1、ICS 65020B 04中华人民 共禾口 国国家标准农业部953号公告一912007转基因植物及其产品环境安全检测抗病水稻第1部分：对靶标病害的抗性Evaluation of environmental impact of genetically modifiedplants and its derived productsDisease-resistant ricePart 1：Resistance to target disease20071218发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 舌农业部953号公告一9 12007本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业
2、部提出。本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院生物技术研究所、农业部科技发展中心、中国农业科学院植物保护研究所、中国水稻研究所。本标准主要起草人：金芜军、宋贵文、黄世文、傅强、彭于发、王锡锋、张永军、宛煜嵩、沈平。1范围农业部953号公告一9 12007转基因植物及其产品环境安全检测 抗病水稻第1部分：对靶标病害的抗性本标准规定了转基因抗细菌病害白叶枯病水稻对靶标病害抗性的检测方法。本标准适用于转基因抗白叶枯病水稻在人工接种的情况下对白叶枯病的抗性水平的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注El期的引用文
3、件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各研究和检测单位使用这些文件的最新版本。凡是不注El期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 44041粮食作物种子禾谷类3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3 1转基因抗病水稻transgenic disease-resistant rice通过基因工程技术将外源抗病基因导入水稻基因组而培育出的抗病水稻品种(系)，本标准中特指转Xa21基因或其他抗病基因的抗白叶枯病水稻。4要求41试验材料转基因抗病水稻品种(系)；对应的非转基因水稻品种(系)；籼稻抗病对照IR26，粳稻抗病对照南粳15，或
4、根据当地实际或检测要求设定的抗病对照品种；籼稻感病对照金刚30，粳稻感病对照金南风，或根据当地实际或检测要求设定的感病对照品种。上述材料的质量应达到GB 44041中不低于二级水稻种子的要求。4 2资料记录4 2 1试验地名称与位置记录试验地的名称、试验的具体地点、经纬度或全球地理定位系统(GPS)地标。绘制小区示意图。4 22土壤资料记录土壤类型、土壤肥力、排灌情况和土壤覆盖物等内容。描述试验地近3年种植情况。4 2 3试验地周围生态类型4 231自然生态类型记录与农田生态类型地区的距离及周边植被情况。4 2 3 2农田生态类型记录试验地周围的主要栽培作物及其他植被情况，以及当地水稻田常见病
5、、虫、草害的名称及危害1农业部953号公告一9 12007情况。4 2 4气象资料记录试验期间试验地降雨(降雨类型、日降雨量，以1211711表示)和温度(日平均温度、最高和最低温度、积温，以表示)的资料。记录影响整个试验期间试验结果的恶劣气候因素，例如严重或长期的干旱、暴雨、冰雹等。4 3试验安全控制措施4 3 1隔离措施(4 3 1 1和4 3 1 2选一)4 3 1 1空间隔离试验地四周有100 m以上非水稻为隔离带。若试验区周边有水稻制种田，隔离距离为200 m以上。4 31 2时间隔离100 m范围内与其他水稻花期间隔15 d以上。4 3 2试验过程的安全管理试验过程中如发生试验材料
6、被盗、被毁等意外事故，应立即报告行政主管部门和当地公安部门，依法处理。4 3 3试验后的材料处理转基凶抗病水稻材料应单收、单脱、单贮，由专人运输和保管。试验结束后，除需要保留的材料外，剩余的试验材料一律焚毁。4 3 4试验结束后试验地的监管保留试验地的边界标记。当年和第二年不再种植水稻，由专人负责监管，及时拔除并销毁转基因抗病水稻自(再)生苗。5试验方法5 1育秧及移栽参测品种经常规浸种催芽后，播亍二转基因稻种植区专用检测圃内。播种时间依检测地点和参测品种生育期不同灵活掌握，一般以水稻分蘖盛期后的3周内或孕穗期后的3周内的日平均气温2830。C为宜。播种15 d后每公顷施尿素75 kg。在秧龄
7、25 d30 d时移栽。参测品种每小区移栽4行，每行1 5株，共60株，重复3次；株行距为20 cmX 20 cm；每2个参测品种间栽插抗、感品种各2行，参测品种间采用随机排列。在参测品种四周栽插不少于5行的保护行品种，株行距与参测品种相同。保护行品种选择高秆发病较轻的水稻品种，以避免保护行发病过重影响参测品种的发病。5 2接种时期在水稻分蘖盛期或孕穗后期按下述接种方法进行人工剪叶接种。5 3接种依据不同地区选用相应的自叶枯病菌株进行接种(北方粳稻区选用型菌，长江流域籼粳混栽区和南方籼稻区选用、型菌)，或按要求接种不同致病力菌株(T型)。接种体在胁本哲氏马铃薯半合成培养基上培养72 h，用麦法
8、伦氏比浊法配成3108 CFUmL菌液。在水稻分蘖盛期或孕穗后期，用医用剪刀蘸菌液剪去植株新(剑)叶叶片顶部2till长(剪口要平)，每株剪接主茎3片完全展开的新叶或剑叶，总接种叶片不少于60片。5 4管理移栽至接种期间，田间水肥管理与常规生产一致；移栽后20 d和接种前1周各施尿素1次，用量为75 kghm2。参测品种在全生育期内不使用杀菌剂，杀虫剂的使用根据检测圃内害虫发生种类和程度而定，接种前后避免施用任何药剂。接种时田间不积水，接种后使田问保持薄水层，3 d4 d后观察稻株，待大部分稻株出现初期侵染症状后，灌水保持5 cm左右水层。2农业部953号公告一9 120075 5病情调查接种
9、后21 d，当感病对照品种的发病程度高于7级(含)时方可认为试验有效，并按附录A表A1调查记录发病情况和进行病情分级。每小区随机调查剪叶接种过的叶片不少于50片，每参测品种调查叶片不少于150片。病情指数按下列公式计算：j一笔孚孚1001 MT 一式中：卜 病情指数5芝：调查病害相对病级数值及其株数乘积的总和；N病害某一级别的植株数，单位为株；R病害的相对病级数值；M病害的最高病级数值；T调查总株数，单位为株。56结果分析与表述按附录A相应的病害病情分级及调查记载标准进行调查、记载、评级。用文字和抗级表述评价转基因抗病水稻与对应水稻品种和相应抗、感品种对白叶枯病的抗性差异。农业部953号公告一
10、912007附录A(资料性附录)病情分级标准水稻白叶枯病的病情分级标准见表A1。表A 1 水稻白叶枯病病情分级和调查记载标准病级 抗性反应 抗性水平o 病斑长度小于接种叶片剩余长度5O；或病斑面积小于5o 高抗(HR)病斑长度占接种叶片剩余长度5112o；或病斑面积占叶面积511 抗(R)12o病斑长度占接种叶片剩余长度12125o；或病斑面积占叶面积1213 中抗(MR)25o病斑长度占接种叶片剩余长度25150o；或病斑面积占叶面积2515 中感(Ms)50o病斑长度占接种叶片剩余长度50 175o；或病斑面积占叶面积5017 感(s)75o9 病斑长度大于接种叶片剩余长度751；或病斑面积大于叶面积751 高感(Hs)
