1、ICS 6502030B 41中华人民 共和II，、71雷雪国国家标准GBT 1 580562008部分代替GBT 15805119952008073 1发布鱼类检疫方法第6部分：杀鲑气单胞菌Quarantine methods of fishPart 6：Aeromonas salmonicida2008110 1实施丰瞀鬻鬻瓣訾矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会“”。刖 罱GBT 15805(鱼类检疫方法分为下列部分：一一第1部分：传染性胰脏坏死病毒(IPNV)；第2部分：传染性造血器官坏死病毒(IHNV)第3部分：病毒性出血性败血症病毒(VHSV)第4部分：斑点叉尾鲴病毒(CCV)；第5
2、部分：鲤春病毒血症病毒(SVCV)；第6部分：杀鲑气单胞菌；第7部分：脑粘体虫；GBT 1580562008本部分为GBT 15805的第6部分。本部分代替GBT 158051 1995淡水鱼类检疫方法第一部分中的第8章。本部分与GBT 158051 1995的第8章相比主要变化如下：删去临床检查；用国际通用的API鉴定系统来判断杀鲑气单胞菌，代替原来简单用几个生化鉴定结果来判定的方法；增加附录“杀鲑气单胞菌各亚种的生化特性表”；一一结构格式按GBT 11 2000的规定，作为部分编写。本部分的附录A为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。本部分起
3、草单位：农业部全国水产技术推广总站、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：孙喜模、江育林、陈爱平、陈辉、朱泽闻。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 158051 19951范围鱼类检疫方法第6部分：杀鲑气单胞菌GBT 1580562008GBT 15805的本部分规定了用细菌分离和生化鉴定的方法检测疖疮病病原杀鲑气单胞菌的方法。本部分适用于杀鲑气单胞菌的分离及鉴定，疖疮病的流行病学调查、诊断、监测，以及El岸出入境、国内跨区域移动的鱼类检疫。2规范性引用文件下列文件中的条款通过GBT15805的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(
4、不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GBT 6682 1992分析实验室用水规格和试验方法(neq ISO 3696：1987)GBT 18088 2000出入境动物检疫采样3试剂和材料31水：GBT 6682 1992，二级。32杀鲑气单胞菌参考菌株：由农业部指定的动物病原微生物菌(毒)种保藏机构提供。33 APl20NE试剂条：4保存。按照说明书指示的方法使用。34革兰氏染色液：按说明书指示的方法使用。35 TSA培养基：按说明书指示的方法配制。36氧化酶试纸：按说明
5、书指示的方法使用。4器材和设备41恒温培养箱。42离心机和离心管。43显微镜(具油镜、暗视野)、载玻片、盖玻片。44普通冰箱和低温冰箱。45剪刀、镊子、接种环、培养皿等。5杀鲑气单胞菌的分离51取样按GBT 18088 2000规定执行。如果鱼体有红肿渍疡，用解剖刀切开患部(或溃疡部)，将干净的载玻片贴紧病灶并挤压，加1滴2滴生理盐水后盖上盖玻片，400倍600倍镜检菌体形态和运动状态，并做革兰氏染色。若鱼体表无任何症状，则需从肾中分离细菌。52选择性培养基分离将样品接种到TSA培养基，25培养72 h。TSA上会生长白色的菌落(注意：有的亚种会产生水1GBT 1580562008溶性褐色素如
6、杀鲑亚种，而其他亚种没有色素产生)。如果在TSA平板中加入100 mgI，的考马斯亮兰，则生长的菌落为深蓝色。53细菌鉴定531 革兰氏染色和形态观察革兰氏染色后，菌体呈红色表示革兰氏阴性；菌体呈紫色表示革兰氏阳性。该菌应为革兰氏阴性菌，短杆状。532运动性观察取干净的载玻片，滴1滴2滴生理盐水。用接种环从斜面上挑培养12 h24 h的菌落涂抹在水滴中，盖上盖玻片。400倍600倍镜检菌体形态和运动状态。细菌能快速运动或产生位移的，为有运动性；细菌在原地来回颤动的(即布朗运动)，为没有运动性。该菌应不运动。533氧化酶试验用接种白金耳环挑取少量菌苔涂于氧化酶试纸上，5 s内观察结果。菌苔呈红色
7、或紫色表示氧化酶试验阳性，不变色表示氧化酶试验阴性。该菌应为氧化酶阳性。534生化鉴定如果革兰氏染色阴性，氧化酶阳性，不运动，则进一步用APl20NE试剂条测定。方法：将培养24 h的纯化的细菌按要求稀释后接种到试剂条的每个孔内，然后置于25培养48 h72 h，取出来检查反应是阳性还是阴性，把结果输入随API试剂条所附的数据库，阳性值输入“+”号，阴性值输入“”号。如果是杀鲑气单胞菌，还能指出是什么亚种如杀鲑亚种，或者是无色亚种还是史氏亚种，并指出是不是“极好的鉴定结果，没有不符合项”，还是“不确定的结果”或者几率很低。后二者可能是送检的细菌不纯，无法判定所致。需要重新纯化细菌再做。如果是其
8、他细菌，该试剂条也能明确判定是什么细菌。金鱼亚种由于是非典型种，不能用APl20NE检出。需要和附录A的生化特性对照。6综合判定凡检出杀鲑气单胞菌者，不论是从鱼体红肿、隆起、局部软化、组织坏死等处分离到，还是鱼外观正常但可从肾中分离到，即可判定为阳性。附录A(规范性附录)杀鲑气单胞菌各亚种的生化特性表表A1 杀鲑气单胞菌各亚种的生化特性表GBT 1580562008特 性 无色亚种 日本鲑亚种 杀鲑亚种 史氏亚种 金鱼亚种(非典型种)产生呵I哚 + + +甲基红试验(MR) + + +v-P反应 +柠檬酸盐 +|硫化氢(H2S产生) + +水解尿素苯丙氨酸脱氢酶精氨酸双水解酶 + + + ( )鸟氨酸脱羧酶运动性明胶水解 + + + +氰化钾(KCN)生长丙二酸利用口葡萄糖产酸 + + + (+) +D葡萄糖产气 + + (+) +阿东醇阿拉伯糖 + +阿拉伯醇纤维二糖卫矛醇赤藓醇半乳糖 + + +甘油 d D d (一) +间肌醇产酸 乳糖麦芽糖 + + + +n甘露醇 + + +n甘露糖 + + +棉籽糖L-鼠李糖n山梨醇 ( )海藻糖 + + +口木糖黏液酸七叶灵水解 + +酒石酸脂酶(玉米油) + + +DNase + + + +硝酸盐还原 + + + +氧化酶 + + + + +ONPG d D d +柠檬酸棕色可溶性色素 斗
