1、GB/T 4789.7-2003 48 前言本标准对GB/T4789.7-1994(食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验进行修订。本标准与GB/T4789. 7-1994相比主要修改如下一一按照GB/T1. 1-2000对标准文本格式和文字进行修改。一一修改并规范原标准中的设备和材料。将本标准的适用范围修改为本标准适用于动物性水产干制品、脆醉制生食动物性水产品、即食藻类食品、鱼廉制品等水产食品和水产调味品以及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验.本标准自实施之日起，GB/T4789. 7二1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位g中国疾病预防控制中心营养与食品安全所
2、。本标准主要起草人z周桂莲、付手李、杨宝兰。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。GB/T 4789. 7-2003 食品卫生微生物学检验副溶血性弧1 范围本标准规定了副溶血性弧菌检验方法。本标准适用于动物性水产于制品、脆醉制生食动物性水产品、即食藻类食品、鱼康制品等水产食品和水产调味品以及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文
3、件，其最新版本适用于本标准。GB/T 4789. 28-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3. 1 冰箱。C4C。3.2 恒温培养箱:土1C。3.3 显微镜:10X100X。3.4 均质器或灭菌乳钵。3.5 架盘药物天平:0g500 g.精确至0.5go 3.6 灭菌试管:16 mmX 160 mm、15mmX100 mm及相应的试管架。3. 7 灭菌刻度吸管1mL(具0.01mL J度)、5mL、10mL(具0.1mL刻度)。3.8 灭菌锥形瓶:500mL、200mLo3.9 灭菌玻璃珠z直径约5mm。3. 10 灭菌培养皿:90mm。3. 11 1 mL注射器
4、.3. 12 接种灯和接种环。3. 13 灭菌手术剪、慑子等。3. 14 小白鼠:12g15g。4 培养基和试剂4. 1 氯化销结晶紫增菌液2按GB/T4789. 28-2003中4.39规定。4.2 氯化销llf.糖琼脂g按GB/T4789. 28-2003中4.40规定。4.3 嗜盐菌选择性琼脂2按GB/T4789.28-2003中4.41规定。4.4 3.5%氯化纳三糖铁琼脂.按GB/T4789. 28-2003中4.42规定。4.5 氯化纳血琼脂g按GB/T4789. 28-2003中4.43规定。4.6 嗜盐性试验培养基2按GB/T4789. 28-2003中4.44规定。4.7 3
5、.5%氯化锁生化试验培养基z按GB/T4789. 28-2003中4.45规定。4.8 革兰氏染色液2按GB/T4789. 28-2003中2.2规定。49 GB/4789.7-2003 4.9 甲基红试弗:按GB/T4789. 28-2003中3.4规定。4. 10 援基质试剂g按GB/T4789. 28-2003中3.13规定。4.11 V-P试弗:按GB/T4789. 28-2003中3.4规定。5 栓瞌程序副溶血性弧菌检验程序见图10样晶25g (mL)+ 225 mL3. 5.豆苗盐水，磨碎氧化蛐蜡晶置3TC 精菌擅lOOmL8 h 16 h 撞片草兰民染色幢幢形矗生化试验动物试验报
6、告圈16 操作步骤氧化铀煎糖琼腊平握和选择性琼脂平板37它.18h- 4h 3.5氧化蛐二糖铁制面_. -,-4h 晴盐性试验6. 1 分离培养g以无菌操作取检样25g(mL)，加225mL 3. 5%灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化销琼脂平板和嗜盐菌选择性琼脂平板各一个，同时取10mL，加入100mL增菌液中，置37(; 8 h16 h培养后，涂上述平板进行分离，于37(;18 h24 h培养后取出观察。6.2 挑取上述可疑菌落，转种3.5%氯化销三糖铁斜面，37(;、24h观察结果。6.3 涂片镜检g将三糖铁培养基反应可疑者(底层变黄葡萄糖产酸不产气，斜面不变乳糖煎糖不分解，有
7、动力，不产生硫化氢进行涂片革兰氏染色镜检形态。6.4 嗜盐性试验2将上述可疑培养物分别接种于不同浓度的盐陈水中，37(;24 h培养后观察生长情况，在无盐和10%以上盐的陈水中不生长，在7%盐的陈水中生长良好者进行下列有关试验。6.5 生化试验2分别接种各类生化培养基，置37(;，除v-p、能基质、甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均可在24h观察。具体内容见表l和表2。50 GB/T 4789. 7-2003 表1111溶血性弧菌的生化学性状葡萄糖产酸+ v-p 葡萄糖产气+ 能基质m; 糖赖氨酸+ 乳糖鸟氨酸+/一甘露醇+ 精氨酸硫化氢溶血+/-一甲基红+ 注，+阳性$阴性，+/一多
8、数阳性，少数阴性，褒2副溶血性弧菌主要性状与其他弧茵的鉴别阿元盐陈水i(%)化氧酶赖氨精氨酸鸟氨酸能基甘露酶甘露糖李糖鼠硝酸名称胶明V 乳R糖E 肌醇泳盐陈水糖动酸质F 盐6 1 8 110 副溶血性弧菌+ + + + + + d + + d + + V.阳rahaemolyticus溶藻性弧菌+ + + + + + + + + + + + + + V. a1ginolyticus 0，霍乱弧菌+ + + 十+ d (d) + + + + + + d V. cholerae 01 十+ + + + d (d) + + d 十+ + d 非0，霍乱弧菌+ + 十十+ (d) + + + 十+ d
9、 V. cholerae non 01 拟态弧菌+ d + d + + + 十d d 十十十+ d V. mimicus 问弧菌+ + 十+ 十+ d d + + + d V. fluialis 创伤弧菌d + d 十+ d + + d d d d V. uuluificus 梅氏弧菌+ + + + + d V. metschnikouii 霍利斯弧菌+ d + + 十+ d V. 1wllisae V. damsela 注E十90%以上阳性，-90%以上阴性，d11%-89%阳性;(+)迟缓阳性;(d) 11 % -89 %迟缓阳性。7 动物试瞌将上述各类反应的副溶血性弧菌接种3.5%氯化销陈水，经37C16 h 18 h培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2d3 d，将死亡小鼠进行解剖并做分离培养。51
