1、G8/T 16886. 12-2000 前言本标准等同采用国际标准15010993-12，1996医疗器械生物学评价第12部分z样品的制备与参照样品k本标准的附录A、附录B、附录C和附录D都是提示的附录。本标准由国家药品监督管理局提出。本标准由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会归口。本标准起草单位2国家药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心。本标准主要起草人z黄经春、朱雪涛、由少华、王科儒、王昕。 186 G8!T 16886. 12 2000 ISO前言150(国际标准化组织)是由各国标准化团体(150成员团体)组成的世界性的联合会。制定国际标准的工作通常由150的技术委员会完成，各
2、成员团体若对某技术委员已确定的标准项目感兴趣，均有权参加该委员会的工作。与150保持联系的各国际组织(官方的和非官方的)也可参加有关工作。在电工技术标准化方面ISO与国际电工委员会(lEC)保持密切合作关系。由技术委员会正式通过的国际标准草案提交各成员团体表决，国际标准需取得至少75%参加表决的成员团体的同意才能正式通过。的。国际标准ISO10993-12是由ISO!TC194国际标准化组织医疗器械生物学评价技术委员会制定lSO 10993的总题目是医疗器械生物学评价，由下列部分组成z第1部分z试验选择指南;第2部分:动物保护要求;第3部分遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验;第4部分z与血液相互作
3、用试验选择;第5部分:细胞毒性试验:体外法p第6部分z植入后局部反应试验;第7部分环氧乙烧灭菌残留量;第9部分:与生物学试验有关的材料降解技术报告，第四部分z剌激与致敏试验;第11部分z全身毒性试验s第12部分=样品制备与参照样品，第13部分:聚合物降解产物的定性与寇量;第14部分:陶瓷制品降解产物的定性与定量p第15部分z涂层及无涂层金属和合金降解产物的定性与定量s第16部分医疗器械降解产物和可沥滤物毒性动力学研究设计基本准则;第17部分2工业化灭菌的医疗器械戊二醒和甲醒残留量:育关其他方面的生物试验将有其他部分的标准e本标准的附录A、附录B、附录C和附录D仅供参考。187 GB/T 168
4、86. 12-2000 51 去口本标准对生物学评价中样品制备方法和参照样品的使用提供了指南。由于15010993描述了多种不同的生物学评价系统，对于各标准具体的试验系统，应考虑这些建议的适用性。样品制备方法应考虑到生物学评价方法和被评价剖材料。各生物学试验都要根据具体试验来选择固体样品、浸提溶剂或浸提条件。本标准是在现行的各国家和国际规范、规程和标准的基础上制定的，它将随着新的研究工作的开展和科学知识的提高而定期修订。188 中华人民共和国国家标准医疗器械生物学评价第12部分:样晶制备与参照样品GB/T 16886.12-2000 idt ISO 10993-12,1996 Biologic
5、al evaluatioD of medical devices Part 12 , Sample preparatioD and ref ereDce materials 1 范围本标准规定了医疗器械在按照GB/T16886其他部分所规定的生物学体系试验时样品制备的要求，并对其所要遵循的步骤提供指南。包括:a)试验材料选择;b)从器械上选取有代表性的部分$c)试验样品制备sdl选择用以证明试验系统适宜性和或能相对地比较试验样品生物学活性的参照样品ge)浸提液制备。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效3所有标准都会被修汀，使用
6、本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 19000.1-1994 质量管理和质量保证标准第l部分:选择和使用指南GB/T 19000.2-1994 质量管理和质量保证标准第2部分，GB!T 19001、GB!T19002和GBi句19003实施通用指南GB/T 19000.3-1994 质量管理和质量保证标准第3部分，GB/T 19001-1509001在软件开发供应和维护中的使用指南GB/T 19000.4一1994质量管理和质量保证标准第4部分.可信性大纲管理指南15C/IEC导则25:1 990 校准与检验实验室资格的通用要求15C/IEC导则30:1992参照样品常用
7、术语及定义3 定义本标准使用150导则30中所规定的定义和下列定义。3. 1 空白液blank liquid 与浸提液同法lJtJ备但不加试验材料.用来与浸提液比较的液体。3.2 浸提液extract liquid 浸提试验材料而得的液体。3. 3 阴性对照negative control 当按规定步骤试验时，在试验系统中证明能出现再现性、适当的阴性、元反应或自身反应的材料或物质。国家质量技术监督局2000-12-13批准2001- 05-01实施189 GB/T 16886.12-2000 3.4 阳性对照positive control 当按规定步骤试验时，在试验系统中证明能出现再现性、适
8、当的阳性或反应性的材料或物质。3.5参照样品reference mat盯ial具有足够均匀的一种或多种特性值，并经技术鉴定的材料或物质。用于标定仪器、评定测量方法或给材料赋值。lSO导则30J注1.当按所述步骤试验时，参照样品如能产生可再理性和可预见性反应可以是阴性反应，也可以是阳性反应) 则证明试验过程适当。3.6 标准样品certified reference material 附有证书的参照样品，其一种或多种特性值经过一定程序被标定，每个标准值都给出以置信水平表示的不确定度。ISO导则30J3. 7 试验材料test material 供生物学试验或化学试验的材料、器械、器械的一部分或组
9、件。3.8 试验样品test sample 用于生物学试验或化学试验的浸提液或试验材料的一部分。4 试验对照4. 1 在生物学评价中，应使用试验对照来证实种试验过程。应根据具体生物学试验采用相应的阴性时照、阳性对照和空白对照囚同一对照物可用于不同的试验，以使所建立的材料和试验方法进行交叉对照a附录A中给出了其他试验对照选择指南。注2.个可比的、临床上被接受的器械可以满足这一要求E4.2 用作试验对照的参照样品的制造厂和实验室，应按ISO导则25和GB/T19000. 1、GB/T 19000. 2,GB!T 19000.3和GB/T19000. 4建立的质量保证体系生产，参照样晶应标明来源、制
10、造厂名称、类型、等级和批号等。4.2.1 参照样品和标准样品的材料种类应与试验样品相同，如聚合物、陶瓷、金属、肢体等。4.2.2 参黑样品由独立的实验室确定。其化学、物理学和生物学性能指标应由该实验室进行确定。适用的市售商品可以用作参照样品(见4.1中注2)。4.2.3 标准样品应选择纯度高、性能稳定、适用于预定用途且便于得到的材料。其化学、物理学和生物学性能的稳定性应经过3个或3个以上的实验室共同验证来确定。再由销售商提供给实验室。5试验材料选择5. 1 供试医疗器械最好是处于成品状态.这应尽量作为首选c其次可选择器械有代表性的部分(见5.2)。如不可行，可用相同配方材料的高代表性样品进行试
11、验咽并按照与成品相同的工艺过程进行预处理c5.2 如果器械由多种材料组成而器械不能以整体用于试验时，将每种与人体组织接触的材料按比例组合成试验样品。5.3条所述情况除外。5. 2. 1 有表面涂层器械的试验样品应包括涂层材料和基质材料。5.2.2 器械如使用了粘接剂、射频密封或溶剂密封，试验样品应包括粘接和/或密封处有代表性的部分。5.2.3 复合材料应作为最终材料测试。5.2.4 对原位固化的材料，如粘固粉(ement)、粘接剂和单体，应在其临床使用最小困化期后进行试验。5.3 试验样品中材料的比例可能有例外。5. 3. 1 所选择的试验(如植入)可能要求对个别的材料进行评价。190 GB/
12、T 16886. 12 2000 5.3.2 选择试验样品，应使器械的任何一种有潜在生物学反应的材料是大限度地与试验系统接触。5.3.3 对于一些特殊试验，试验样品的几何形状的影响可能会大于材料类型的影响。试验中试验样品的几何形状要比按比例选择器械上有代表性的不同材料更为重要。5. 3. 4 当一个器械上有不同材料时，在选择试验样品时应考虑其潜在的综合作用或相互作用。5.4 当需要材料浸提液做试验时，该试验材料的选择方法不变。6试验样晶与参照样晶制备6. , 处理试验样品与参照样品时应防止污染回来自制造、装配、清洗、灭菌等过程中的残留物应视为是器械、器械部件或构成的组成部分。附录B提供了试验样
13、品和参照样品制备的其他指南。6. ,. 1 对取自元菌器械的试验样品和参照样品，如可能，试验应无菌操作。6. ,. 2 对试验样品是取自非无菌状态供应但在用前灭菌的器械，要按生产厂推荐的灭菌方法灭菌，如可能，试验应元菌操作。6.2 如果试验过程耍用已经过无菌处理的样品，应考虑灭菌或再灭菌对试验样品和参照样品的影响，包括允许的反复灭茵对最终产品的影响。6.3 当试验样品和参照样品需要分割成小片时，应考虑原先没有暴露的表面(如腔或切西的影响，将器械切割成试验用的有代表性部分的工艺过程应尽量清洁以免污染e7 试验材料漫蝇液的制备7.1 总则如果试验方案需要器械的浸提液，所用浸提液和浸提条件应与最终产
14、品的性质和使用相适应。附录C提供了样晶浸提的附加指南。对于GB/T16886其他部分所描述的生物学试验，有时对样晶浸提液的制备有特殊要求，在这种情况下，相应标准中所规定的要求优先于本标准。7.2 浸提容器浸提应在洁净、化学惰性的封闭容器中进行，该容器在保证安全的前提下，顶部空间应尽量小。浸提应在防止祥品需染的条件下进行。?3 授提条件浸提是个复杂过程，受时间、温度、表面积与体lR比、浸提介质以及材料的相平衡的影响。如府加速或加严浸提法，应认真考虑高温或其他条件对浸提动力学及浸提液密度的影响。按照惯例用下述标准条件制备浸提液来测试器械或材料的潜在危害e也可以用其他模拟临床使用的条件制备浸提液，但
15、应加以说明并阐述理由。7. 3. 标准浸提温度和时间如下.a) 37 C士1C 24 h土2h b) 37C土1C 72 h士2h , c) 50C土2C72 h士2h , d) 70 C士2C24 h+2 h , e) 121 C士2C. 1 h土0.2h。优先采用模拟临床条件的浸提条件。7. 3. 2 表1中绘出每毫升授提液体积对标准表面积(即不考虑表面不规则性的投影表面积)的比例=1)给定温度下固体材料的相平衡决定了非结晶相与结晶桶的相时存有量，对非结晶相玻璃他温度(T，l决定了聚合物链迁移率和相中扩散速率。通常温度高于T，的扩散速率明显要离于温度低于T，的扩散速率e而在结晶相中扩散速率
16、是最低的P浸提条件应选择在尽量不超过生理介质时材料相平衡所带来的改变p相变可能会影响浸提物质的量租类型.相平衡的变化可以用差式扫描热量分析法来确定。191 GB/T 16886.12 - 2000 表1厚度唱mm漫提比例土10%材料举例三二0.56 cm2/mL 金属、告成禀告物、陶瓷、复合膜、片和管壁0.5 3 cm2/mL 金属、合成聚合物、陶瓷、复合管壁、板、摸制品1.0 i 3 cm2lmL 天然橡胶1. 0 1. 25 cm2/mL 天然橡胶不规则(0.1-0. 2)g/mL, 6 cm /mL 球体注现在尚无测试吸收剂和在肢体的标准化的方法。推荐下面一个方案:割定材料吸收容量，即材
17、料所破收费提液的量.试验样品应为2g材料，浸提掖体积应比2g样品的吸收容量多20mL. 1)以试件表面积或质量时所用浸提液体积之比表示。对于评价粉剂、泡沫材料、多孔表面等，不使用表1的浸提比，而使用质量体积浸提比和表面体积浸提比，只要它们能模拟临床使用条件或潜在危害测试结果即可。7. 3. 3 弹性体、涂层或表面处理的材料、复合材料、层状薄片等应尽量完整地试验。其他材料应在授提前切成小片以便于在浸提液中浸提。7.3.4 浸提介质示伊tl: a)极性液体水、生理盐水、无血清液体培养基，的非极性液体g新鲜精制植物袖(如棉籽汹或芝麻油); cl其他浸提液乙醇/J)c(5%，V/V)，乙醇/生理盐水(
18、5%，V /川，聚乙二蹲400(稀释至生理渗透压1;二甲基亚liIll，含血清液体培养基sdl适用于器械性质和应用并已知其作用的其他液体。7. 3. 5 程提可以在静态或搅拌条件下进行。如认为搅拌合适时，应规定其方法并予以报告曰7. 3. 6 如可能，液体浸提液应在制备后立即使用，以防止吸附在浸提容器上或成分发生其他变化。如果漫提液存放超过24h，则应检验贮存条件下浸提液的稳定性。. 3. 7 浸提液一般不应采用过滤、离心或其他方法来去除悬浮的位子，如果必须进行时，应说明其理由。8试验报告试验报告应包括以下样品制备的记录a)材料、器械、器械部分或其组件的来源$bl批号，(如可行hc)处理、清洗
19、或灭菌过程的说明(如需要); dl浸提技术，如可能还应记录浸提条件。192 A1 标准样晶GO/T 16886. 12 - 2000 附录A(提示的附录)试验对照晶目前没离适用于生物学试验评价的标准样品。A2 使用中的对照晶有些材料已经作为阳性对照或阴性对照，广泛用于生物学试验。下列材料也许可以满足所选试验对试验对照的要求，选择适宜的参照样品是研究者的职责。注3，丰附录给出了产品商品名称和来源，提供这些资料是为了方便GB/T16886-ISO 10993标准使用者，但国际标准化组织对此不提供保证，其他产品或出处如能产生同样的结果也可采用。A2.1 植入试验A2. 1. 1 阴性对照z高密度聚乙
20、烯(PE)飞低密度聚乙烯，无二氧化硅的聚二甲基硅氧烧严飞不锈钢。A2. 1. 2 限性对照:含有有机锡添加剂的聚氯乙烯(PVC俨飞专用增塑聚氯乙烯SSA2.2 细胞毒性试验A2. 2. 1 阴性对照z高密度聚乙烯。A2. 2. 2 阳性对照.含有有机锡添加剂的聚氯乙烯创飞A2.3 其他参照样品附录D中提供了其他参照样品【12J、13J和14J可用作生物试验的对照。A2.4 其他材料(样品)A2. 4. 1和A2.4. 2给出了其他对照材料。A2. 4. 1 阴性对照z低密度聚乙烯飞元二氧化硅的聚二甲基硅氧;皖川、聚氯乙烯、聚氨醋酷、聚丙烯(PPl川、医用级胶乳、氧化铝陶瓷棒、不锈钢以及铁合金。
21、2)高密度粟乙烯可从下列地址获得:USPharmacopeia. Rockville. 20852 MD.USA. 3)植人用阴性对照PE可从下列地址获得:Societyof Japanese Pharmacopoeia嘈agai -Kinenkan 8F. Shibuya 2-12 15嘈Shbuya-Ku，Tokyo150. Japano 的低啻度囊乙烯可从下列地址获得;Biamaterials Program. Devces and T echnology Br anch. National Heart. L ung and Blood Institute. NIH. 312 Feder
22、al Buildi吨.7550Wisconsin Ave. Bethesda. 20892 MD. USA. 5) Schmidt. J. A. Von Recum. A.F. 载于原始标准级聚二甲基硅氧烧期刊:.AppL Biomater. 4. 1993. pp. 3-75o 的阳性对照参照样品可从下列地址获得:US Pharmacopea Rockvlle , 20852 MD. USA , 71吉有有机锚添加剂的PVC阳性参照样品可从下列地址获得Por-texLimi ted , Portex House , 1 High St. , Hythe. Kent LT21 6JL , UK
23、(产品号，499-300-000-000)。的BS573612PRS增塑PVC管型材料可从下列地址在得BSIt Linford研ood.Milton Keynes , Buckinghamshire. MK14 6LE ,UK. 的PE140管形材料可从下列地址在得:Rehau AG. 0-95111 Rehau. Germany. PE薄膜可从下列地址获得zHoechst AG. D-65926 Frankfurt 80, Germany 10) SIK 8363管型材料可从下列地址在得:RehauAG , D-951 11 Rehau , Germany 11) PP 146管理材料可从下
24、列地址获得RehauAG. D- 95111 Rehau , Germany ., pp薄膜可趴下列地址获得Hoechst AG嘈D-65926Frankfurt例!Germanyo 193 GB/T 16886.12-2000 A2. 4. 2 阳性对照=含有二甲基或二丁基-二硫代氨基甲酸铮的嵌段聚氨醋薄膜山、一些胶乳成分、悴盐搭液L飞以及某些曾作过浸提液阳性对照的酣M和水的稀悸液。附录B(提示的附录)试验材料制备指南本附录提供材料制备和样品选择通用指南。时试验材料生物学评价所用的材料应兼顾最终产品的成分、工艺和表丽特性，并且应具有代表性(见第5章B1.1 橡胶或塑料，其成分应包括树脂、聚合
25、物和任何添加剂。其他可代替组分也应予以评价。其配方应规定材料:lJn程序，如加热、提纯或再研磨和最大允许再研磨。B1.2 能用同一方法或其他方法再灭菌的材料，应在多次灭菌处理后试验。比如，一种材料经辐照灭菌和环氧乙统灭菌.应在a)辐照和b)辐照加环氧乙皖灭菌后试验。如能证明有最严格的作用条件，试验应在最严格的作用条件之后进行。B1.3 理想的生物学试验是在材料与细胞/生物环境接触的原始表面(相对于材料块)上进行。另一个可供选择的方法是，用与器械生产相同的工艺(挤出，浸泡等、温度、时间、大气庄强、脱模剂、退火、固化、清洗、灭菌等加工成小体积样品。B1.4 供生物学试验的金属，应是取自与制造器械相
26、同的原材料，并用与最终产品制造相同的车、磨、抛、洗、钝化、表面处理和灭菌加工而得。B1. 5 供生物学试验的陶瓷材料应用与器械生产同批粉料并用与器械制造相同的铸造、熔模铸造、浇铸、烧结、表面抛光和灭菌加工而得。B1.6 生物修复材料，应按生产厂提供的使其有不同固化深度的最大和最小允许困化时间，使其形成保护后进行试验。B2 微粒如果在浸提条件下产生微粒，在设汁材料试验时应考虑该过程的影响。B3 样晶大小材料总量和表面积应与试验系统的生物学和物理学要求相适应。建议在规定的评价中用标准的样品大小。附录C(提示的附录)样晶漫提指南对医疗器械浸提的目的是提供合适的试验样品，以测定可沥滤物质在生物系统中的
27、生物学反应，从而证明器械用于人体的潜在危害。当制备一种器械的浸提液时，所用攫提介质和浸提条件应该既与最终产品的性质和用途相适应，又要与试验方法的可预见性(如试验原理、敏感性等)相适应。因此，理想的12) Wako Pure Chemcals Co. L td Q 13)澳大利亚标准AS2696，198927 , 1992 , pp. 157-164 11J COURY ,A. J. Preparation 01 specimens lor blood compatibility testing. Cardiovascular Pathol. , (3).1993,pp.l018-1108. C
28、oury.A. J.血液相容性试验的样品制备.Cardiovascular Pathol. ，(份，1993，pp.1018-110812J LEMM , W. The re/erence materials 0/ the eura，户eanD白nmunity.Kluwer Acadernic Publishers! Dordrecht , The Netherlands , 1992. Lemm , W.Kluw町AcademicPublishers , Dordrecht, The Netherlands. 1992 13J TSUCHIY A , T. et al. Rabbit eye
29、 irritation caused by wearing contact lenses and their cytotoxici 口es:In vivo/in vitro correlation sttldy using standar reference materials. J. Biomed Mater. Res. , 27 ,1993.pp. 885-893. Tsuchiya，T等人，家兔由接触镜引起的跟内剌激及接触镜细胞毒性z用基准参照样品进行体内/体外相关研究，(生物医学材料研究杂志)，27，1993，pp.885-893=14J TSUCHIYA,T. et al. Comp
30、arative studies 01 the toxicity 01 standard reference materials in var卜ous cytotoxicity tests and in vivo implantation tests. J. A户户1.Biomater，4，1993，pp.153一156.Tsuchiya , T等人，各种细胞毒性试验和体内植入试验用基准参照样品的毒性比较研究4生物医学材料应用杂志，4，1993pp. 153-156 15J UPHILL,P. F. and CHRISTOPHER,D. H. Developing a positive control lor cytotoxicity testing 01 medical device materials. Medical Device Technal. Nov.IDec. ,1990,pp. 24-27. Uphill , P. F和Christopher，D. H.医疗器械材料的细胞毒性试验用阳性对照的制备，(医疗器械技术，Nov./Dec., 1990, pp.24-27 96
