GA T 1930-2021 法庭科学 疑似毒品中5,6-亚甲二氧基-2-氨基茚满、2-氨基茚满和乙基氨基丙基苯并呋喃检验 液相色谱和液相色谱-质谱法.pdf

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1、GA 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA/T 法庭科学 疑似毒品 中 5,6- 亚 甲二氧基-2- 氨基茚满 、 2- 氨基茚 满 和乙基 氨基丙基 苯并 呋喃检 验 液相色谱和 液相色 谱- 质 谱法 Forensic sciences Examination methods for MDAI 、2-AI 、5-EAPB in suspected drugs LC and LC-MS - 发布 - 实施 中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 发布 ICS 13.310 CCS A 92 GA/T I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工

2、作 导则 第1 部 分: 标 准化 文件 的结 构和 起草规 则 的规 定起 草。 请 注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本 文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术委 员会 毒物 分析 分技术 委员 会 (SAC/TC179/SC1 )提 出并 归口 。 本 文件 起草 单位 : 公安 部 物证鉴 定中 心 、 江 西省 公 安厅刑 警总 队刑 事技 术处 、 公 安部 禁毒 技术 情报 中心。 本 文件 主要 起草 人 : 郑晓 雨、 钱 振华 、 翟 晚枫 、 郑 珲、 张 春水 、 王 洪宗 、 刘 勇孜、 赵阳

3、、 常 颖、 徐 鹏、李 彭、 赵彦 彪、 杨虹 贤、闻 武、 刘克 林、 高利 生 。GA/T 1 法庭科学 疑似毒 品中 5,6- 亚甲二氧基-2- 氨基茚满、2- 氨基茚满 和 乙基氨基丙 基苯 并呋喃检验 液相 色谱和液相 色谱- 质谱法 1 范围 本 文件 规 定 了 法 庭 科 学 领 域 疑 似 毒 品 样品 中5,6- 亚 甲 二 氧 基-2- 氨 基 茚 满 (MDAI ) 、2- 氨 基 茚 满 (2-AI ) 、 乙 基氨 基丙 基苯 并呋喃 (5-EAPB ) 的液 相 色谱- 质 谱 (LC-MS ) 定 性 检验方 法和 液相 色谱 (LC ) 定量检 验方 法。

4、本 文件 适用 于法 庭科 学领 域疑似 毒品 样品 中MDAI 、2-AI 、5-EAPB 的 定性 分析 和定量 分析 。 2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 , 注日 期的 引用 文件 , 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件; 不注 日期 的引 用文件 , 其 最新 版本 (包 括所有 的修 改单 ) 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分析 实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 27418 测量 不确 定 度评定 和表示 GA/T 122 毒 物分 析名 词术 语 3

5、术 语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 对疑似 毒品 样品 中 的 MDAI 、2-AI 、5-EAPB (化 合物 信息 参 见附 录 A ) 进行 提 取。采 用液 相色 谱- 质谱检 测, 以保 留时 间、 质谱特 征离 子对 和离 子 对 丰度比 作为 定性 判断 依据 ; 采用 液相 色谱 检测 , 以色 谱峰面 积作 为定 量依 据, 用外标 单点 法或 外标 标准 曲线法 进行 定量 分析 。 5 试 剂和 材料 5.1 试剂 实验用 水应 符 合 GB/T 6682 中规 定的 一级 水。 除 非另 有说明 , 在 分析 中使

6、用的 试剂均 为色 谱纯 , 试 剂包括 : a ) 乙腈; b) 甲醇; c ) 浓磷酸 ; d) 甲酸; e ) 乙酸铵 ; GA/T 2 f ) 甲酸- 乙酸 铵缓 冲液 (以配制1000mL 为例 ) : 称取 乙 酸铵154mg ,用200mL 水溶 解, 量取 甲酸 1.0mL ,滴 入 上述 乙 酸铵溶液中, 转移至1000mL 容量 瓶 中 用水 定 容, 用 真空抽 滤 泵 抽滤 ,超 声波清 洗器 超声 ,即 可使 用; g) 0.1%甲酸 甲醇 溶液 ( 以配 制1000mL 为例) : 量取 甲酸1.0mL,用 200mL 甲醇 稀释 , 转 移至1000mL 容量瓶

7、中用 甲醇 定容 ,用 真空抽 滤泵 抽滤 ,超 声波 清洗器 超声 ,即 可使 用 ; h) 0.1%磷酸 水 溶液 ( 以配 制1000mL 为例) : 量 取浓 磷酸1.0mL , 用200mL 水稀释 , 转移至1000mL 容量瓶 中用 水定 容, 用真 空抽滤 泵 抽 滤, 超声 波清 洗器超 声, 即可 使用 ; i ) 定性提 取溶 剂 ( 以 配制1000mL 为例 ) : 量取950mL 甲酸- 乙酸 铵缓 冲液 和50mL 0.1% 甲酸 甲 醇 溶液, 混匀 即可 使用 ; j ) 定量 提取溶剂 ( 以 配制1000mL 为例) :量取950mL 0.1% 磷酸水 溶

8、液 和50mL 乙腈 ,混匀 即可 使用; k) 标准溶 液: 1)标 准物 质 储 备液 :1.0mg/mL MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标 准物 质 储 备液 ,0 4 冷 藏保 存, 有效期12个月 ; 2)标 准工 作溶 液按 实验 需 求分为 以下 四类: 定 性用标 准工作 溶液 : 移取MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标准 物质 储 备液各适量 ,用定 性提 取溶剂 稀 释, 分 别配 制成100ng/mL 的MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标 准工 作 溶液 。04 冷藏保 存 , 有效 期7 天; 定 性质控 标准工 作溶 液: 移取MDAI 、2-AI

9、 、5-EAPB 标准物 质 储备 液 各适 量 ,用定性 提 取 溶剂 稀释 ,分 别配 制成1ng/mL 的MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标准 工作 溶液 。0 4 冷藏保 存 , 有效 期7 天; 外 标单 点法 定量 用标 准工作 溶液 : 移取MDAI 、 2-AI 、 5-EAPB 标 准物 质 储 备液 各 适量 , 用 定 量提 取 溶剂 稀释 ,配 制 成0.1mg/mL 的MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标准 工作 溶液 。0 4 冷藏 保存 ,有 效期7天 ; 外 标标准 曲线法 定量 用标准工 作溶液 :移取MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标 准物

10、质 储备液 各 适量 , 使用 定量 提取 溶剂 稀 释, 配 制成 浓度 为0.01mg/mL0.5mg/mL 范围 的MDAI 、 2AI 、 5-EAPB 标 准 工作 溶液 ,至 少配制5个 浓度 。 5.2 材料 材料包 括: a ) 具盖离 心管 ; b) 容量瓶 ; c ) 有机系 微孔 滤膜 :0.22m ; d) 水系微 孔滤 膜:0.22m 。 6 仪 器和 设备 仪器 和 设备 包括 : a ) 液相色 谱仪 (LC ) : 配有 二极管 阵列 (DAD ) 或 紫 外检测 器 (UV) ; b) 液相色 谱- 质 谱仪 (LC-MS ):配 电喷 雾离 子源 ,具 备M

11、RM 检测 模式 ; c ) 电子天 平 : 定性 检验 实际 分度值d 0.1m g ,定 量检 验 实际分 度值d 0.01mg ; d) 离心机 ; GA/T 3 e ) 振荡器 ; f ) 真空抽 滤泵 ; g) 超声波 清洗 器; h) 移液器 或移 液管 。 7 操 作方 法 7.1 定性 分析 7.1.1 样品 制备 样品充 分均 质化 , 根 据实 际需求 , 称 取 10mg100mg 于具 盖离 心管 中 , 加入 10mL 甲 醇, 密封并 振 荡 5min , 以 不低 于 4000r/min 离心 5min , 取上 清液 , 用 定性 提取 溶剂 稀释 , 稀释液

12、经 0.22m 的 水系 微 孔滤膜 过滤 ,滤 液作 为样 品溶液 , 供 LC-MS 分析 。 7.1.2 仪 器检 测 7.1.2.1 液相 色谱- 质谱 仪条件 以下为 参考 条件 ,可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 : a ) 色谱柱 :Zorbax Eclipse Plus RRHD C 18 (1.8 m ,2.1 100mm )或 其他 等效 柱 ; 注: Zorbax Eclipse Plus RRHD C18 柱为 Agilent 公司产品的 商品名称,给出这一信息是为了方便本标准的使用者, 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相

13、同的效果,则可使用这些等效产品。 b) 柱温:40 C ; c ) 流动相 :A 为 甲酸- 乙酸 铵 缓冲液 ,B 为 0.1% 甲酸 甲 醇溶液 ; d) 洗脱: 梯度 洗脱 程序 见表 1; 表 1 梯度 洗脱 程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 95% 5% 0.5 95% 5% 5.0 75% 25% 12.0 40% 60% 13.0 20% 80% 14.0 10% 90% 14.5 0% 100% 16.0 0% 100% 16.01 95% 5% 20 95% 5% e ) 流速:0.4mL/min ; f ) 进样量 :1L ; g) 离子源 :电 喷雾 离子

14、源; GA/T 4 h) 检测模 式 : 正离 子模 式; i ) 毛细管 电压 :4000V ; j ) 干燥气 :10L/min ; k) 干燥气 温度 :350C ; l ) 雾化气 :25psi ; m ) MDAI 、2AI 的 离 子对 和 Fragmentor 电 压、 碰撞 能量 (CE ) :见表 2 。 表 2 质谱 参考 条件 名称 母离子 m/z 子离子 m/z Fragmentor 电压 V 碰撞能量 eV MDAI 178.1 161.0 80 10 103.0 35 2-AI 134.1 117.0 80 12 115.0 30 5-EAPB 204.1 159.

15、0 95 12 131.0 25 7.1.2.2 进样 分别吸 取样品 空 白 ( 定性 提取溶 剂 ) 、 样品 溶液、 标准溶液 空 白 ( 定性 提取 溶剂)和 定 性用 标准工 作溶液 , 按7.1.2.1 条件 进 样分析 。 或 根据 实际 需求 , 再 分 别吸 取标 准溶 液空 白 ( 定 性提 取溶 剂 ) 和 定 性 质控标 准工 作溶 液, 按7.1.2.1条件 进 行分 析。 7.2 定量 分析 7.2.1 外 标单 点法 7.2.1.1 含量 预分 析 根据实 际需 求, 称取 10mg100mg 样 品置 于具 盖离 心 管中, 加入 10mL 定 量提 取溶剂 ,

16、 密 封并 振荡 10min ,以 不低 于 4000r/min 离心 5min ,取 上清 液作 为样品 溶液 , 供 LC 分析 。或根 据实 际需 要, 将上 清液用 定量 提取 溶剂 稀释 , 稀释 液作 为样 品溶 液, 供 LC 分 析。 采用 外标 单 点法定 量用 标准 工 作 溶液 作 为定量 参照 。 按照公 式 (1) 计算 样品 中 目标物 的 预 分析 百分 含量 。 ( ) 3 02 + = 100% C A V V V A V m 0 1 2 (1 ) 式中: 样 品中 目标 物的 百分 含量, 用百 分比 (% )表示 ; C 0 外 标单 点法 定量 用 标

17、准工作 溶液 中目 标物 的浓 度,单 位为 毫克 每毫 升 (mg/mL ); A 样品溶 液中 目标 物的 色谱 峰面积 值; A 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的色 谱峰面 积值 ; V 1 样 品初 次定 容体 积, 单位为 毫升 (mL ); V 2 从 V 1 中移 取的 体积 , 单位为 毫升 (mL ) ; GA/T 5 V 3 将 V 2 稀释 时加 入定量提 取溶 剂 的 体积 ,单 位为 毫升 (mL ) ; m 样品 的 称 量重 量 , 单 位为毫 克 (mg ) 。 7.2.1.2 准确 定量 7.2.1.2.1 称 量重 量的计算 根

18、据 预 分析 中 目 标物 含量 测定结 果 , 选 择合 适的 定 容体积 、 稀释 倍数 ( 样品 提 取操作 参数 参见 附录 B 中表 B.1) , 并按 照公 式 (2) 计算 出样 品 称 量重 量 (m ) ,使 样 品溶 液中 目标 物的浓 度在 所用 标准 工作 溶液浓 度的 (100 30 )% 范围内。 0 C V D m = (2 ) 式中 : m 称量 重量 ,单 位为 毫 克 (mg ) ; C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的浓 度, 单 位为 毫克 每毫 升 (mg/mL ) ; V 初次 定容 体 积, 单位 为 毫升 (mL )

19、 ; D 稀释 倍数 ; 样 品中 目标 物的 预分 析百分 含 量 ,用 百分 比 (% )表示 。 7.2.1.2.2 样品 制备 根据 7.2.1.2.1 计 算结 果, 平 行称取 样 品 2 份 于具 盖离 心管中 (需 要对 定量 结果 进 行不确 定度 评定 时 , 至少平 行 称 取 6 份 ) 。 根 据 预分析 含量 结果 ,加 入相 应初次 定容 体积 的甲 醇, 密封并 振 荡 10min ,以不 低于 4000r/min 离心 5min , 取上 清液 作 为样 品溶 液 , 供 LC 分 析; 当 样品 溶液 需要稀 释时, 按照 稀释倍 数进行 稀释 定容 ,稀

20、释液 作为样 品溶 液, 供 LC 分析 。 7.2.1.2.3 仪 器检 测 7.2.1.2.3.1 液相 色谱 仪 条件 以下为 参考 条件 ,可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 : a ) 色 谱柱 :C 18 (5 m ,150mm 4.6mm ) ; 注: Poroshell 120 EC-C18 柱为 Agilent 公司产品的商品名称 , 给出这一信息是为了方便本标准的使用者, 并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品 。 b) 柱 温:30C ; c ) 流 动相 :A 为 0.1% 磷 酸水溶 液 ,B

21、为乙 腈; d) 洗 脱: 梯度 洗脱 程序 见表 3; 表 3 梯度 洗脱 程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 95% 5% 10 10% 90% 13 10% 90% 13.1 95% 5% 16 95% 5% GA/T 6 e ) 流 速:1.0mL/min ; f ) 进样 量:5L 。 7.2.1.2.3.2 进样 分别吸 取样 品空 白 ( 定量 提取溶 剂 ) 、 样品 溶液、 标准溶液 空白 ( 定量 提取 溶剂 ) 和外 标单 点法 定 量用标 准工 作溶 液, 按7.2.1.2.3.1 条件 进样 分析 。 当 称取2 份样 品时 ,每 份样 品 进样23 针。

22、 7.2.1.2.4 计 算含 量 按照公 式 (1) 计算 样品 中 目标物 百分 含量 。 7.2.2 外标 标 准曲 线 法 7.2.2.1 标准 工作 曲线 绘 制 按照7.2.1.2.3.1条 件分析5.1 中配制 的 外标 标准 曲线 法 定量用 标准工 作溶 液, 以 目标物 的峰面 积值 为 纵坐标 , 目标 物浓 度为 横 坐标 , 分别 绘 制成 线性 范 围为0.01mg/mL 0.5mg/mL 的MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标准工 作曲 线。 7.2.2.2 样品 制备 根据实际 需求, 平行 称取 样品2份各20mg200mg 于 具盖离心 管中, 加入50

23、mL 定量提取 溶剂 , 密封 并振荡10min , 以不 低于4000r/min 离心5min , 取 上清 液 用有机 系 微孔 滤膜 过滤 , 滤 液作 为样 品溶 液, 供 LC 分析 。 7.2.2.3 仪器 检测 7.2.2.3.1 液 相色 谱仪 条 件 同7.2.1.2.3.1 。 7.2.2.3.2 进样 分别吸 取 样 品空 白 ( 定量 提取溶 剂 ) 、样 品溶 液,按7.2.2.3.1 条 件进 样分 析 , 每 份样品 平行 进样23 针。 7.2.2.4 计算 含量 以 外标 标准 曲线 法定 量用 标准工 作溶 液 中 目标 物的 峰面积 值为 纵坐 标、 外标

24、 标 准曲线 法定 量用 标 准 工作溶 液 中 目标 物的 浓度 为横坐 标进 行线 性回 归, 得到线 性方 程。 根据 样品 溶液 中 目标 物的 峰面 积值 , 按公式 (3 )计 算出 样品 中 目标物 的百分 含量 。 100% Y - b V = am ( ) (3 ) 式中: 样 品中 目标 物 的 百分 含量, 用百 分比 (% )表 示; Y 样 品溶 液 中 目标 物 峰 面积 值 的平 均值 ; b 线 性方 程的 截距 ; V 样品 溶液 的定容 体积 , 单位为 毫升 (mL); a 线性 方程 的斜 率; GA/T 7 m 样品 的称 量重 量, 单 位为毫 克(

25、mg)。 8 结果 评 价与 表述 8.1 定性 结果 评价 阳性结 果评 价: 在相 同条 件下进 行测 定时 , 样 品溶液 中目 标物 与浓 度接 近的 定性用 标准 工作 溶液 中 的目标 物相 比 , 色 谱峰 保 留时间 一致 ( 相对 误差 在 2.5%之内 ) 、 定 性离 子对 (至 少两 对 ) 一致 , 且离 子 对丰度比 相对偏 差不超过 表4规 定的范 围 ,样品 空白 无干扰, 则可判 断样品中 检出目标 物。MDAI 、 2-AI 、5-EAPB 的 液相 色谱 图及MRM 色 谱图 参见 附录C 。 表 4 离子 对丰 度比 的最 大 允许相对 偏 差范 围 离

26、子 对丰度比 50% 20% 50% 10% 20% 1 0 % 最大允许相对偏差 20% 25% 30% 50% 阴性结 果评 价: 样品 溶液 中未检 出目 标物 特征 离子 对, 定 性质 控标 准工 作溶 液中检 出目 标物 特征 离 子对, 标准 溶液 空白 无干 扰,则 可判 断样 品中 未检 出目标 物。 8.2 定量 结果 评价 8.2.1 相 对相 差检 验 平行称 取2 份样 品时 , 测 定 数据按 照公 式 (4) 计算 相 对相差 (RD )。 12 100% - RD = (4 ) 式中: RD 相 对相 差, 用百 分比 (% ) 表示 ; 1 、 2 两份 样品

27、 平行 定 量测定 的含 量数 值; 两份 样品 平行 定量 测定 的含量 平均 值 ; 当RD 10% 时, 数据 有效 ; 当RD 10% 时,需 要 重 新检验 。 8.2.2 异 常值 检验 平行称 取6 份样 品时 ,测 定 数据按 照公 式 (5) 进行Grubbs 可 疑值 判别 。 i0 i - G= s (5 ) 式中 : i 可疑 值; 0 6 个 (5 个) 数据 的平 均值; s 6 个 (5 个) 数据 的单 次测定 标准 差; G i Grubbs 统 计值 。 当测定 次数n=6时,G 6 (95 )=1.822 ; 当测 定次 数n=5时,G 5 (95 )=1

28、.672。 G iG n (95 ) 时 ,数 据有 效,G i G n (95 ) 时, 应剔 除该 数 据,但 只能 剔除1个 数据 , 否则本 次测 定无 效 , 需要重 新检 验。 GA/T 8 8.2.3 定量 结 果计 算 平行称 取 2 份样 品时 , 以 2 份样 品含 量测 定的 平均 值作为 定量 结果 。 平行称 取 6 份样 品时 , 以 6 份(5 份 ) 样 品含 量测 定 的平均 值作 为定量 结 果。 8.3 结果 表述 阳性 结 果应 表述 为: 从样 品中检 出 MDAI/2-AI/5-EAPB 成分 。含 量 用 百分 比表 示。 阴性结 果应 表述 为:

29、 从样 品中未 检 出 MDAI/2-AI/5-EAPB 成分 。 8.4 测量 不确 定度 的评 定 与表述 如需提 供测 量不 确定 度, 定量结 果的 不确 定度 评定 与表述 按 GB/T 27418 执行。 GA/T 9 附录 A (资料 性) MDAI、2-AI 、5-EAPB 基 本 信息 MDAI 、2-AI 、5-EAPB 基 本信息 见 表 A.1 。 表A.1 MDAI 、2-AI 、5-EAPB 基 本信 息 中文名称 英文名称 化学式 结构式 CAS 号 5,6- 亚甲二氧基-2- 氨基茚满 MDAI C10H11NO2 132741-81-2 2- 氨基茚满 2-A

30、I C 9H 11N 2975-41-9 乙基氨基丙基苯并呋喃 5-EAPB C 13H 17NO 1823776-22-2 (盐酸盐) GA/T 10 附录 B (资料 性 ) 外标单 点法 样品 提取 操作 参数 外标单 点法 样品 提取 操作 参考参 数见 表 B.1 。 表B.1 外 标单 点法 样品 提取操 作参 考参 数 预分析含量 初次定容体积 mL 稀释倍数 外标单点法定量用 标准工作 溶液浓度 mg/mL 50% 100% 20 21 0.1 30% 50% 20 11 0.1 10% 30% 10 11 0.1 5% 10% 30 - 0.1 2% 5% 20 - 0.1

31、1% 2% 10 - 0.1 GA/T 11 附录 C (资料 性 ) MDAI、2-AI 、5-EAPB 相 关 谱图 C.1 MDAI 、2-AI 和 5-EAPB 的 液相 色谱 图见图 C.1 图 C.3 。 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 mAU 294nm,4nm (1.00) /5.140 图C.1 MDAI 的 液相 色谱 图 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min 0.0 2.5 5.0 mAU 265nm,4nm (1.00) /2.164 2-AI/4.792 图C.2 2-AI 的 液相 色谱 图 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min 0 10 20 30 40 mAU 254nm,4nm (1.00) /2.141 5-EAPB/7.508 图C.3 5-EAPB 的液 相色 谱图 GA/T 12 C.2 MDAI 、2-AI 和 5-EAPB 的 MRM 色 谱图 见图 C.4 图 C.6 。 图C.4 MDAI 的 MRM 色谱 图 图C.5 2-AI 的 MRM 色谱 图 图C.6 5-EAPB 的 MRM 色 谱图

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