1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GBjT 20742-2006 牛甲状腺和牛肉中硫服畸睫、甲基硫服日窑院、正丙基硫服畸睫、它巴略、琉基苯并咪瞠残留量的测定液相色谱m串联质谱法Method for the determination of公thiouracil,methyl thiouracil , propyl thiouracil ,tapazole and 2-mercaptobenzimidazole residues in bovine thyroid and muscles-LC-MS-MS method 2006-12回31发布中华人民共和国国家质量监督检验检
2、疫总局中国国家标准化管理委员会2007-03-01实施发布中华人民共和国国家标准牛甲状腺和牛肉中确服晴脏、甲基酣腮嘈脏、正胃基础腮晤睫、它巴瞌、就基苯井眯瞄残留量的测定液捆色诺嗣串联质谱法GBjT 20742-2006 婪中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里何北街16号邮政编码:100045 网址WW电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销当k开本880X 1230 1/16 印张O.75 字数16千字2007年3月第一版2007年3月第一次印刷* 书号:155066 1-28931 定价14.00元如有印蕃差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
3、举报电话:(010)68533533GB/T 20742-2006 前本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本标准主要起草人:庞国芳、张进杰、曹彦忠、郭彤彤、范春林、李学民、刘永明、曹亚平、刘小茂。本标准系首次发布的国家标准。I GBjT 20742-2006 牛甲状腺和牛肉中硫服畸脏、甲基硫服畸脏、正丙基硫腮畸昵、它巴瞠、琉基苯并咪啤残留量的测定液相色谱m串联质谱法1 范围本标准规定了牛甲状腺基硫腮喃盹Cpropyl thio 相色i曾由串
4、联质谱测定本标准适用于牛残留量的测定。本标准方法苯井眯略均为2下列文(不件值非擂制罩滞般款的通内过容本) 的修改单是否可使用;鹏GB/T 测量方CGB/T 6379. GB/T吨A忡方法性与再现性的3 原理试样中残留的氨基固相萃取柱净化检测。4 试剂和材料吨除另有说明外，所用试剂均为优4. 1 甲醇:色谱纯口4.2 乙脯:色谱纯。4.3 乙酸乙醋:色谱纯。4.4 磷酸氢二锅，Na2HP04.12H20o 4.5 磷酸二氢押，KH2P04o4.6 乙酸。4. 7 被盐酸。4.8 氢氧化饷。腮嘀睫Cmethyl thiouracil)、正丙benzimidazole)残留量液陀、它巴哇、琉基苯并咪
5、咄服喃腹、它巴瞠、琉基是注宵JZ耳;1随后所有励根据各方研究5五;即l事;+二:总则与定义第2部材:确4标准测量方掩重复眯咄用乙酸乙醋提取，净化，液相色谱-串联质谱1 GB/T 20742-2006 4.9 三氯甲皖。4. 10 正己烧。4. 11 4-氧-7-苯井映咱(4叩chloro-7-ni tro benzo-2-furaz且nNBF-CD , C H2 CIN3 03 :含量二三99%04.12 琉基乙醇:分析纯。4. 13 乙二胶四乙酸二铀，ClOHHN208Na2 2H20. 4. 14 无7k硫酸铀;使用前6500C灼烧4h. 4. 15 磷酸盐缓冲撞撞:pH=8，0.2mol
6、/L.称取67.7g磷酸氢二铀(4.4)和1.5g磷酸二氢悻(4.日，用水榕解，定容至1000 mL. 4. 16 盐酸潜液:0.2mol!L。量取17mL榷盐酸(4.7) ，用水定容至1000 mL. 4.17 氢氧化饷榕破:1 mol/L。称取40g氢氧化饷(4.8) ，用7k晦解，定容至1000 mL。4. 18 衍生剂:5mg/mLo称取O.05 g 4-氯子，苯井映咱(NBF-CD(4.11)溶于10mL甲醇(4.1)，现用现配。4. 19 乙二脑四乙酸二铀榕悔:0.1mol/L.称37.2 g乙二脑四乙酸二饷(4.13)擂于1000 mL水中。4.20 洗脱液z含3%乙酸的甲醇和三
7、氯甲皖05十85)植合溶准。眼取3mL乙酸(4.6)于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，tl昆匀。吸取该搭液15mL于100mL容量瓶中，用三氯甲:境(4.9)定容至到度.t昆匀。4.21 定容液z含0.3%乙酸的乙睛水梅施。吸取0.3mL乙酸和15mL乙睛(4.2)于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，棍匀。4.22 栋准物质:硫腮I;班C2-thiouracil，TU)、甲基硫腮喃睫(Methylthouracil , MTU)、正丙基硫腮喃膛(propylthiouracil , PrTU)、它已啤(Tap且zole，TAP)、琉基苯井眯瞠(2-mercaptobenzimidazo
8、le，MBD , 纯度注99%。4.23 内标标准物质:甲基葫基苯并眯啤(2-methoxethox-mercaptobenzimidazole，MEMBI) ，纯度二三99%。4.24 标准储备榕液:1. 0 mg/mL。称取适量的硫服暗脏、甲基硫服喃脏、正丙基硫腮嘻脏、它巴I哇、琉基苯井眯哇标准物质(4.22)，分别用甲醇配成1.0 mg/mL的标准储备蔽。避光一180C保存，可使用6个月。4.25 混合标准工作悟液:O. 1g/mL.腹取每种适量标准储备榕掖(4.24)，用甲醇稀释成O.1g/mL 的棍合标准工作榕班，避光一18.C保存，可使用3个月。4.26 内标标准储备溶破:1.0
9、mg/mL。称取适量的甲基茹基苯井眯瞠标准物质(4.23)，用甲晖配成1. 0 mg/mL的标准储备蔽，避光-180C保存，可使用6个月。4.27 内标标准工作陪破:O. 1g/mL。腹取内标标准储备恪踉(4.26)，用甲醇稀释成O.1g/mL的内标标准工作榕液，避光-18.C保存，可使用3个月。4.28 Sep-Park Amino Propyl固相萃取柱或相当者:500mg , 3 mL。使用前用20mL正己烧预处理，保持柱体温润。4.29 Oasis HLB固相萃取柱或相当者:60mg , 3 mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL 7k预处理，保持柱体温润。4.30 0.2m滤膜。5
10、仪器5. 1 搜相色谱-串联囚极杆质谱仪，配有电喷雾离子掘。. 5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g. 5.3 液体悟匀器。5.4 固相萃取装置。5.5 氯气吹干仪。5.6 恒、温振荡水洛。5. 7 真空泵:真空度应达到80kPa. 5.8 微量注射器:25L，100L。5.9 棕色具塞离心管:25mL, 50 mL. 5.10 pH计1测量精度士0.02pH单位。5. 11 贮液器:50mL。5. 12 离心机1转速大于4000r/min. 6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备6. 1. 1 牛甲状腺样品的制备GB/T 20742-2006 取50g100 g阴性牛甲状腺组织，加
11、入3倍质量的干冰，用组织捣碎机绞碎后，使干冻在室温下蒸发，备用。6. 1.2 牛肌肉组织用组织捣碎机绞碎，分出0.5kg作为试样备用。6.2 试样保存制备好的试样置于18C冰柜中避光保存。7 制定步骤7. 1 混合基质标准校准溶班的制备7. 1. 1 样品称取莉:取5个阴性样品，每个样品为1g(精确到O.01 g) ，将上述样品置于50mL 梅色离心管中(5.9), 分别加人不同量?昆合标准工作溶液(4.2日，使各被测组分的旅度均为1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10ng/mL、20ng/mL。再分别加入适量内标标准工作情液(4.27)，使其政度均为2.0 ng/m
12、L。7. 1. 2 提取和初次净化分别往上述离心管中加入10mL乙酸乙醋(4.3) , 3 g无水硫酸铀(4.14)，20L琉基乙酶(4.12), 30L O. 1 mol/L乙二胶四乙酸二铀梅液(4.19)，均质15S，再用5mL乙酸乙醋洗海均质器刀头，二者合井，4000 r/min离心5min，取上清液并在氯气吹干仪(5.5)上50.C水浴吹干。用2mL乙腊梅解残余物，加入3mL正己皖(4.10)振蔼1min , 4 000 r/min离心5min , 取并弃掉E己;烧，再加3mL正己烧重复一次。剩余榕液在氮气吹干仪上50C水浴吹干。用0.5mL三氯甲皖榕解残余物，边摇边在超声波水浴中停留
13、几秒钟，如入3mL正己皖，涡旋?昆匀，倒入下接预她理好的Sep-ParkArnino Propyl固相萃取柱(4.28)的贮液器(5.11)中，在固相萃取装置(5.4)上使样液以小于2mL/min的流速通过SepPark Amino Propyl团相萃取柱，待样被全部通过固相萃取柱后用10mL _E己烧淋洗固相革取柱，弃去全部流出液。用5mL先脱液(4.20)洗脱到25mL棕色离心管(5.9)中井在氯气吹干仪上50C水浴吹干。7. 1. 3 衍生化和再次净化用5mL 0.1 mol/L pH=8的磷酸盐缓冲溶液(4.15)悔解上述残留物，加入0.3mL衍生剂(4.1时，t!RJ旋?昆合1mi口
14、，在50C恒温振荡水潜避光反应3h.衍生被放至室温，用O.Z mol/L盐酸榕被(4. 16)调节pH值在34之间，榕液倒入下接OasisHLB固相萃取柱(4.29)的贮液器中，在固相萃取装置上使样掖以小于2mL/min的流速通过OasisHLB柱，待样液全部通过国相萃取柱后用10mL J.). 洗固相萃取柱，弃去全部流出液。用真空泵(5.7)在65kPa负压下抽干OasisHLB Iffi相萃取桂10miD. 再用5mL乙酸乙醋洗脱被测物于25mL棕色离心管中，在氮气吹干仪上50C水陪吹干，残余物加GBjT 20742-2006 300L元水乙醇溶解，再加700L定容液(4.21)定容，混匀
15、后过O.2m滤膜(4.30)，供被相色谱-串联质谱测定。7.2 实测样品溶班的制备称取待测样品1g(精确到0，01g)于50mL棕色离心管中，加入内标工作溶液，使其含量均为2.0g/kg。按7.1.2和7.1. 3操作。7.3 空白基质溶液的制备称取阴性样品1g(精确到0.01g)于50mL棕色离心管中，按7.1. 2和7.1. 3操作。7.4 测定7.4. 1 液相色i普条件时间/min0.00 1. 00 1. 01 瓷器江各础E酒与骂骂了三a) 色谱柱:A tlantis C18 ,3. 5 b)柱、温:45.C ; c) 进样量:20L;d) 流动相及流速而3.%乙酸乙脯溶液/C.%)
16、 u-u-m一问一臼-H7.4.2 质谱a)离b) 扫描c) 检测d) 电喷雾e) 辅助气(f) 辅助气温g) 聚焦电压(h) 碰撞室出口i) 定性离子对、定量表2畸腮喃脏、甲苯井咪睡的质i普参数被测物及内标物名称Cm/z) Cm/z) /ms 去簇电压/v 碰攘能量/v 甲基硫腺啼院衍生物qu叩nhM-2wwU4mn口。-L庐4&-qd-qt-PU，-nLnL-巧，nL-nJUJJF,f-,J,fF,fmJ LOL-nhv-nu-A哇-A也qMqM-AU-nUqu-句nru-nr一叫u-叫甲nUE句吨U292/229 100 55 29 硫血革啼咙衍生物29 306/243 100 55 2
17、9 31 正丙基硫服用E咙衍生物334/271 30 100 55 31 4 GB/T 20742-2006 被测物及内标物名称表2(续)定性离子对|定量离子对| 采集时间(m/z) I (m/z) I /ms 去簇电压/v 碰撞能量/V 它巴嗤衍生物，-nZM-nE-no nu-qd-nd-n口OG-，-。-。LFJ-FJr-FJ/,-FJ6 n只u-n只】-A41古.-d4。q，t，-句t-1l4画-咱i。马-q白-qd-qd278/202 I 100 50 32 26 琉基苯并眯啤衍生物314/238 100 52 m-m一剖一臼甲基硫基苯井眯咄衍生物肉标)55 7.4. 3 班相色谱串
18、联质i曾19m7. 4. 3. 1 定性测定每种被测组分选择l保留时间之比，也就是相阳之内;且样品色谱图中的定性离子的相对丰测物口咀间偏差在土2.5%色谱图中对应存在对应的待% 相对离子卒度允许的最大偏差7.4.3.2 定量测内标法定量:用外标法定量:在校准榕被跟度为横值均应在仪器测定(MRM)色谱图参见图7.5 平行试验按以上步骤，对同7.6 回收率试验眼取适量棍合标准工标准衍生肖子被和内标标准街生品中舔加标准潜椒，按7.2操作，测，得到相应放度的报合的标准校准榴班。阴性样8 结黑计算试样中被测组分残留量按式(1)计算1X-cuV 1000 -一 , m .，、1000 . ( 1 ) 式中
19、zX一一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(g/kg); C一一回从标准工作曲线得到的被测组分梅液陆度，单位为纳克每毫升(ng/mL); V一一样品榕液最终定容体积，单位为毫升(mL); m一一样品榕被所代表最终试样的质量，单位为克(g)。5 G/T 20742-2006 9 精密度本标准的精密度数据是按照GB/T6379. 1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。9. 1 重复性在重复性条件下，获得的两次拍立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的含量范围及重复性方程见表40表4五种甲基畸氧畸盹的含量范围及重复性和再现性方程被m物名称含量范围/
20、(g/kg) 重复性限r再现性限R硫原啼l览衍生物220 Igr=O. 879 71gm-0. 854 2 IgR=0.770 llgrn-O. 650 5 甲基硫腺嘀院衍生物220 Igr=O. 832 Olgm-O. 8572 IgR= 1. 023 91gm一0.8446 正丙基硫腺啼皖衍生物220 19r= 1. 109 31gm- 1. 071 0 IgR= 1. 034 81gm一O.890 0 它巴哗衍生物220 r=O. 132 7m-0. 000 9 IgR= 1. 013 Olgm一O.788 5 疏基苯并眯略衍生物220 19r=l. 059 91gm-O. 9321 I
21、gR=l. 053 91gm-0. 8078 注:m为两次测定结果的算术平均值。如果差值超过重复性限，应舍弃民验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的含量范围及再现性方程见表406 GB/T 20742-2006 附录(资料性附录)五种甲基酣氧晴晦标准物质及内栋物衍生物的多反应监测(MRM)色i曹图A 五种甲基硫氧嘀睫标准物质及内标物衍生物的多反应监删(MRM)色谱图，且因A.10硫.IIl晴睫衍生物8.24 1. 5e4 的0. O i: E50盹02 1 Oe4 17 18 t/min 16 15 14 1
22、3 12 11 10 9 日7 6 5 4 3 2 1 0.0 即基硫踩嗜陡衍生物8.76 3.0e4 2.0e4 1. Oe4 的民气若ESE17 18 t/min 16 15 14 13 12 11 10 9 B 7 6 5 4 3 2 1 0.0 正丙基硫原啧呢布生物10.31 2.ge4 2.5e4 2.0e4 1. 5e4 1. Oe4 5000.0 0.0 aoRb咱自agH17 18 t/min 16 15 14 13 12 11 10 9 B 7 6 5 4 3 2 1 它巴瞠衍生物8.73 1. 4e4 1. Oe4 5000.0 的岛06EEUHSH11 18 t/min
23、16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 l 0.0 疏基苯并眯嗖衍生物9.91 1. 00e5 8.00e4 6.00e4 4.00e4 2.00e4 0.00 mbOFEESEH 17 18 tlmin 15 15 14 13 12 11 10 日自7 6 5 4 3 2 1 甲基统基苯并咪嗤衍生物10.00 5 000 4 000 3 000 2 000 1 000 。的岛。伊b句mFEz-18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 日7 6 5 4 3 2 1 I/min 五种甲基畸氧晴盹标准物质及内标物衍生物的多反应监测(MRM)色谱固圄
24、A.l附录B(资料性附录)囡收率牛甲状腺和牛肉中五种甲基硫氧喃睫的舔加改度及其平均回收率的试验数据，见表B.L表且1五种甲基畸氧曙睫的添加垠度及其平均国收率的试验数据SON-N叮hONH固。G/T 20742-2006 添加水平和平均回收率/c%)被测物名称2g/kg 5g/kg 10g/kg 20g/kg 牛甲状腺牛肉牛甲状腺牛肉牛甲状腺牛肉牛甲状腺牛肉硫麻暗咬衍生物86. 6 88. 9 87.1 89.9 82. 1 86.5 83.2 87.8 甲基疏服喃咬衍生物87.8 90. 2 89.2 91. 2 84.2 85.4 85.4 90.1 正丙基硫腺峨院衍生物85.9 91. 3 82.8 90.5 87.3 81. 5 83. 7 88.2 它巴I峰衍生物83.8 86.7 87. 9 89.1 85.2 88. 3 82.9 83.2 疏基苯并眯瞠衍生物85.6 88.4 84. 6 87.2 87.1 82. 1 81. 7 85.4 版权专有侵权必究铅书号，155066 1-28931 GB/T 定价:14.00元
