1、GBT 1388392 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用2，3-二氨基萘（DAN）荧光法测定饲料中硒的方法。 本标准适用于配合饲料、预混合料、浓缩饲料和单一饲料中硒的测定。在萃取液中检测范围为0.0010.1 gmL（以Se计）。 2 引用标准 GB 1.4 标准化工作导则 化学分析方法标准编写规定 GB 6682 实验室用水规格 3 方法原理 先将试样中有机物破坏，使硒游离出来，在微酸性溶液中硒（IV）和2.3-二氨基萘（DAN）生成4.5-苯基苯并硒二唑，用环己烷直接在生成络合物的同一酸度溶液中萃取，用荧光光度计测定其荧光强度。 4 试剂 实验室用水应符合GB 6682中二级用水的规
2、格，使用试剂除特殊规定外，应为分析纯。 4.1 高氯酸 优级纯（ 1.67gmL）。 4.2 硝酸 优级纯（ 1.42gmL）。 4.3 环己烷 0.7780.80gmL。 4.4 盐酸 优级纯（1+3）。 4.5 盐酸 C（HCl）0.1molL。4.6 氨水 0.90gmL。 4.7 盐酸羟胺-乙二胺四乙酸二钠（EDTA）溶液 称取10gEDTA溶于500mL水中，加入25g盐酸羟胺使其溶解，用水稀至1000mL。 4.8 2，3-二氨基萘（DAN）溶液 称取DAN0.1g于150mL烧杯中，加入100mL0.1molL盐酸使其溶解，转移到250mL分液漏斗，加入20mL环己烷（4.3）振
3、荡1min，待分层后弃去环己烷，水相重复用环己烷处理23次。水相放入棕色瓶中上面加盖3mm厚的环己烷，于暗处保存，此液可使用数周。 4.9 硒标准贮备溶液 称取硒粉（纯度99以上）25mg（精确至0.01mg），入100mL烧杯中，加入10mL硝酸加热溶解，冷至室温，用水转移至1000mL容量瓶中并稀至刻度，摇匀，此液 1mL含25.00 g的硒。页码，1/4GB/T 13883922006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB138830a.htm4.10 硒标准工作溶液 吸取（4.9）溶液1.00mL、入50mL高型烧杯中按分析步骤消化至高氯酸冒烟 5min
4、，取下稍冷，加1mL水和1mL盐酸（4.4）摇匀，放置10min用盐酸（4.5）转移至250mL容量瓶中并稀至刻度摇匀，此液1.00mL含硒0.1 g。 4.11 甲酚红 0.4gL水溶液，称取0.1g甲酚红入400mL烧杯中，加少许水加氨水（4.6）使其溶解用水稀至250mL，摇匀。 5 仪器、设备 5.1 荧光光度计 激发波长365385nm，荧光发射波长520525nm，1cm石英比色杯。 5.2 实验室用样品粉碎机 标准分析筛孔径（0.42、0.25mm）。 5.3 分析天平分度值0.0001g。 5.4 可调温电炉（600W）或电热板（3000W）。 5.5 高型烧杯50mL和相应大
5、小的表面皿。 5.6 具塞比色管50mL。 5.7 刻度吸量管2mL、10mL。 6 试样的制备 取已粉碎至0.42mm的试样4050g入250mL烧杯中加水至能搅动的糊状，在搅拌器上搅1015min，倒在小搪瓷盘中铺平，放入烘箱70烘干，粉碎机上磨至0.25mm，混匀装入密封容器中备用，防止试样成分变化。 7 分析步骤 7.1 试样测定（配合饲料、浓缩料、单一饲料） 称取已制备好的试样约1g，精确至0.0001g（0.4 gSe），放入50mL高型烧杯中，用少量水润湿试样加硝酸（4.2）10mL，轻摇烧杯使试样散开，加盖表面皿放到电热板（5.4）上低温加热见反应开始（泡沫开始上冒），切断电源
6、或取下待剧烈反应缓解（气泡不上涌）后再放到电热板上煮沸至硝酸体积减少到5mL左右，取下稍冷加入5mL高氯酸（4.1）继续加热至剧烈小气泡冒完，高氯酸冒烟；取下稍冷，用水吹洗表面皿和杯 壁，去掉表面皿，将烧杯置电热板上先低温蒸发水分，再升温至高氯酸冒烟并保持510min，取下稍冷，加入1mL水和1mL盐酸（4.4），摇匀，放置10min，水稀至30mL左右，加二滴甲酚红（4.11），用氨水（4.6）中和至黄色，再用盐酸（4.4）中和至橙色（pH1.52），加入3mL盐酸羟胺溶液（4.7）摇匀，用盐酸（4.5）转移到50mL比色管中（5.6），加2mLDAN 溶液（4.8），盖好塞子，摇匀，松动塞
7、子，置于100水中保持5min。取出放入冷水中迅 速冷却至室温，用盐酸（4.5）稀至50mL，加5mL环己烷（4.3）振荡1min，静置分层后，用吸管小心吸取上部环已烷页码，2/4GB/T 13883922006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB138830a.htm入1cm石英杯中，置入荧光光度计内于激发波长375380nm，发射波长520525nm测其荧光强度，在标准曲线上查得试料中硒的含量。 同时做空白试验（消化时应戴防护眼镜）。 7.2 高含量硒样品（预混合料）的测定 对于每千克含硒在1mg以上含有机物的样品，按（7.1）进行至加入1mL水和1mL盐
8、酸（4.4）摇匀，放置10min后将消化液稀释至足够体积，然后取部分溶液（Se0 .4 g）进行测定。对于以石粉为载体的预混料，称取15g样品（精确到0.0001g），于 250mL烧杯中，加入20mL水和25mL硝酸（4.2）（逐滴加入硝酸至气泡不发生后再全部加入），盖表面皿，置电热板上煮沸，低温沸腾30min，取下冷却，用水转移到100500mL容量瓶中稀释至刻度，摇匀，取部分澄清液（Se0.4 g）入50mL高型烧杯中，加入5mL高氯酸（4.1），以下按7.1 加高氯 酸后程序进行。 7.3 工作曲线的绘制 取0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，3.00mL硒标准溶液（4.
9、10），分别入50mL具塞比色管中，加入3mL盐酸羟胺溶液（4.7）、2滴甲酚红指示剂（4.11），以下按7.1用氨水中和起操作进行，以下按7.1用氨水中和起操作进行，以硒量为横坐标，荧光强度为纵从标，绘制工作曲线。 8 分析结果计算和表述 硒的含量（mgkg）按下式计算： 所得结果应表示至三位小数：0.001mgkg。 9 允许差 室内每个试样应称两份试料进行测定，以其算术平均值为分析结果，其间分析结果的相对偏差应不大于下表所列允许差。 Se（mgkg） m1V0（ m0V1） 式中： m1自工作曲线上查得的硒量， g；V0试液的总体积，mL；V1分取试液的体积，mL；m0试料的质量，g。硒含量，mgkg 允许偏差， 0.100 40 0.1000.200 30 页码，3/4GB/T 13883922006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB138830a.htm 0.2000.400 20 0.400 15 页码，4/4GB/T 13883922006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB138830a.htm
