1、 ICS 67.120.20 CCS X 18 34 安徽省地方标准 DB34/T 4207 2022 鸡排泄物 中氧氟沙 星的含量 检测 高 效液相色谱-荧 光检测法 Determination of ofloxacin in excrements of chicken High performance liquid chromatography-fluorescence detection method 2022-06-29 发布 2022-07-29 实施 安徽省市 场监督 管 理局 发 布 DB34/T 4207 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化
2、工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由安 徽省 兽药 饲料 监察所 提出。本文件 由安 徽省 农业 农村 厅归口。本 文件 起草 单位：安徽 中 青检验 检测 有限 公司、安 徽省兽 药饲 料监 察所、安 徽天祥 检验 检测 有限 公司、望 江县 农产 品质 量安 全中心、安 徽省 农业 科学 院畜牧 兽医 研究 所、安徽 农业大 学、阜阳 市农 业 综 合行政执 法监 督支 队、泗 县 草沟镇 畜牧 兽医 水产 站、定远县 康源 农牧 科技
3、股份 有限公 司、合 肥市 动物 疫 病预防控 制中 心。本 文件 主要 起草 人：许世 富、潘 孝成、谢 军池、王 媛媛、韩素 珍、凃健、许 晓靖、祁钊、吴 昊、刘发全、马腾 飞、郝金 华、陈守美、谢 俊东、宋 亚伟。DB34/T 4207 2022 1 鸡排泄物 中氧氟 沙星的含 量检测 高效液相色 谱-荧光检测 法 1 范围 本 文件 规定 了 鸡 排泄 物中 氧氟沙 星含量 的 高效 液相 色谱-荧光 检测 方 法。本 文件 适用 于 鸡 排泄 物中 氧氟沙 星含量 的 测定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条
4、款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 6682 分析 实验 室用 水规格 和试 验方 法 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 原理 试样中 的 氧 氟沙 星 用 乙酸 甲醇溶 液 超 声提 取，经离 心、过 滤、浓缩 后，高效 液相 色 谱分 离，用荧光检测器 测定，外 标法 定量。5 试剂和 材料 除特殊 说明 外，本方 法所 用试剂 均为 分析 纯，水为 符合 GB/T 6682 规 定的 一 级水。试剂 5.1.1 乙腈：
5、色谱 纯。5.1.2 甲醇。5.1.3 乙酸。5.1.4 盐酸。5.1.5 磷酸：85。5.1.6 三乙胺。溶液配 制 5.2.1 0.1 mol/L 盐酸 溶液：取 盐酸 9 mL，加 水稀 释到 1000 mL，混匀。5.2.2 20 乙酸 甲醇 溶液：取 乙 酸 200 mL，加 入甲 醇溶 液 至 1000 mL，混匀。5.2.3 0.02 mol/L 磷 酸溶 液：称取 85 的 磷酸 2.31 g，加水溶 解并 定容 至 1000 mL，混 匀。5.2.4 三乙胺 磷酸 溶液：取 0.02 mol/L 磷 酸溶 液 1000 mL，加入 1.4 mL 三乙 胺，混匀。DB34/T
6、4207 2022 2 5.2.5 流动相：分 别取 乙腈 和三 乙胺磷 酸溶液（5.3.4）按 体积比 10：90 混匀。标准 品 及标 准溶 液配 制 5.3.1 标准品：氧 氟沙 星标准 品（CAS 号：82419-36-1），纯度 98.0。5.3.2 标准储 备液（0.5 mg/mL）：取氧 氟沙 星标准 品 10 mg，精 密称 定，用 1 mL 的 0.1 mol/L 盐酸溶解 后，加水 稀释 并定容 至 20 mL 容 量瓶，配 制 成浓度 为 0.5 mg/mL 的 标 准储备 液，于 4 避 光保存，有 效期 3 个月。5.3.3 标准工作 液（10 g/mL）：准确 量取
7、 上述 标准 储备 液（0.5 mg/mL）1 mL，加水稀 释 并 定容 至50 mL 容量 瓶，配制 成浓 度为 10 g/mL 的标 准工 作液，于 4 避光 保存，有 效期 1 个月。6 仪器和 设备 高效液 相色 谱仪：配 荧光 检测器。分析天 平：感量 0.1 g、0.1 mg、0.01 mg。高速冷 冻离 心机：16000 r/min。超声波 仪。氮吹仪。涡旋混 合仪。无机滤膜：0.45 m。7 试样的 制备 与保 存 试样的 制备 取适量 新鲜 或解 冻的 空白 或供试 鸡排 泄物，混匀，如下：取混匀 后的 供试 样品，作 为试样；取混匀 后的 空白 样品，作 为空白 试样；取
8、混匀 后的 空白 样品，添 加适宜 浓度 的标 准工 作液，作为 空白 添加 试样 作为 空白试 样。试样的 保存-18 以下 保存，3 个月 内进行 分析 测试。8 测定步骤 提取 称取 5 g（精 确至 0.1 g）鸡 排 泄物 样品，加 入 20 乙 酸甲 醇溶 液（5.3.2）10 mL，以 2500 r/min 涡旋 混匀 30 s，超 声溶解 15 min，以 5000 r/min 离心 5 min，取 8 mL 上清 液氮 气吹 干，加流动相 1 mL，以 2500 r/min 涡 旋混 匀 30 s，超 声 溶解 15 min，以 16000 r/min 4 离心 10 min
9、，取上清 液过 0.45 m 的 滤 膜，供 高效 液相 色谱 仪测 定。测定 8.2.1 色 谱条 件 DB34/T 4207 2022 3 色谱柱：C18 柱（250 mm4.6 mm，5 m）或 相当 者；检测波 长：荧光 激发 波长 为 280 nm，发 射波 长为 450 nm；流动相：乙腈-三乙 胺磷 酸 溶液（5.3.4），按 体积 比 10：90（v/v）；流速：1.0 mL/min；柱温：30；进样 量：20 L。8.2.2 测定法 取试样 溶液 和 标 准工 作溶 液分别 进样，得到 色谱 峰 面积响 应值，在线 性范 围 内，用外 标法 作单 点或多点校 准，以保 留时
10、间定 性，峰 面积 定量。氧 氟沙 星 标准 色谱 图见 附录A中图A.1。空白试 验 取空白 试样，除 不加 标准 溶液外，采 用相 同的 测定 步骤进 行平 行操 作。9 结果的 计算 与表 述 试样中 氧氟 沙星 的含 量利 用数据 处理 系统 计算 或按 式(1)计算：=1 31000 2 1000(1)式中：X 试 样中 被测 组分 的 含量，单位 为微克 每 千克（g/kg）；C 试 样溶 液中 氧氟 沙 星的 浓 度，单位 为纳克 每 毫升（ng/mL）；V1 提 取液 体积，单 位 为毫升（mL）；V2 取 出上 清液 体积，单位为 毫升（mL）；V3 试 样定 容体 积，单 位为毫 升（mL）；M 试 样取 样质 量，单 位为克（g）。10 灵敏度、准 确度 和精密 度 灵敏度 本方法 的检 出限 为 10 g/kg，定 量限 为 20 g/kg。准确度 本方法 在鸡 排泄 物 20 g/kg 100 g/kg，添 加浓 度 的回收 率为 80 110。精密度 本方法 的 批 内、批间 相对 标准偏 差均 10。DB34/T 4207 2022 4 附录A（资料 性）氧氟沙 星标 准溶 液的 图谱 见图A.1。图A.1 氧氟沙 星 标 准溶 液（100 ng/mL）的 液相 色谱 图
