际 也可能 潜藏着休眠线虫。 线虫病的轻重，主要取 决于种子带线虫量和穗期雨量大小
14、、温度及品种抗性，这些发病要素同时 具备，则可造成毁灭性为害。一般平地重，山地轻；粘土地重，沙土地轻；积水洼地重；早播病轻， 晚播病重。高温高湿有利于线虫活动繁殖，尤其是开花灌浆期多雨，利于线虫在穗部大量繁殖传播， 造成病害大发生及减产。不同谷子品种间抗病性有差异。凡生育期长，特别是孕穗期到灌浆期长，而 且穗码紧、刚毛长的品种发病重，反之则发病轻。 DB13/T 5371.2 2021 6 B B 附 录 B （资料性） 谷子种子带病原线虫分子检测 B.1 检测方法 每份谷子种子随机抽样 3次，每次取 20粒，设置 3次重复， 液氮研磨种子至粉末状， 提取 基因组 DNA。 利用 贝西滑刃线虫
15、 特异性引物 GU-F/GU-R对基因组 DNA进行 PCR扩增， 利用 1.2%琼脂糖凝胶进行电泳检 测。检测到 245bp的特异性扩增片段则种子带线虫。 B.2 贝西滑刃线虫 特异性引物 GU-F： GACACTGCAATCGCTTCGAC GU-R： ATCCGCAACCACAACTCACA B.3 PCR扩增体系与程序 25 L PCR反应体系 ： 2Es Taq Master Mix 12.5 L、模板 DNA 2.0 L、 10 mol/L上下游引物 各 1 L、 灭菌 ddH2O 8.5 L。 PCR扩 增程序： 94 预变性 2 min； 94 变性 30 s， 56 退火 3
16、0 s， 72 延伸 30 s， 35个循环反 应；最后 72 再 延伸 5 min。 B.4 PCR扩增片段核苷酸序列 GACACTGCAATCGCTTCGACGACATTCCGCAAGGTTGTCTAGGAGTGTTGTTGTTGTGCTCGTTGGATGCATTTGCGTGCGGAG TGCGCCGAGTGGGTCGATGTCGCTGCCGGAAGGGCGTATAGAGGACTCGGGTTTTCGGACTCGAGAATCCTGTGCGTTCGGATAGCAG GTGATGTTGGCTCGCTGTTGTGGAGTGCGGGTGAATTCGCGATGGGCGTCGGTTGTGAGTTGTGGTTGCGGAT _
