1、ICS 65. 120 B 46 道B和国国家标准11: .、中华人民G/T 28717-2012 2012-09-03发布饲料中丙二醋的测定高效液相色谱法Determination of malonaldehyde in feed High performance liquid chromatography 中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会2013-02-01实施发布中华人民共和国国家标准饲料中丙二醒的测定高效擅相色谱法GB/T 28717-2012 当今中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045
2、)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X 1230 1/16 印张0.5字数8千字2012年11月第一版2012年11月第一次印刷* 书号:155066. 1-45785定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB/T 28717-2012 前言本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位:上海市饲料质量监督检验站、上海
3、市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所、广东恒兴集团有限公司、广东天科国际(集团。本标准主要起草人z赵志辉、杨海锋、林蒜、韩薇、陆天华、滕冰、凤捶熙、黄南。I 1 范围饲料中丙二酷的测定高效液相色谱法本标准规定了饲料中丙二醒的高效液相色谱检测方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、饲料原料中丙二醒的测定。本标准方法的检测限为0.015mg/峙，定量限为0.05mg/险。2 规范性引用文件G/T 28717-2012 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分
4、析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1饲料采样3原理试样中丙二醒经三氯乙酸提取后，与硫代巴比妥酸(TBA)作用生成粉红色复合物，离心取上清液，用高效液相色谱法及荧光检测器检测，外标法计算丙二醒的含量。4试jf1j除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682中规定的一级水。4. 1 乙腊z色谱纯。4.2 磷酸二氢饵溶液(50mmol/L):称取6.804g(精确至0.002g)磷酸二氢饵，用水溶解，并定容至1 000 mL。4.3 硫代巴比妥酸(TBA)溶液(0.02mol/L):称取0.288g(精确至0.002g)硫代巴比妥酸于烧杯中，加人适量水加热至全榕
5、澄清，冷却后定容至100mL。4.4 三氯乙酸1昆合液z准确称取75.0g(精确至0.01g)三氯乙酸及1.0 g(精确至0.01g) EDTA(乙二胶四乙酸二铀)，用水榕解，稀释至1000 mL。4.5 丙二醒标准储备液(100g/mL):准确称取0.315g(精确至O.002 g) 1，1，3，3-四乙氧基丙烧(E. Mesck 97 %)，用水榕解后稀释至1000mL，置冰箱保存，有效期3个月。4.6 丙二醒标准工作储备液。同/mL):准确移取丙二醒标准储备液(4.5)1.0 mL，用三氯乙酸混合液(4.的稀释至100mL，置冰箱备用，有效期2周。4.7 丙二醒标准系列z准确移取丙二醒标
6、准工作储备液(4.6)1.0 mL、2.0mL、4.0mL、8.0mL、10.0 mL于50mL容量瓶，以三氯乙酸混合液(4.的稀释定容，该标准系列中丙二醒的相应浓度为0.02g/mL、0.04g/mL、0.08g/mL、O.16g/mL、0.20g/mL，现配现用。1 GB/T 28717-2012 5 仪器和设备5. 1 分析天平z感量0.0001go 5.2 离心机=转速12000 r/mino 5.3 振荡器。5.4 恒温水浴箱。5.5 样品筛:孔径0.9mmo 5.6 高效液相色谱仪z配有荧光检测器。6 试样的制备按GB/T14699. 1规定，取有代表性饲料样品至少500g，四分法
7、缩减至少100g，磨碎，过0.9mm 孔径样品筛，混匀装入密闭容器中，避光低温保存备用。7 分析步骤7. 1 提取称取约2g试样(饲用油脂称取约1g，精确至0.001g)，置入250mL三角瓶中，准确加入50mL 三氯乙酸混合液(4.的，180r/min振摇30min，取约20mL提取液于50mL离心管中，5000 r/min离心5min。7.2 衍生化准确移取上述试样溶液(7.1)上清液、丙二醒标准系列溶液(4.7)各5mL分别置于25.0mL比色管内，加入5.0mL TBA溶液(4.3)，混匀，置于90.C水浴中保温20min，取出，用冰水浴迅速冷却，移入离心试管内，12000 r/min
8、离心5min，取上清液上机测定，丙二醒标准系列和试样同步衍生化。7.3 测定7.3.1 液相色谱参考条件7.3. 1. 1 色谱柱:C18柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5m，或性能相当者。7.3. 1. 2 柱温:35.C。7.3. 1. 3 流动相:乙腊(4.1)十磷酸二氢饵溶液(4.2)=18+82(V+V)，用前过0.45m滤膜。7.3. 1. 4 流速:1.0 mL/min。7.3.1.5 进样体积:10L。7.3.1.6 激发波长:525nm. 7.3. 1. 7 发射波长:560nm。7.3.1.8 色谱图z参见图A.1.7.3.2 液相色谱测定分别取适量的标准工作液(7.
9、2)和试样溶液(7.2)，按7.3.1列出的条件进行液相色谱分析测定。按照保留时间进行定性，以标准工作液做单点或多点校准，并用色谱峰面积积分值定量。待测样液中丙二醒的响应值应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析，并在试样溶液分析间适当穿插标准工作液，以确保定量的准确性。8 结果计算与表示8. 1 结果计算试样中丙二醒的含量(以质量分数X计按式(1)计算:式中zx = c X V X n X 10-3 -m X 103 X一一试样中丙二醋的含量(以质量分数计)，单位为毫克每千克(mg/kg); c一一试样溶液中对应的丙二醒浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V-一定容体积，单位为
10、毫升(mL); n 稀释倍数Fm一一试样质量，单位为克(g)。8.2 结果表示测定结果用平行测定的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。9 重复性G/T 28717-2012 ( 1 ) 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%。NFON|h-hNH阁。GB/T 28717-2012 附录(资料性附录)丙二醒硫代巴比妥酸复合物色谱圄A 丙二醒硫代巳比妥酸复合物色谱图见图A.lo240.00 220.00 保留时间:8.6 min 200.00 180.00 160.00 140.00 剧唱销售120.00 100.00 80.00 60.00 40.00 20.00 15.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11. 00 12.00 13.00 14.00 t/min nunu nu -nu 0.20阳/mL丙二醒磕代巴比妥酸复合物色谱圄圄A.1侵权必究书号:155066 1-45785 定价:电岳版权专有14.00 j; GB!T 28717-2012 打印日期:2012年12月18日F008AOO
