1、ICS 65120B 46 园雪中华人民共和国国家标准GBT 94542008代替GBT 9454-20002008-12-31发布饲料添加剂 维生素EFeed additive-Vitamin E2009-05-01实施宰瞀髁紫瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会仅19刖 置GBT 9454-2008本标准代替GBT 9454-2000(饲料添加剂维生素E(原料)。本标准与GBT 9454 2000相比主要变化如下：更正了维生素E的结构式，并增加了化学名和英文名；删去原标准含量测定试验中4412及4422中的方法，增加了毛细管气相色谱法；增加了维生素E标准品的红外吸收光谱图、气相色谱图及高
2、效液相色谱图作为资料性附录；增加了用高效液相色谱法测定维生素E含量作为第二法，气相色谱法测定维生素E含量作为第一法(仲裁法)；增加了折光率测定步骤；增加了卫生指标(重金属)要求及相应的测定方法。本标准的附录A、附录B和附录C是资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SACTC 76)提出并归口。本标准起草单位：上海市兽药饲料检测所、中国饲料工业协会、帝斯曼维生素(上海)有限公司、浙江新和成股份有限公司、浙江医药股份有限公司新昌制药厂。本标准主要起草人：王蓓、商军、华贤辉、潘娟、粟胜兰、陈晓莉、虞哲高、杨金枢、梅娜。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 94541998、GBT
3、 9454-2000。饲料添加剂维生素EGBT 9454-20081范围本标准规定了饲料添加剂维生索E产品的要求、试验方法、检验规则以及标签、包装、运输和贮存。本标准适用于由2，3，5-三甲基氢醌与异植物醇为原料，经化学合成制得的df一”生育酚醋酸酯。本产品在饲料工业中作为维生素类饲料添加剂，也可作为抗氧化剂。化学名：dza一生育酚醋酸酯(又名dz一”生育酚乙酸酯)。英文名：dlaTocopherol Acetate。分子式：CalHj203。相对分子质量：47275(按2001年国际相对原子质量表)。结构式：HaCH3C2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是
4、注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 601化学试剂标准滴定溶液的制备GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD)GB 10648饲料标签3要求31性状微绿黄色或黄色的黏稠液体，几乎无臭，遇光色渐变深；在无水乙醇、丙酮、乙醚或石油醚中易溶，在水中不溶。32技术指标主要技术指标见表1。表1技术指标项 目 指 标l含量(以cn Hs。O。ii-)“ 92ol折光率n哿
5、) 1494I499GBT 9454-2008表1(续)项 目 指 标吸收系数(Ei) 4I0450酸度(消耗01 moLL氢氧化钠滴定液的体积)mL 20生育酚(稍耗001 molL硫酸铈滴定液的体积)mL 10重金属(以Pb计) 00014试验方法本标准所用试剂和水，未注明其要求时，均指分析纯试剂和符合GBT 6682中规定的三级水。色谱分析中所用水均为符合GBT 6682中规定的一级水。41鉴别试验411试剂和溶液4111无水乙醇。4112乙醇。4 113硝酸。4114乙醚。4115 2，2。联吡啶的乙醇溶液：5 gL。称取2，2。联吡啶05 g，加乙醇(4】12)25 mL使溶解。41
6、16三氯化铁的乙醇溶液：2 gI。称取三氯化铁01 g，加乙醇(4112)50mL使溶解。4117氢氧化钾的乙醇溶液：05 molL。取氢氧化钾35 g，置锥形瓶中。加乙醇适量使溶解并稀释成100 mL，用橡皮塞密塞，静置24 h后，迅速倾取上清液，置于具橡皮塞的棕色玻瓶中。4118溴化钾(光谱纯)。412仪器和设备4121红外分光光度仪：扫描范围为4 000 cln一1400 c133，扫描次数为32，分辨率为4000。4122分析天平：感量为01 mg，001 mg。413鉴别步骤4131称取试样约30 mg，加无水乙醇(4111)10 mL溶解后，加硝酸(4113)2 mL，摇匀，在75
7、水浴中加热约15 min，溶液显橙红色。4132称取试样约10 mg，加氢氧化钾的乙醇溶液(4117)2 mL，煮沸5 rain，放冷，加水4 mL与乙醚(4114)10 mL，振摇，静置使分层；取乙醚层2 mL，加2，2。联吡啶的乙醇溶液(4115)数滴与三氯化铁的乙醇溶液(411，6)数滴，应显血红色。4133红外鉴别：采用膜法制样，试样的红外吸收图谱应与对照品的图谱一致(图谱参见附录A)。42维生素E含量的测定421试剂和溶液4211甲醇(色谱纯)。421。2生育酚醋酸酯标准品(含量980)。4213正三十二烷。4214正己烷(色谱纯)。422仪器和设备4221气相色谱仪：配置氢火焰离子
8、化检测器(FID)。4 222高效液相色谱仪：配置紫外检测器(uV)。4223柱温箱。4224微孔滤膜：孔径045 ttm。，GBT 945420084225超声波水浴发生器。423第一法气相色谱法(仲裁法)4231内标溶液制备取正三十二烷(4213)适量，加正己烷(4214)溶解并稀释成每毫升中含有10 mg正三十二烷的溶液，摇匀。作为内标溶液。4232标准溶液制备取生育酚醋酸酯标准品(4212)约20 rag(精确至0000 02 g)，置棕色具塞瓶中，精密加入内标溶液(4231)1000 mL，密塞，振摇使溶解。423S试样溶液制备取试样约20rag(精确至0000 02 g)，置棕色具
9、塞瓶中，精密加入内标溶液(4231)1000mL，密塞，振摇使溶解。4234色谱条件与系统适用性试验42341色谱条件色谱条件如表2所示。表2色谱条件色谱柱 填充柱 毛细管柱固定相 硅酮(OV-17)，涂布浓度为2 lOO二甲基聚硅氧烷柱长：2 m3 m，内径；3 mm5 1rim， 柱长：30 m，内径：025ram规格粒径：60目100目 膜厚：025 pmo35zm柱箱温度 265 280290进样口温度 275285 290300检测器温度 275285 290300载气(N。)流速 60 mLmin 12 mLmln进样量 1 pL3 pL 1uL42342系统适用性试验取标准溶液(
10、4232)，按色谱条件(4z，3。41)连续注样3次5次。填充柱、理论塔板数按生育酚醋酸酯峰计算应不低于500，生育酚醋酸酯峰与内标物质峰的分离度应大于2。毛细管色谱柱、理论塔板数按生育酚醋酸酯峰计算应不低于5 000，生育酚醋酸酯峰与内标物质峰的分离度应大于2。4235测定步骤取标准溶液(4232)及试样溶液(4233)，分别连续注样3次5次，按峰面积计算校正因子，并用其平均值计算试样中维生素E的含量(图谱参见附录B)。4236计算和结果的表述42361计算公式维生素E含量x，以质量分数()表示，按式(1)、式(2)计算。x，=，拳舞， A1”2P，。一 Az”1式中：x，试样中维生素E含量
11、，；，维生素E的质量校正因子；A。标准溶液中内标物的峰面积；GBT 9454-2008A：标准溶液中生育酚醋酸酯标准品的峰面积；A。试样溶液中生育酚醋酸酯的峰面积；A。试样溶液中内标物的峰面积；m，标准溶液中内标物的质量，单位为克(g)；m z标准溶液中生育酚醋酸酯的质量，单位为克(g)；P。维生素E标准品含量，；m。试样溶液中试样的质量，单位为克(g)；m。试样溶液中内标物的质量，单位为克(g)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。423G2允许差同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果相对偏差不大于15。424第二法高效液相色谱法4241标准溶液制备取生育酚醋酸酯标准
12、品(4212)约20 mg(精确至0000 02 g)，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇(4211)适量溶解，用甲醇(4211)稀释至刻度，摇匀。42，42试样溶液制备取试样约20 mg(精确至0000 02 g)，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇(4，211)适量，置超声波水浴发生器(4225)中助溶10 rain，冷却至室温，用甲醇(4211)稀释至刻度，充分摇匀；经045 pm滤膜(4224)滤过，滤液作为试样溶液。4243色谱条件与系统适用性试验42431色谱条件色谱柱：C18柱(长：150 mm，内径：46 mm，粒径：4 pm5Lm)；流动相：甲醇+水=98+2；流速：12 m乙min
13、；柱温：30土2；检测波长：285 nm；进样量：20 pL。42432系统适用性试验取标准溶液(4241)，按色谱条件(42431)连续注样3次5次，在01 mgmL08 mgmL浓度范围内，理论板数按生育酚醋酸酯峰计算应不低于1 200，生育酚醋酸酯峰和游离生育酚峰的分离度应大于15。4244测定步骤取标准溶液(4241)及试样溶液(4242)分别注入液相色谱仪，得到色谱峰面积(A。A)，用外标法计算(图谱参见附录c)。4245计算和结果的表述42451计算公式维生素E含量x：以质量分数()表示，按式(3)计算。xz一戋P灿。式中：x：试样中维生素E含量，；m。标准品质量，单位为克(g)；
14、m试样质量，单位为克(g)；4GBT 9454-2008P。生育酚醋酸酯标准品含量，；A试样溶液中生育酚醋酸酯的峰面积；A，。标准溶液中生育酚醋酸酯的峰面积。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。42452允许差同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果相对偏差不大于15。43折光率的测定431仪器和设备4311阿培折光计或与其相当的仪器：采用钠光谱的D线(5893 nm)，读数能至0000 1，测量范围1300 o1700 0的折光计，取试样测定时应调节温度至2005。432测定步骤测定前，折光计读数应使用校正棱镜或水进行校正，水的折光率20时为1333 0。取试样滴1滴2
15、滴于下棱镜镜面上，将上下棱镜关合，拉紧扳手，转动刻度调节钮，将读数置于试样折光率附近，旋转补偿旋钮，使视野内彩虹消失，并有清晰的明暗分界线，再转动刻度尺的调节钮，使视野的分界线恰位于视野内十字交叉处，读取并记录读数，反复测定3次，3次读数的平均值(必要时经校正)即为试样折光率的测定结果。44吸收系数的测定441试剂和溶液4411无水乙醇。442仪器和设备4421紫外分光光度计。443测定步骤取试样约150 mg(精确至0000 2 g)，置100 mL棕色量瓶中，加无水乙醇(4411)溶解并稀释至刻度，充分摇匀；精密量取上述溶液1000 mL，置100 mL棕色量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，充
16、分摇匀。将此溶液置l cm石英皿中，以无水乙醇作空白对照，在284 nm的波长处测定吸光度。444计算和结果的表述试样的吸收系数以E1表示，按式(4)计算。Ei一彘式中：Ei试样的吸收系数，即溶液浓度1(gmL)，光路1 cm时的吸收系数；A试样的吸光度；C100 mL溶液中含有试样的质量，单位为克(g)；L光路的长度，单位为厘米(cm)。45酸度的测定451试剂和溶液4511乙醇。4512乙醚。4513氢氧化钠标准滴定溶液：c(NaOH)一01 molL，按GBT 601的规定制备和标定。4514酚酞指示液：取酚酞1 g，加乙醇100 mL使溶解，即得。452测定步骤取乙醇(4511)与乙醚
17、(4512)各15 mL，置锥形瓶中，加酚酞指示液(4514)05 mL，滴加氢氧化钠标准滴定溶液(4513)至微显粉红色，加试样10 g，溶解后，用氢氧化钠标准滴定溶液5GBT 9454-2008(4513)滴定至微显粉红色，记录加试样后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，应不大于20 mL。46生育酚的测定461试剂和溶液4611无水乙醇。4612二苯胺溶液：取二苯胺1 g，加硫酸100 mL使溶解，即得。4613硫酸铈标准滴定溶液：crCe(Sq)。4H：O一001 toolL，按GBT 601的规定制备和标定。462测定步骤取试样01 g(精确至0001 g)，加无水乙醇(4611)5 m
18、L溶解后，加二苯胺溶液(4612)l滴，用硫酸铈标准滴定溶液(4613)滴定至显紫色，消耗的硫酸铈标准滴定溶液不大于10 mL。47重金属测定471试剂和溶液4711硝酸铅。4712硫酸。4。713盐酸。4714硝酸。4715氨溶液：取氨水400 mL，加水成1 000 mL。4716酚酞指示液：取酚酞1 g，加乙醇100mL溶解，即得。4717醋酸盐缓冲液：pH一35，取醋酸铵25 g，加水25mL溶解后，加7molL盐酸溶液38mL，用2 moIL盐酸溶液或5 molL氨溶液准确调节pH值至35(电位计指示)，用水稀释至100 mL，即得。47。18硫代乙酰胺溶液：取硫代乙酰胺4 g，加水
19、使溶解成100 mL，置冰箱中冷藏保存。临甩前取混合液(由1 molL氢氧化钠15 mL、水5 mL及甘油20 mL组成)50 mL，加上述硫代乙酰胺溶液10 mL，置水浴上加热20 S，混匀，冷却，立即使用。472仪器和设备4721纳氏比色管：应选玻璃质量好、无色(尤其管底)、配对、刻度标线高度一致的纳氏比色管。473标准铅溶液制备取在105干燥至恒重的硝酸铅(4711)0159 8 g(精确至o000 2 g)，置1 000 mL量瓶中，加硝酸(4714)5 mL与水50 mL溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液1000mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，
20、摇匀，即得(ImL相当于10 pg的Pb)。或采用等效的溯源性物质。474试样溶液制备取试样约2 g(精确至001 g)于瓷坩埚中，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸(4712)O5 mL1 mL，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸(4714)05 mL，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在550炽灼使完全灰化，放冷。加盐酸(4713)20 mL，置水浴上蒸干后加入水15 mL，滴加氨溶液(4715)至对酚酞指示液(4716)显中性，再加醋酸盐缓冲液(4717)20 mL，微热溶解(必要时过滤)。475空白溶液制备取制备试样溶液的试剂，置瓷器皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(4717)20 mL与水15
21、 mL，微热溶解。476测定步骤取25 mL纳氏比色管两支，编号为甲、乙。取空白溶液(475)移人甲管中，精密加入标准铅溶液(473)200 mL，加水稀释成25 mL，取试样溶液(474)移人乙管中，加水稀释成25 mL。在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺溶液(4718)各20 mL，放置2 rain，同置白色衬板上，自上向下透视。64。77结果判定甲管与乙管比较，乙管所显颜色浅于甲管，判为符合规定。5检验规则GBT 9454200851 饲料添加剂维生素E应由生产企业的质量检验部门按本标准进行检验，本标准规定所有指标为出厂检验项目，生产企业应保证所有维生素E产品均符合本标准规定的要求。每批产品
22、检验合格后方可出厂。52使用单位有权按本标准规定的检验规则和试验方法对所收到的维生素E产品进行验收，检验其指标是否符合本标准的要求。53采样方法：抽样需有清洁、干燥、具有密闭性和避光性的样品瓶，瓶上贴有标签并注明：生产厂家、产品名称、批号、取样日期。抽样时，用清洁适用的取样工具插入料层深度四分之三处，将所取样品充分混匀，以四分法缩分，每批样品分两份，每份样量应为检验所需试样的3倍量，装入样品瓶中，一瓶供检验用，一瓶密封保存备查。54判定规则：若检验结果有一项指标不符合本标准要求时，应加倍抽样进行复验，复验结果仍有一项指标不符合本标准要求时，则整批产品判为不合格品。55仲裁检验：如供需双方对产品
23、质量发生异议时，可由双方协商选定仲裁单位，按本标准的仲裁法进行仲裁检验。6标签、包装、运输和贮存61标签标签按GBl0648执行。62包装采用避光密闭容器包装。包装应符合运输和贮存的要求。每件包装的质量可根据客户的要求而定。63运输运输过程中应避光、防潮、防高温、防止包装破损，严禁与有毒有害的物质混运。64贮存应贮存在避光、通风、干燥处；开启后尽快使用，以免变质。在规定的贮存条件下，原包装自生产之日起保质期为24个月。GBT 9454-2008结构式附录A(资料性附录)生育酚醋酸酯标准品红外图谱中文名：dla一生育酚醋酸酯。英文名：dl a tocopherol acetate。分子式：C3lHs203。试样制备：膜制样法。遗光率100 08 F7。 一 广 九 n rJ I l 。M 矿yIf图A1 生育酚醋酸酯标准品红外图谱渡数cml附录B(资料性附录)生育酚醋酸酯标准品的毛细管气相色谱图GBT 9454-20081生育酚醋酸酯2正三十二烷。7 5 Io 125 15 17 5图B，I 生育酚醋酸酯标准品的毛细管气相色谱圈9GBT 9454-2008附录C(资料性附录)生育酚醋酸蘸标准品的高效液相色谱国101游离生育酚；2生育酚醋酸酯图C1 生育酚醋酸酯标准品的高效液相色谱图
