1、ICS 67050B 50中华人民 共禾口 国国家标准农业部1077号公告一12008水产品中17种磺胺类及1 5种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法Simultaneou determination of 17 sulfonamfdes and 15 quinolones residues inaquatic products by LC-MSMS method20080811发布 20080811实施中华人民共和国农业部发布前 言农业部1077号公告一12008本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归E
2、l。本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心。本标准主要起草人：冷凯良、干志杰、孙伟红、翟毓秀。1范围农业部1077号公告一12008水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱一串联质谱法本标准规定了水产品中17种磺胺(SAs)及15种喹诺酮(QNs)类药物残留量的液相色谱串联质谱测定法。本标准适用于水产品中17种磺胺(磺胺二甲异嗯唑、磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲嗯唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺胍、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺喹嗯啉)和15种喹诺酮(氟罗沙星
3、、氧氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、恩诺沙星、洛美沙星、丹诺沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、嚼喹酸、氟甲喹、培氟沙星)残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而。鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这砦文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法SOT 3016水产品抽样方法3原理样品采用酸化乙腈提取并浓缩，经正己烷液液萃取净化后，液相色谱一串联质谱仪测定，内标法定量。4试剂除
4、另有规定外，所用试剂均为分析纯。4 1水：试验用水符合GBT 6682一级水指标。4 2甲醇：色谱纯。43乙腈：色谱纯。44醋酸铵：色谱纯。45甲酸：色谱纯。46无水硫酸钠：650。C灼烧4 h，冷却后贮于密闭容器中备用。47酸化乙腈：99 mI。乙腈中加入1 mI。甲酸。48 01甲酸溶液(含50 mmolL醋酸铵)：取019 g醋酸铵、05 mL甲酸，用水溶解并定容至500mI。49 20甲醇溶液：取甲醇20mL用水稀释至100mL。410标准储备液：1 mgmL，分别称取氟罗沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、恩诺沙星、洛美沙星、丹诺沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星
5、、嗯喹酸、氟甲喹、培氟沙星对照品约lomg，于各自的10mL量瓶中，加甲酸02mL，用甲醇溶解并稀释至刻度。配制成浓度为lmgmL的标1农业部1077号公告一12008准储备液，避光一18下保存，有效期6个月。分别称取磺胺二甲异嚷唑、磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺间甲氧啼啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲嗯唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺胍、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺喹嚼啉对照品约10mg，于各自的10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。配制成浓度为1 mgmL的标准储备液，避光一18下保存，有效期6个月。4 11氘代同位
6、素内标标准储备液：05 mgmI。，分别称取氘代磺胺邻二甲氧嘧啶、氘代磺胺间二甲氧嘧啶内标对照品约5mg，于各自的10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。配制成浓度为05mgmL的同位素内标标准储备液，避光一18下保存，有效期6个月。分别称取氘代诺氟沙星、氘代环丙沙星、氘代恩诺沙星内标对照品约5 mg，于各自的10 mI。量瓶中，加甲酸02mI，用甲醇溶解并稀释至刻度。配制成浓度为05mgmL的同位素内标标准储备液，避光一18下保存，有效期6个月。4 12混合标准工作液：准确吸取各磺胺和喹诺酮标准储备液适量，用甲醇稀释分别配成10 ugmL和01“gmL混合标准工作液，避光4冷藏保存，有效期1
7、个月。4 13混合内标标准工作液：准确吸取各氘代同位素内标标准储备液适量，用甲醇稀释配成10 pgmL的混合内标标准T作液，避光4下保存，有效期1个月。5仪器和设备51液相色谱一串联四极杆质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)。5 2均质机。53分析天平：感量0000 01 g。54天平：感量001 g。55涡旋混合器。5 6超声波清洗仪。5 7离心机：4 ooo rmin。58旋转蒸发仪。6测定步骤61样品处理6 11试样制备按scT 3016的规定执行。612提取净化称取(5o02)g试样，于50mL具塞离心管中，准确加入50pI。混合内标标准T作液(413)，涡旋混合30 s，避光放置10
8、min。加人10 g无水硫酸钠，涡旋混匀，再加入20 mI。酸化乙腈(47)，涡旋混合1 mln，超声波提取10 min。4 000 rrain离心5 min，取上清液于50 mI。梨形瓶中。残渣中加20 mL酸化乙腈(47)，重复提取一次，合并两次提取液，于40C水浴旋转蒸发至干。加10 mL甲醇溶液(49)涡旋溶解残留物，再加入20mL正己烷涡旋混合30 s，转入5mL具塞离心管中，以4 000 rrain离心5rain，弃上层液，取下层清液。过0z且m滤膜，供液相色谱一串联质谱仪测定。62标准工作曲线制作准确量取适量混合标准工作液(412)，用甲醇溶液(49)稀释成浓度分别为0010 p
9、gmL、0020pgmL、0050 ugmL、0100 pgmL和0200 pgmL的混合标准工作液，供液相色谱一串联质谱仪测定。26 3测定6 3 1色谱条件色谱柱：C。H柱，MG，21 mmXl50 mm，5 fire；或相当者柱温：室温；进样量：lO“L；农业部1077号公告一12008流动相：A为o1甲酸溶液(含50mmoL醋酸铵)B为甲醇，C为乙腈；梯度洗脱程序见表l。表1 流动相梯度洗脱程序时间，rain A B。 c 流速，mLrainO 78 20 2 02030 75 20 5 0206O 70 20 10 O2080 40 20 40 O 20130 40 20 40 02
10、0131 78 20 2 020160 78 20 2 020632质谱条件离子化模式：电喷雾离子源(ESI)，正离子模式；喷雾电压：4 500 V；雾化气压力：12 I。min；辅助气流量：2 Lrain；离子传输管温度：350；源内碰撞诱导鳃离电压：10 Vl扫描模式：选择反应监测(SRM)，选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2Q1半峰宽：07Da；Q3半峰宽：07Da；碰撞气压力：氩气，15 mTorr。表2选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量母离子 子离子 碰撞能最目标化合物eV磺胺二甲异暖唑 108 22Sulfisoxazole268156+ 13磺胺二甲异啸啶279186
11、17Sulfisomidin 156 19108 22磺胺噻唑256Sulfathiazole 156 16磺胺吡啶250】84 18Sulfapyridine 156。 16215 17磺胺间甲氧嘧啶281Sulfamonomethoxine 156 17215 17磺胺甲氧哒嗪281Sulfamethoxypyridazine 】56 17磺胺甲嗯唑 108 22Sulfamethoxazole254156。 16农业部1077号公告一卜一2008袅2(续)母离子 子离手 碰撺能量目标化合物eV磺胺甲噻二唑 107 30Sulfamethizol271156 14186 17磺胺二甲基嘧啶
12、279Sulfamethazine 156 19215 17磺胺对甲氧哺啶281Sulfameter 156+ 17磺胺甲基嘧啶 172 17Sulfamerazine265156 17108 22磺胺胍215Sufaguanidine 156 12108 29磺胺邻二甲氧嘧啶311Sulfadoxlne 156 19108 29磺胺间二甲氧嘧啶311Sulfadimethoxine 156。 19108 25磺胺啼啶251Sulfadiazine 156+ 16108 24确胺氯哒嗪285Sulfachloropyridazine 156 15磺胺喹嘿啉 108 25SIfhinoxalin
13、301156+ 17氟罗沙星 269 26370Fleroxacin 326。 19261 27氧氟沙星362Ofloxacin 318 18诺氟沙星320233 24Norfloxacin 276 16依诺沙星 232 3432l303。 21环由沙星 245 22Ciorofloxacin332288 17恩诺沙旱 245 26Enmfloxacin360316 9265 22洛美沙星352Lomefloxacln 308 16283 22丹诺沙星358Danofloxacin 340 22295 24奥比沙星396()r bifloxacin 352 17299 28双氟沙星400Dif
14、loxacin 356 19299 26沙拉沙星386Sarafloxacin 342+ 18292 25司帕沙星393Sparfioxacin 349 19216 29嚼喹酸2620xolinic acid 244 184表2(续)农业部1077号公告一12008母离子 子离子 碰撞能量目标化台物eV氟甲喹 202 32262Flumequin 244 18290 18培氟沙星33411efoxacin 316 20氘代磺胺邻二甲氧嘧啶314 1 56 17Sulfadoxine一133氘代磺胺间二甲氧嚷啶 317 156 20SulfadimethoxineD6氘代诺氟沙犀325 307+
15、 22Norfloxacin一135氘代环丙沙星340 322 2lCiprofloxadn一1)8氘代恩诺沙星365 32l 19EnrofloxacinD6注：*为定量碎片离子63，3定性依据在同样测试条件下，阳性样品保留时问与标准物质保留时间相对偏差在5以内，且检测到的离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准品相对丰度一致。基峰与次强碎片离子丰度比应符合表3要求。标准溶液、空白样品及添加样品的离子流图参见附录A，袭3基峰与次强碎片彦子丰度比要求次强碎片离子相对丰度， 允许相刘偏差，50 土2020-50(小含20) 土251020(小含10) 土3010 土5063，4定量测定按631和
16、632仪器的色谱、质谱条件，将混合标准。1：作液和样品液等体积进样测定，氟罗沙星、氧氟沙星、墙氟沙星、依诺沙星和诺氟沙星以氘代诺氟沙星为内标；洛美沙星、奥比沙星、丹诺沙星、双氟沙星和环丙沙星以氘代环丙沙星为内标；恩诺沙星、沙拉沙星、司帕沙星、晤喹酸和氟甲喹以氘代恩诺沙星为内标；磺胺二甲异嗯唑、磺胺喹嗯啉和磺胺间二甲氧嘧啶以氘代磺胺间二甲氧嘧为内标；磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲嗯唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺胍、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶和磺胺氯哒嗪以氘代磺胺邻二甲氧嘧啶为内标，内标法定量，定量离子采用丰度最大的二
17、级特征离子碎片(见表2)。64空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。7结果计算样品中磺胺及喹诺酮类药物残留量按式(1)计算，计算结果需扣除空白值，保留i位有效数字。 X一巡，n式中：农业部1 077号公告一12008xz样品中磺胺及喹诺酮类药物残留的含量，单位为微克每T克(“gkg)；C样品制备液中磺胺及喹诺酮类药物残留的浓度，单位为纳克每毫升(ngmI。)V最终定容体积，单位为毫升(mL)；m样品质量，单位为克(g)。8方法夏敏度、准确度和精密度8 1炅敏度本方法的最低检出限均为10#gkg，最低定量限均为20 btgkg。8 2准确度本方法添加浓度为20 tgkg100gkg时
18、，回收率为70120。83精密度本方法的批内相对标准偏差15，批问相对标准偏差15。附录A(资料性附录)标准溶液、空白样品及添加样品的离子流图A 1 磺胺及喹诺酮混合标准溶液的总离子流图磺胺及喹诺酮混合标准溶液(o02gml。)的总离子流图见图AI。农业部1077号公告一12008Time(mln)图A 1磺胺及喹诺酮混合标准溶液(0 02 pgmL)的总离子流图够如盱帅；2加：2弱蛐盯柏坫如笛加坫m，0l，目j农业部1077号公告一12008A 2磺胺及瞳诺酮混合标准溶液的选择离子流图磺胺及喹诺酮混合标准溶液(o02“gml。)的选择离子流图见图A2。105。00| 1：竺：I 8 8盯胡峨
19、aci“1鞠 心竺11：| 止omefloxaein050 lI ofloxaein：j ham“nj f、1鞠 止：!：1鞠；止竺竺1靼 世!：=1帮 止：竺：1弱 且型竺：竺5宙 L：竺：竺竺1鞠 ：竺=!：1乳 I型!=!=竺50j J【“0j-jc。10500j 5 sul蛐。loP，1，r，_jtP十P，1PT_rr1r1rT一 0 2 4 6 8 10 12 14 16Time(min)1鞠 止竺=!=1翔 且!竺竺50I 止：竺竺| !竺!：兰n型!竺型| A：!竺!：=：| 竺竺：竺：竺I I!：!：竺：I 。6竺竺：竺1轧4，=：一 Time(min)sulfamethazi
20、ne1鞠 且 L二竺!：1翱：竺_6芏!望兰釜竺。羽 且竺-竺些l竺rl：LJ_一一10050I sulfaehinoxalin0 血一j ll1要0 !竺：A止竺竺1鞠0 aulfadoxine：D30 5 j 一 010050Lsulfadimethoxin=e D60 Lj I4rP1，P1-1，P_，P1_P1_P1_L；P1Trr11tP，T1一图A 2磺胺及喹诺酮混合标准溶液【0 02 Ilg,mL)的选择离子流图00o00lp_c=商H葛崔8目1目山叫oI苗篮8目盈七玉oA3空白鳗鱼的选择离子流图空白鳗鱼的选择离子流图见图A3。S。毒-趸18喜1；，青盈，农业部1077号公告一1
21、2008鞠。L一 1靴L山山L0 2 4 6 8 10 12 14 16Timefmlnl图A 3空白鳗鱼的选择离子流图uu曼自农业部1 077号公告一12008A 4空白鳗鱼添加样品的选择离子流图空白鳗鱼中添加样品(50 ugkg)的选择离子流图见图A 4。10Time(rain)1菊 ：!=：I sulfadiazineI 。 一euhmetn-eI sulSsoxazoleI 卜mTime(rain)suametheTime(min)1书 L一上竺：。蔓。1 sulfachinoxalin3 “hde 6 sulfadimethoxineJ 儿I 卜一ine埘D1裂：竺竺：!L。一 O，1_r，1PrT，PfT_“_T，11轴f，Pr，1一 o 2 4 6 Ti二mi? 12 14 16图A 4空白鳗鱼中添加样品(5 0 ttgkg)的选择离子流图2目1目qvgoP_cj山o口j篮8目P皿4o目一自
