1、ICS 67.200.20 X 14 中华人民直t./飞、和国国家标准GB/T 21498-2008/ISO 14902: 2001 大豆制品中膜蛋白酶抑制剂洁性的测Determination of trypsin inhibitor activity of soya products 。SO14902: 2001 , IDT) 2008-03-06发布2008-08-01实施令州圣飞fl.; 主二，吞没拔黯程草草击蹄数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检夜总局中国国家标准化管理委员会标准搜搜网WWTN.bzsos口.COlTl各类标准行业资料免费下载发布 GB/T 21498-2008
2、/ISO 14902: 2001 1 范围大豆制品中膜蛋白酶抑制剂活性的测定本标准规定了大豆制品中膜蛋白酶抑制剂活性的测定方法。膜蛋白酶抑制剂活性可以用来表示大豆制品的烘烤程度。本标准适用于大豆制品中膜蛋白酶抑制剂活性的测定。本方法的检出限为0.5mg/g。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-1
3、992，旦eqISO 3696: 1987) 3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 膜蛋白酶抑制剂活性trypsin inhibitor activity, TIA 按照本标准所规定的程序测出的膜蛋白酶抑制剂质量除以试祥质量所得的值。注:膜蛋白酶抑制剂活性以mg/g表示。4 原理在pH9.5条件下，从样品中提取膜蛋白酶抑制剂。通过加入底物苯甲酷-L-精氨酸-对硝基苯胶(L-BAPA)测量残余的膜蛋白酶活性。用分光光度法测定释放的对硝基苯胶的量。5 试剂和材料仅使用分析纯试剂。5. 1 水:最低3级，符合GB/T6682要求。5.2 氢氧化纳溶液:c(NaOH)=O.01 mol/
4、L。5.3 盐酸溶液:c(HCl)=6 mol/Lo 5.4 盐酸溶液:c(HCl)=1 mol/L。5.5 盐酸溶液:c(HCl)=O.lmol/L。5.6 盐酸溶液:c(HCl)=0.001 mol/L。5. 7 乙酸溶液:c(CH3 COOH) = 5. 3 mol/L。5.8 氯化钙(CaCb 2H20)。5.9 氯化钙盐酸溶液:称取O.735 g氯化钙(5.8)溶解于1L 0.001 mol/L盐酸溶液(5.6)中，调节pH至3.0士O.1。1 标准搜搜网各类标准行业资料免费下载 G/T 21498-2008/180 14902: 200 1 溶液(5.2)，将试样充分悬浮。用1
5、mol/L盐酸溶液(5.4)和0.1mol/L盐酸溶液(5.5)调节pH至9. 5士O.1。用尽量少的水冲洗电极。将锥形瓶密封后置于冰箱(6.3)中过夜(15h,._, 24 h)。在冰箱中放入适量的水以供制备样品提取液用。将样品提取液转移至100mL容量瓶(6.1)中，用在冰箱中冷却过的水稀释至刻度，混匀。将容量瓶保存于冰箱中，样品提取液可保存1d。经过15min的沉淀，可进一步处理样品提取液，并根据需要稀释。稀释度取决于预期的样品TIA值，在室温下用水稀释。9.3 样品提取液的稀释估计样品的TIA值，参照表A.1稀释方案将样品提取液稀释三个不同稀释度，以便在三个抑制百分率中至少有一个TIA
6、值的测定结果在40%，._，60%之间。如果三个测定结果中没有一个落在此范围内，则需要改变估计值并重新测定。9.4 膜蛋白酶使用液活性的测定检查每一批膜蛋白酶(5.10)的活性。使用液的吸光度和空白液的吸光度之间的差异(Ar-Abr)应为0.380土0.050，否则，需要检查膜蛋白酶的质量。必要时，取用一瓶新鲜的膜蛋白酶。依据表1吸取一定的溶液加入至离心试管中。表1膜蛋白酶使用液活性测定时各溶液加入量表单位为毫升加人物空自标准标准L-BAPA溶液(5.17) 5 5 水(5.1) 3 3 乙酸(5.7) 1 。用涡旋1混昆合器(6.5)混匀离心试管中的溶液，并置于水浴(6.8)中保温1omin
7、 在空白管中和标准管中各加入1mL膜蛋白酶使用液(5.12)，用涡旋混合器(6.5)将管内溶液?混昆匀。将离心管放回到水浴中。在保温10min士5s后。在标准管中加入1mL乙酸溶液，用涡旋混合器(6.5)混匀。将离心管置于离岳机(6.10)中，以径向加速度约为1500 gn离心10min。用分光光度计(6.6)，于410nm，用10mm比色皿(6.2)，以水调零，测定上清液的吸光度。该溶液可保持稳定至少2h。9.5 膜蛋白酶抑制剂活性的测定按表2吸取一定的溶液加入至各离心管中。每一样品提取液(9.3)的稀释液均需准备相应的空白溶液。样品提取液和相应的空白溶液在测定过程中应同时进行操作(包括离心
8、。表2膜蛋白酶抑制剂活性测定时各溶液加入量表单位为毫升加人物空白标准标准空白样品样品L-BAPA溶液(5.17) 5 5 5 5 试样稀释液。1 1 水(5.1)3 3 2 2 乙酸溶液(5.7) 1 。用涡旋混合器(6.5)混匀离心试管中溶液，并置于水浴(6.8)中保温10min。在上述试管中各加入1 mL膜蛋白酶使用液(5.12)。用涡旋混合器将管内溶液混匀后，将试管放回到水浴(6.8)中。保温10 min士5s后，在标准管中和样品管中加入1mL乙酸溶液，混匀。将离心管置于离心机(6.10)中，以径向加速度约为1500gn离心10min。用分光光度计(6.6)，于410nm，用10mm比色
9、皿(6.2)，以水调零，测定上清液的吸光度。3 标准搜搜网WWTN.bzsos口.COlTl各类标准行业资料免费下载 12 检验报告检验报告应详细说明:一一应包括鉴定样品所必需的全部信息;一一一采样方法(如己知); 一一本标准所涉及的测定方法;G/T 21498-2008/ISO 14902: 200 1 一一还应说明本标准中没有具体说明的、或者被认为是可选性的，以及所有可能影响了测试结果的操作细节;酬翩翩帕瓦一一测定结果。如果进行了5 标准搜搜网WliM.bzsos口.corn各类标准行业资料免费下载 GB/T 21498-2008/ISO 14902: 200 1 7 标准搜搜网各
10、类标准行业资料免费下载5 24 100 nunununununununu 98765432 (JECCHJE)(民)剧院嚣组团军唔非 GB/T 21498-2008/ISO 14902: 2001 参考文献lJ KAKADE M L , SIMONS N , LIENER 1 E. An evaluation of natural vs. synthetic substrates for measuring the antitryptic activity of soybean samples. Cereal Chem. ,46 ,1969 , 518-526. 2J SMIT丑C，VAN
11、 MEGEN W , TWAALFHOVEN L , HITCHCOCK C. The determination of trypsin inhibitor levels in foodstuffs. J. Sci. Food Agric. ,1980 ,31: 341-350. 3 J ISO 5725-1: 1994 , Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results一Part 1: General principles and definitions. 4J ISO 5725-2: 1994 , A
12、ccuracy (trueness and precision) of measurement methods and results一Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard meas uremen t method. 5J ISO 6497 ,Animal feeding stuffs- Sampling. 6J ISO 6498 :1 983 ,Animal feeding stuffs-Preparation of test sample. 9 标准搜搜网各类标准行业资料免费下载 标准资料收藏家易启标准网免费提供十万标准书籍资料下载会打字、5分钟快速自助建网站易启建站网免费提供建站平台，商业网站1年仅60元
