1、 ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0098 2021 大麻的法 医学 STR 遗传标记 分型检验 要求 Requirements for genotyping of forensic STR markers for Cannabis sativa L. 2021 - 11 - 17 发布 2021 - 11 - 17 实施 中华人民 共和国 司 法部 发 布 SF/T 0098 2021 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规 范性 引用 文件 . 1 3 术 语和 定义 . 1 4 缩 略语 .
2、1 5 总 体要 求 . 1 6 检 验程 序 . 2 7 鉴 定意 见 . 3 8 鉴 定文 书 . 3 参考文 献 . 4 SF/T 0098 2021 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定 起草。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由司 法鉴 定科 学研 究院提 出。 本文件 由司 法部 信息 中心 归口。 本文件 起草 单位 ：司 法鉴 定科学 研究 院、 中国 农业 科学院 麻类 所 。 本文件 主要
3、起草 人： 张素 华、李 成涛 、潘 根、 向平 、施妍 、刘 希玲 、林 源、 阙庭志 、赵 珍敏 。 SF/T 0098 2021 1 大 麻的法 医学 STR 遗 传标记 分型检 验要求 1 范围 本 文件 规定了 大麻 样本进 行STR遗 传标 记分型 的总体 要求以 及 检验 程序 、 鉴定 意见 和 鉴定文 书 的 要 求。 本 文件 适用 于 法 医学 实验 室 对大 麻样 本进 行个 体识 别 。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本
4、 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 SF/T 0069 2020 法医 物 证鉴定 实验 室管 理规 范 SF/Z JD0105012 2018 个体识 别技 术规 范 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。 短串联 重复 序列 short tandem repeat ，STR 存在于 基因 组DNA 中 的一 类 具有长 度多 态性 的DNA序列. 注： 由2 6 个碱基的重复单位串联 构成。 基因座 locus 基因在 染色 体的 特定 位置 。 等位基 因 allele 同一 基 因座
5、 上存在DNA 一 级 结构差 异的 基因 。 似然率 likelihood ratio ，LR 评估遗 传标 记分 型提 供证 据强度 的指 标。 注： 数值上似然率是两个条件概率的比值，LR数值越大，越支持 原告假设。 4 缩略语 下列缩 略语 适用 于本 文件 。 DNA 脱氧 核糖 核酸 （Deoxyribonucleic Acid ） PCR 聚合 酶链 式反 应（Polymerase Chain Reaction ） RNA 核糖 核酸 （Ribonucleic Acid ） 5 总体要求 SF/T 0098 2021 2 鉴定人 应具 有法 医物 证鉴 定执业 资格 ，熟 悉并
6、掌握 基于毛 细管 电泳 进 行 STR 遗传标 记分 型检 测 的 方法和 原理 ，并 能正 确使 用分析 软件 对分 型结 果进 行分析 与评 价。 鉴定活 动应包 括检 验、 鉴 定意见 和鉴定 文书 撰写等 环节。 鉴定活 动完 毕后， 应将各 个环节 的记 录 进行归 档。 其中 ：检 验程序 、鉴 定意 见和 鉴定 文书 应符合 第 6 章 第8 章的 规定。 实验室 以及 样本 管理 、设 备管理 和质 量管 理等 应符 合 SF/T 00692020 的规 定。 6 检验程 序 采样要 求 样本的 采集 、包 装和 保存 要求如下 ： a) 样本可 为大 麻的 叶片 、 花和
7、果实等 组织 ， 也可 为大 麻植 物干品 和大 麻树 脂等 。 有条 件的情 况下 ， 宜选择 新鲜 的检 材； b) 样本应 分别 包装 ，注 明检 材的编 号、 采样 日期 和采 样人等 ； c) 样本采 集后 应干 燥保 存。 DNA 提 取和 纯化 6.2.1 样本前 处理 在DNA 提 取前 ，宜根 据样 本 的状态 与形态 采用 适宜的 方法（ 包括物 理法 、化学 法和 酶 解法等 ）破 坏 细胞壁 。 例 如： 大麻 新鲜 组织宜 经液 氮速 冻进 行研 磨粉碎 ； 陈 旧组 织在 研磨 过程中 ， 可 加入 石英 砂 进 行 共研 ， 更充 分地 破坏 细胞 壁；若 样本
8、为大 麻树 脂， 宜先采 用无 水乙 醚进 行脱 脂处理 。 6.2.2 DNA 提取 经6.2.1 处理 后 的 样本宜 采 用CTAB 法、SDS法 、高盐 低PH法和 碱裂解 法等 方法进 行大麻 基因组DNA 的 提取。 也可 采用 相关 商业 化植物DNA 提取 试剂 盒进 行 基因组DNA 的提 取。 6.2.3 DNA 纯化 宜采用 相关 商业 化试 剂盒 进行基 因组DNA 的纯 化， 以 去除蛋 白质 、RNA 、 酚类 物 质及多 糖等 成分 。 DNA 定量 宜采用 分光 光度 计对 DNA 样品进 行定 量并 检测 其纯 度，所 测得 的 OD260/OD280 比值
9、应在 1.8 2.0 范围内 。 若 OD260/OD280 比值低 于 1.8 ， 表明 提取 的DNA 中含 有蛋 白质 或糖 类等杂 质 ， 应做 进一 步 的 分 离纯化 ； 若 OD260/OD280 比值高 于 2.0 ， 表明 提取 的DNA 可能 有 RNA 污 染。 PCR 扩 增与PCR 产物 分型 6.4.1 基因座 应选用 多态 性STR 基 因座 进 行PCR 扩增 ，基 因座 选择 应 符合以下 条 件： a) 已有基 因座 定义 和其 特征 的文献 报道 ； b) 已实施 种属 特异 性、 灵敏 性 和稳 定性 研究 ； c) 已有可 供使 用并 公开 发表 的遗
10、传 学数据 ， 例如 ： 等 位基因 频率 ； d) 基因座 选用 三核 苷酸 重复 （ 例如 ：B05 CANN1 、ANUCS 305 、D02 CANN1 、B01 CANN1 、nH09 、 ANUCS 302 、E07 CANN1 、C11 CANN1 、H06 CANN2 、ANUCS 301 、ANUCS 303 、ANUCS 304 、ANUCS 306 和B02 CANN2 等） 、 四 核苷酸 重复 （ 例 如：1528 、9043、3735 、9269、4910 和 5159 等） 、 五 核苷 酸 重 复（ 例如 ：ANUCS 501 ）或 六核 苷酸 重复 （ 例如
11、：CS1 ） 等； e) 包含大 麻性 别判 断的 特异 性片段 （ 例 如：DM016 、DM029 和DM011 等 ）。 6.4.2 PCR 扩增 SF/T 0098 2021 3 对6.4.1 中 选用 基因 座进 行PCR扩增 要 求如 下： a) 应选用 商品 化试 剂盒 或自 行构建 并已 完成 法医 学验 证的检 测体 系进行 PCR 扩增 。检 测体 系 的 累积个 体识 别能 力不 应小 于 0.9999 ，计 算按 照 SF/Z JD0105012 2018 中第6 章的方 法执 行； b) 每批扩 增均 应设 置 阳 性对 照样本 和不含 大麻 基 因组 DNA 的阴
12、性对 照样 本 ， 其 中阳性 对照 样 本 是已知 浓度 和基 因型 的对 照品 DNA 或 以前 检验 过的 、已知 正确 基因 型的 样本 ； c) PCR 扩 增体 系与PCR 扩增 参数 应 按相关 操 作说 明进 行。 6.4.3 PCR 产 物分 型与 结果 判读 应 使用 遗传 分析 仪对PCR 扩增 产物 进行 毛细 管电 泳。 按照操 作手 册使 用相 关软 件进行 结果 判读 。 7 鉴定意 见 应根据 性别 判断 的特 异性 片段分 型结 果， 对大 麻样 本的性 别作 出判 断。 应 根 据DNA 分型 结果 ，对 样本是 否来 自同 一株 大麻 作出判 断。 具体
13、如下 ： a) 若两份 大麻 样本的DNA 分 型结果 不一 致， 鉴定 意见 可 表述为 “排 除两 份样 本来 自同一 株大 麻” ； b) 若两份 大麻 样本 的 DNA 分 型结果 一致 ， 应 按照SF/Z JD0105012 2018 中第 7 章的方 法计 算 LR 值，鉴 定意 见可 表述 为“LR 值为XXX ，不 排除 两者 来 源于同 一株 大麻 ”。 8 鉴定文 书 鉴定人 应根 据检 验结 果和 鉴定意 见撰 写鉴 定 文 书。 鉴定文 书的 格式 应按 照主 管部门 颁布 的相 关规定 执 行。 SF/T 0098 2021 4 参考文 献 1 Michele Di
14、 Nunzio, Madeline Roman, Rachel Houston, et al. European validation of a Cannabis sativa 13-locus STR multiplex kit for genetic identification: A preliminary study J. Forensic Sci Int Genet, 2019, 7(1): 224-226. 2 de Oliveira Pereira Ribeiro L, Avila E, Mariot R F, et al. Evaluation of two 13-loci S
15、TR multiplex system regarding identification and origin discrimination of Brazilian Cannabis sativa samples J. Int J Legal Med, 2020, 134:1603-1612. 3 Valverde L, Lischka C, Erlemann S, et al. Nomenclature proposal and SNPSTR haplotypes for 7 new Cannabis sativa L. STR loci J. Forensic Sci Int Genet
16、, 2014, 13:185-6. 4 Valverde L, Lischka C, Scheiper S, et al. Characterization of 15 STR cannabis loci: nomenclature proposal and SNPSTR haplotypes J. Forensic Sci Int Genet, 2014, 9:61-5. 5 Knight G, Hansen S, Connor M, et al. The results of an experimental indoor hydroponic Cannabis growing study, using the Screen of Green (ScrOG) method-Yield, tetrahydrocannabinol (THC) and DNA analysis J. Forensic Sci Int, 2010, 202(1-3):36-44.
