1、 HHP ICS 13.310 CCS A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中 克百威 等7 种氨 基甲 酸酯 类杀虫剂 检验 液相色谱- 质谱法 Forensic sciences Examination methods for seven carbamate insecticides including carbofuran in biological samples LC-MS - 发布 - - 实施 中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 发布 GA/T I 前 言 本文件 按 照 GB/T 1.1 2020 标 准化
2、 工作 导则 第 1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规定 起草。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利 。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本 文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术委 员会 毒物 分析 分技术 委员 会 （SAC/TC 179/SC 1 ） 提 出并归口。 本 文件 起草单 位： 辽宁省 公安厅 刑事技 术总 队、 广 西省厅 物证鉴 定中 心、广 东省厅 刑事技 术中 心、 深圳市 公安 局刑 科所 、公 安部物 证鉴 定中 心 。 本 文件 主要 起草 人： 吴迪 、李杰 敏、 黄丽 、赵 海雨 、黄克 建、 李鹏
3、 、李 树辉 、王瑞 花 。 GA/T 1 法庭科学 生 物检 材中 克百 威 等7 种氨基甲 酸酯类 杀虫剂检 验 液相色谱- 质 谱法 1 范围 本 文件 规定 了 法 庭科 学 生 物检材 （血 液、 尿 液 ） 中 克百威 、 灭 多威、 甲萘 威 、 异丙 威、 涕 灭威 、 残 杀威、 抗蚜 威 的 液相 色谱- 质谱 定 性定 量分 析方法 。 本 文件 适用 于 法 庭科 学 生 物检材 （血 液、 尿 液 ） 中 克百威 、 灭 多威、 甲萘 威 、 异丙 威、 涕 灭威 、 残 杀威、 抗蚜 威 的 定性 定量 分析 。 其他 检材 可参 照使用 。 2 规范性 引用 文件
4、 下 列文件 中的内 容通过 文中 的规范 性引用 而构成 本文 件必不 可少的 条款。 其中 ，注日 期的引 用文 件， 仅 该日 期对 应的 版本 适用于 本文 件； 不注 日期 的引用 文件 ， 其 最新 版本 （包括 所有 的修 改单） 适 用 于本文 件。 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GA/T 122 毒 物分 析名词 术 语 3 术语和 定义 GA/T 122 界定的术语和 定义适 用于本 文件 。 4 原理 以空白 样品 和添 加样 品 作 对照， 按平 行操 作的 要求 ， 对生 物检材 中 7 种氨 基 甲酸酯 类农 药（ 基本 信息参 见
5、附录 A ） 进行 提 取、净 化及 浓缩 ， 采 用液 相色谱- 质谱 法定 性定 量 ， 以保留 时间 、质 谱特 征离 子对 和 离子 对丰 度比 作为 定性判 断依 据； 以峰 面积 为依据 ，采 用外 标法 进行 定量分 析 。 5 试剂和 材料 5.1 试剂 实验用 水应 符 合 GB/T 6682 中规 定的 一级 水。 除非 另有说 明， 在分 析 中 使用 的试剂 均为 分析 纯， 试剂包 括： a) 三氯甲 烷 ； b) 乙酸乙 酯 ； c) 乙腈： 色谱 纯 ； d) 甲酸： 色谱 纯 ； e) 0.1% 甲 酸溶 液： 移取 0.5mL 甲 酸用 水定 容至 500mL
6、 ； f) 标准溶 液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质储备液：根据 克百威、 灭多威、 甲萘威、异丙威、涕灭威、残杀威 、 抗蚜威 标准 物质 的纯 度和 盐型换 算后， 各称 取适 量， 用 乙腈 分别 配制 成 1.0mg/mL 标 准物 质储备 液， 密封 ，-18 以 下保存 ，有 效 期 3 个 月。 或采用 市售 标准 溶液 ； GA/T 2 2) 单一标 准物 质工 作溶 液： 分别移 取 1.0mg /mL 的 克 百威、 灭多 威、 甲 萘威、 异丙威 、 涕 灭 威、残 杀威 、抗 蚜威 标准 物质储 备 液 ， 用 乙腈 配制 成浓度 为 10g/mL 的单 一 标
7、准工 作 溶 液， 密封 ，04 保存 ， 有效 期 1 个月 。 实 验中 所 用其他 浓度 的单 一标 准工 作溶液 均由 1.0mg /mL 标准 物质 储备 液 配制得到 ； 3) 混合物质 标准 工作 溶 液： 分别移 取 1.0mg /mL 的克 百威 等 7 种 标准 物质 储备 溶液， 用 乙 腈配制 成浓 度为 1g/mL 的混合 标准 物质 工作 溶液 ，密封 ，0 4 保存 ，有 效期 1 个月 。实验 中所 用其 他浓 度的 混合标 准物 质工 作溶 液均 由 1.0mg /mL 标 准物 质储备 液配 制 得 到。 5.2 材料 材料包 括 ： a) 具盖离 心管 ；
8、 b) 有机微 孔滤 膜：0.22 m ； c) 固相萃 取柱 ：WONDASEP NH 2 （200mg/3mL ）柱 或 等效固 相萃 取柱 。 注：WONDASEP NH2 柱是岛津公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 6 仪 器和 设备 仪器和 设备 包括 ： a) 液相色 谱- 串 联质 谱仪 ： 配 有电喷 雾离 子源 （ESI ） ； b) 振荡器 ； c) 电子天 平 ： 分度 值 d0.01mg ； d) 离心机 ； e) 移液器 ； f) 浓缩器 。 7 操 作方 法
9、7.1 定性 分析 7.1.1 样 品前 处理 7.1.1.1 液液 萃取 移 取血 液或尿液 0.2mL 置 于具盖 离心 管中 ， 加 入乙 酸乙 酯 0.8mL ， 振荡 5min ， 不低 于 8000r/min 离 心 3min ， 分 离有 机相 ； 重 复提取 一次 ， 合并 两次 提 取的有 机相 ， 置于 浓缩 器 上 60 浓缩 至干 ， 残留 物 用乙腈 0.2mL 溶解 ， 经有 机微孔 滤膜 过滤 ， 作 为检 材样品 提取 液， 供仪 器检 测。 注： 检材样品取样量、混合溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2 固相 萃取 移 取血液 或尿液 0.2
10、mL 置 于具盖 离心 管中 ， 加 入 0.8mL 水 振荡 5min ， 不 低于 8000r/min 离心 3min ， 取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中（使用前用 2mL 三氯甲烷活 化 ）， 上 清 液 过 柱 流 速 不 超 过 1mL/min，用 0.5mL 三氯 甲烷洗脱 ， 洗脱 液过 柱流 速不超 过 1mL/min ， 收 集 洗脱液 ， 置 于浓 缩器 上 60 浓缩至 干， 残留 物用 乙腈 0.2mL 溶解 ， 经 有机 微孔 滤膜过 滤， 作为 检材 样品 提取液 ，供 仪器 检测 。 7.1.1.3 沉淀 蛋白 GA/T 3 移 取血 液 或 尿液0.2mL
11、 置 于 具盖离 心管 中， 加入0.8mL 乙腈， 振荡5min ， 不低 于8000r/min 离心 3min ， 取 上清 液， 经有 机 微孔滤 膜过 滤， 作为 检材 样品提 取液 ，供 仪器 检测 。 注： 检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。 7.1.1.4 质控 样 品制 备 移 取等 量相 似基 质的 空白 样品两 份于 具盖 离心 管中 ， 一份 作为 空白 样品 ， 一 份 分别添加 灭 多威 、 甲 萘威和 涕灭 威 的 单一 标准 物质 工 作溶 液 ， 按 7.1.1.1 操作时 使灭多 威 浓 度为 0.1ng/mL ，甲 萘威 浓度 为 0.5ng/mL
12、 ， 涕灭 威 浓度 为 2ng/mL ， 按 7.1.1.2 和 7.1.1.3 操作时 使灭 多威 浓度 为 0.5ng/mL ， 甲萘 威浓度 为 1ng/mL ， 涕 灭威 浓度 为 2ng/mL ， 作为 添加 样品 ， 与检材 样品 平行 操作 ， 得 到空白 样品 提取 液和 添加 样品提 取液 ，供 仪器 检测 。 7.1.2 仪器 检测 7.1.2.1 仪 器条 件 7.1.2.1.1 液相 色谱- 串 联 质谱条件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a) 色谱柱 ：Raptor TM AR C 18 （100 mm
13、2.1mm ，2.7m ）或其 他等 效柱 ； 注： Raptor TM AR C18 为 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对 该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温 ：35 ； c) 流动 相 A ：0.1% 甲 酸溶 液 ； d) 流动 相 B ：乙 腈； e) 流速 ：0.2mL/min ； f) 洗脱 ：梯 度洗 脱， 梯度 洗脱条 件见 表 1 ； 表 1 梯 度洗 脱条 件 时间 min 流动相A 流动相B 0.0 20% 80% 1 40% 60% 4 60% 40% 4.2 20% 80
14、% 5 20% 80% g) 扫描 方式 ：正 离子 扫描 ； h) 监测 方式 ：多 反应 监测 （MRM ） ； i) 电喷 雾电 压：4500V ； j) 雾化 气压 力：50psi ； k) 气帘 气压 力 ：35 psi ； l) 辅助 气压 力 ：50psi m) 离子 源温 度：450 ； n) 定性、 定量 离子 对和 去簇 电压、 碰撞 能量 条件 见 表 2。 GA/T 4 表 2 定 性、 定量 离子 对和 锥孔 电 压、 碰撞 能量 条 件 目标物 定量离子对 定性离子对 去簇电压 V 碰撞能量 eV 灭多威 163.1/88.1 163.1/88.1 32 14 16
15、3.1/106.1 32 13 抗蚜威 239.2/182.1 239.2/182.1 33 21 239.2/72.0 33 20 涕灭威 208.1/116.2 208.1/116.2 30 12 208.1/89.2 30 26 残杀威 210.1/168.2 210.1/168.2 40 10 210.1/111.0 40 15 克百威 222.1/165.1 222.1/165.1 53 17 222.1/123.2 53 28 异丙威 194.2/95.0 194.2/95.0 52 13 194.2/152.1 52 13 甲萘威 202.1/145.0 202.1/145.0
16、54 17 202.1/127.0 54 41 7.1.2.2 进样 分别吸 取 空 白溶 剂、 添加 样 品 提取 液 、 空白 样品 提取 液 、 检材 样品 提取 液 、 混合 标准 物质 工作 溶液 ， 按7.1.2.1 仪 器条 件 进 行检 测 。 7.2 定 量分 析 7.2.1 样品 前处理 移取血 液 或 尿液0.2mL 两份，按7.1.1.1 或7.1.1.2 进行 操 作 ，得到 检材 样 品提 取液 ，供仪 器检 测 。 取与检 材样 品等 量的 相似 基质空 白样 品 ， 与 检材 样品 平行操 作 ， 得 到空 白样 品提 取液 ， 供 仪器 检测 。 外标- 单点
17、校正法法 ： 取与检材样品等量的相似基质 空白样品 两份，添加 相应 目标物 的单一标准物 质工作 溶液 ， 作 为添 加样 品， 与 检材 样品 平行 操作 ， 得到 添加 样品 提取 液 ， 供仪器 检测 。 添 加样 品中 目 标物含 量应 在检 材样 品中 目标物 含量 的 （100 50 ）% 范围 内 。 外标- 校准曲线法： 取与检材样品等量的相似基质空 白样品， 添加相应目标物 的 单一 标准物质工作 溶液， 配制成 浓度 在1ng/mL100ng/mL 范围 内 的添 加 样品 ， 与检 材样 品平 行操 作 ， 得到 添加 样品 提取 液 ， 供仪器 检测 。 校准曲 线应
18、 不 少于6 个浓度 点（包 括空白 样品 ）。检材 样品 中目标 物的 含量应 在 校准 曲线 的 线性 范 围内。 7.2.2 仪器 检测 7.2.2.1 仪 器条 件 同 7.1.2.1 。 7.2.2.2 进样 分别吸 取检 材样 品提 取液 、 空 白样 品提 取液 、 添加 样品提 取液，按7.1.2.1 仪 器条件 进样 分析 。 每份 检材样 品提 取液 和添 加样 品提取 液各 进样 分析23 次 。 7.2.3 计算 GA/T 5 7.2.3.1 计 算含 量 7.2.3.1.1 外标- 单点 校正 法 记录检 材样 品提 取液 和添 加样品 提取 液中 目标 物的 保留时
19、 间和 峰面 积值 ，按 公式（1） 计算 检材 样 品中目 标物 的含量 。 = A A . (1) 式中： 检 材样 品中 目标 物的 含量 ； A检 材样品 提取 液 中目标 物的 峰面 积 的 平均 值 ； A 添加 样品 提取 液 中目 标物 的峰 面积 的平 均值 ； 添加 样品 中目 标物的 含量 。 7.2.3.1.2 外标-校准 曲 线法 记 录 检 材样 品 提取 液 和添加 样 品 提取 液 中目 标 物的保 留 时 间和 峰 面积 值 ，以 添 加 样 品提 取 液中 目 标物的 峰面 积 的 平均 值为 纵坐标 、 添 加样 品提 取液 中 目标 物的 含量 为横 坐
20、标 进行线 性回 归， 得到 线性 方 程。根 据检 材样 品提 取液 中目标 物的 峰面 积值 ，按 公式(2) 计 算出 检材 样品 中 目标物 的含量 。 = y-b a . (2) 式中： 检 材样 品中 目标 物的 含量 ； y 检 材样 品提 取液 中目 标 物的峰 面积 的平 均值 ； a 线 性方 程的 斜率 ； b 线 性方 程的 截距 。 7.2.3.2 计 算相对 相差 记录 7.2.3.1 中 计算 得到 的 检材样 品中 目标 物的 含量 ， 按公 式(3) 计 算相 对相 差 ： 12 100% - RD = . (3) 式中： RD相 对相 差， 用百 分比 （%
21、 ） 表示 ； 1 、 2 两份 检材 样品 中 目标物 的含 量； 两份 检材 样品 中目 标物 含量的 平均 值。 8 结果评 价 8.1 定 性结 果评价 8.1.1 阳性 结果评 价 在相同 条件 下进 行样 品测 定时， 检材 样品 中目 标物 的色谱 峰保 留时 间与 标准 物质工 作溶 液一 致 （相对 误差 在 2.5% 之 内） 、目标 物的 两对 定性 离子 对与标 准物 质工 作溶 液一 致，且 离子 对 丰 度比 与 浓度接 近的 标准 物质 工作 溶液相比 ， 相对 偏差 不超 过表 3 规定 的范 围， 空白 样品无 干扰 ，则 可判 断检 材样品 中检 出目 标物
22、 。 X GA/T 6 表 3 离子 对丰 度比 的最 大允许 相对 偏差 范围 离子对丰度比 50% 20 50 1020 10% 最大允许相对偏差 20 25 30% 50% 8.1.2 阴性 结果评 价 检 材 样 品未 出 现与 目 标物 标 准 物 质工 作 溶液 一 致的色 谱 峰 ，且 添 加样 品 中出现 与 目 标物 标 准物 质 工作溶 液一 致的 色谱 峰， 空白样 品无 干扰 ，则 可判 断检材 样品 中未 检出 目标 物。 8.2 定 量结 果评价 2份 检 材样 品中 目标 物含 量 的RD 20% ， 定 量数 据可 靠， 其含 量 为2 份检 材样 品 的平均
23、值 。2份 检材 样品中 目标 物含 量的RD 20% ， 定量 数据 不可 靠 ， 应按7.2 重 新进 行定 量分 析 。 相关实 验数 据及 谱图 参见 附录B 。 GA/T 7 附录 A （资料 性 ） 克百威 等 7 种氨 基甲 酸酯 类杀虫 剂 的 基本 信息 克百威 等7 种氨 基甲 酸酯 类 杀虫剂 的相 关信 息见表A.1 。 表A.1 克百 威 等7种 氨基 甲 酸酯的 相关 信息 中文名称 CAS 编号 英文 分子式 分子量 母离子加成 类型 克百威 1563-66-2 carbofuran C12H15NO3 221.25 +H 灭多威 16752-77-5 metho
24、myl C5H10N202S 162.23 +H 涕灭威 116-06-3 aldicarb C7H14N2O2S 190.26 +NH4 残杀威 114-26-1 propoxur C11H15N03 209.24 +H 甲萘威 63-25-2 carbaryl C12H11NO2 201.22 +H 抗蚜威 23103-98-2 pirimicarb C11H18N4O2 238.29 +H 异丙威 2631-40-5 isoprocarb C11H15NO2 193.24 +H GA/T 8 附录 B （资料 性 ） 克百威 等7 种氨 基甲 酸酯 类杀虫 剂谱图 及 检出 限 B.1
25、克 百威 等7 种氨 基甲 酸 酯类杀 虫剂 的相 关谱 图见 图B.1 图B.8 。 图B.1 克 百威 等7种 氨基 甲酸酯 类杀 虫剂 的总 离子 流图 图B.2 克百 威 色谱图 图 B.3 灭 多威 色谱 图 图 B.4 涕 灭威 色谱 图 GA/T 9 图B.5 残杀 威 色谱图 图B.6 甲萘 威色 谱图 图B.7 抗蚜 威 色 谱图 图B.8 异丙 威 色 谱图 GA/T 10 B.2 检 出限 、定 量限 见 表 B.1 表 B.3 。 表B.1 液 液萃 取的 检出 限 和定量 限 目标物 检出限 ng/mL 定量限 ng/mL 定量限 RSD 克百威 0.1 1 5.03
26、5% 灭多威 0.1 1 4.419% 残杀威 0.1 1 2.992% 抗蚜威 0.1 1 3.083% 异丙威 0.1 1 1.163% 甲萘威 0.5 1 8.316% 涕灭威 2 5 6.489% 表B.2 固相 萃取 的 检 出限 和定量 限 目标物 检出限 ng/mL 定量限 ng/mL 定量限 RSD 克百威 0.5 2 5.035% 灭多威 0.5 2 4.419% 残杀威 0.5 2 2.992% 抗蚜威 0.5 2 3.083% 异丙威 0.5 5 1.163% 甲萘威 1 2 8.316% 涕灭威 2 10 6.489% 表B.3 沉淀 蛋白 的 检 出限 目标物 检出限 ng/mL 克百威 0.5 灭多威 0.5 残杀威 0.5 抗蚜威 0.5 异丙威 1 甲萘威 1 涕灭威 1 _
