1、安 徽 省 地 方 标 准 无公害农产品质量安全标准 DB34/T207-2000 1 范围 本标准规定了无公害农产品的定义、技术要求、检测方法、检验规则等内容。 本标准适用于安徽省境内无公害农产品的生产、收购与销售。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成本标准的条文。在标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB2715-1981 粮食卫生标准 GB2716-1988 食用植物油卫生标准 GB4788-1994 食品中甲拌磷、杀螟硫磷、倍硫磷最大残留限量标准 GB4810-1994 食品中砷限量卫生标准
2、GB5127-1985 食品中敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷允许残留标准 GB7096-1996 食用菌卫生标准 GB7104-1994 食品中苯并（）芘允许限量标准 GB7718-1994 食品标签通用标准 GB8170-1987 数值修约规则 GB8321.1-1987 农药合理使用准则（一） GB8321.2-1987 农药合理使用准则（二） GB8321.3-1989 农药合理使用准则（三） GB8321.4-1993 农药合理使用准则（四） GB/T8321.5-1997 农药合理使用准则（五） GB9676-1988 牛乳及其制品黄曲霉素M1限量标准 GB9679-1988 茶叶卫
3、生标准 GB14873-1994 稻谷中甲胺磷最大残留量限量标准 GB14935-1994 食品中铅限量卫生标准 GB14961-1994 食品中铬限量卫生标准 GB14963-1994 蜂蜜卫生标准 GB15201-1994 食品中镉允许量标准 GB2762-1994 食品中汞允许量 GB15198-1994 食品中亚硝酸盐限量卫生标准 3 定义 本标准采用下列定义。 3.1 无公害农产品 系指在良好的生产环境条件下，农产品中的重金属、农药残留等有毒有害物质含量控制在安全允许限量内，按照无公害农产品生产技术规范生产、加工的、无污染、安全的农产品及其加工产品 DB34/T207-2000 的总
4、称。包括粮食、食用油料、蔬菜、果品、茶叶、食用菌、蜂蜜、畜禽产品养殖的水生动植物和野生天然食品等。 3.2 兽药残留 对食品动物用药后，动物产品的任何食用部分中的原型药物和其代谢产物，包括与兽药有关的杂质的残留。 3.3 兽药最高残留限量 对食品动物用药后产生的允许存在于食物表面或内部的该兽药残留的最高量/ 浓度（以鲜重计，表示为 mg/kg 或 mg/L）。 3.4 农药残留 见 DB/203-2000 中 3.2。 3.5 最大农药残留限量 见 DB34/203-2000 中 3.3。 4 技术要求 4.1 无公害农产品（种植类）质量安全标准 4.1.1 无公害粮食质量安全标准（见表 1）
5、 表 1 无公害粮食质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 磷化物（以PH3值计） 0.05 （原粮） 2 氰化物（以 HCN 计） 5 （原粮） 3 二硫化碳 10（原粮） 4 砷（以 AS 计） 0.7（原粮） 5 汞（以 Hg 计） 0.02 （成品粮） 6 铅（以 Pb 计） 0.4 7 铬（以 Cr 计） 1.0 8 镉（以 Cd 计） 0.2（大米） 0.1（面粉） 0.05 （杂粮） 9 氟（以 F 计） 1.0 10 亚硝酸盐（以NaNO2计） 3 （大米、面粉、玉米） 11 对硫磷 0.1（原粮） 12 乐果 0.05 13 甲拌磷 0.02 （谷类原粮）
6、14 甲胺磷 0.1 15 杀虫脒 不得检出 16 黄曲霉毒素B15 （成品粮）( g/kg) 17 苯并（）芘 5( g/kg) DB34/T207-2000 4.1.2 无公害水果质量安全标准（见表 2） 表 2 无公害水果质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 砷（以 AS 计） 0.5 2 汞（以 Hg 计） 0.01 3 铅（以 Pb 计） 0.2 4 铬（以 Cr 计） 0.5 5 镉（以 Cd 计） 0.03 6 氟（以 F 计） 0.5 7 硝酸盐（以NaNO3计） 600 8 亚硝酸盐（以NaNO2计） 4 9 对硫磷 不得检出 10 乐果 1.0 11 甲
7、拌磷 不得检出 12 氯氰菊酯 2.0（柑桔） 13 呋喃丹 不得检出 14 三氟氯氰菊酯 0.2 15 甲胺磷 不得检出 16 水胺硫磷 不得检出 17 氧化乐果 不得检出 18 甲基对硫磷 不得检出 19 久效磷 不得检出 4.1.3 无公害茶叶质量安全标准（见表 3） 表 3 无公害茶叶质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 铅（以 Pb 计） 2 2 铜（以 Cu 计） 60 3 甲胺磷 0.1 4 三氯杀螨醇 0.1 5 敌敌畏 0.1 6 乐果 0.2 7 氯氰菊酯 0.1 8 氰戊菊酯 0.1 9 溴氰菊酯 5 10 六六六 0.2 11 滴滴滴 0.2 DB3
8、4/T207-2000 4.1.4 无公害食用菌质量安全标准（见表 4） 表 4 无公害食用菌质量安全标准 指 标（ mg/kg） 序 号 项 目 鲜食用菌 干食用菌 1 砷（以 AS 计） 0.5 1.0 2 汞（以 Hg 计） 0.1 0.2 3 铅（以 Pb 计） 1.0 2.0 4.1.5 无公害食用植物油质量安全标准（见表 5） 表 5 无公害植物油质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 砷（以 AS 计） 2 2 对硫磷 60 3 敌敌畏 不得检出 4 乐果 不得检出 5 甲拌磷 不得检出 6 甲胺磷 不得检出 7 涕灭威 不得检出 8 黄曲霉毒素B120( g/
9、kg，花生油) 10( g/kg，其它植物油) 9 苯并（）芘 5( g/kg) 4.1.6 无公害蔬菜指标按 DB34/203-2000 执行。 4.2 无公害农产品（畜禽类）质量安全标准 4.2.1 无公害肉类质量安全标准（见表 6） 表 6 无公害肉类质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 砷（以 AS 计） 0.5 2 汞（以 Hg 计） 0.05 3 铅（以 Pb 计） 0.5 4 铬（以 Cr 计） 1.0 5 镉（以 Cd 计） 0.1 6 氟（以 F 计） 2.0 7 亚硝酸盐（以NaNO2计） 3 8 氯霉素Chloramphenicol （ C11H10C
10、12N2O5） 0.01 （猪、牛、羊、禽） DB34/T207-2000 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 9 克伦特罗Clenbuterol(C12H18CL2N2OHCL) 0.1（牛、马） 10 恩诺沙星Enrofloxacin （C19H22FN3O3） 0.03 （牛、羊、猪、兔、禽） 11 庆大霉素Gentamycin(C19-21H39-41N5O7) 0.1（牛、猪） 12 土霉素（氧四环素）Oxyteracycline （ C22H24N2O9） 0.1（所有食品动物） 13 青霉素Penicillin(C16H18N2O5S) 0.05 （牛、羊、猪） 14 链霉素
11、Streptomycin sulfate （C21H19N7O123H2SO4） 0.5（牛、羊、猪、禽） 15 泰乐菌素Tylosin,Tylocine （C46H77NO17） 0.2（牛、猪、禽） 16 磺胺类 0.1（所有食品动物） 17 已烯雌酚Diethylstilbestrol （C18H20O2） 0（所有食品动物） 4.2.2 无公害鲜蛋质量安全标准（见表 7） 表 7 无公害鲜蛋质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 砷（以 AS 计） 0.5 2 汞（以 Hg 计） 0.05 3 铅（以 Pb 计） 0.2 4 铬（以 Cr 计） 1.0 5 镉（以 C
12、d 计） 0.05 6 氟（以 F 计） 1.0 7 土霉素（氧四环素）Oxyteracycline （ C22H24N2O9） 0.2 4.2.3 无公害鲜奶质量安全标准（见表 8） 表 8 无公害鲜奶质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 总砷（以 AS 计） 0.2 2 汞（以 Hg 计） 0.01 3 铅（以 Pb 计） 0.05 4 铬（以 Cr 计） 0.3 5 黄曲霉毒素M10.5（ g/kg） 6 细菌总数 15000（个/g ） 7 大肠菌数（近似数） 40( 个/100ml) 8 致病菌 不得检出 DB34/T207-2000 序 号 项 目 指 标（ m
13、g/kg） 9 克伦特罗Clenbuterol(C12H18CL2N2OHCL) 0.05 （g/kg ） 10 庆大霉素Gentamycin(C19-21H39-41N5O7) 0.1 11 青霉素Penicillin(C16H18N2O5S) 0.004 12 链霉素Streptomycin sulfate （C21H19N7O123H2SO4） 0.2 13 磺胺类 0.1 14 泰乐菌素Tylosin,Tylocine （C46H77NO17） 0.05 4.2.4 无公害蜂蜜质量安全标准（见表 9） 表 9 无公害蜂蜜质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 铅（以
14、Pb 计） 1 2 锌（以 Zn 计） 25 3 菌落总数 1000（个/g） 4 大肠菌群 30（个/100g ） 5 致病菌（系指肠道致病菌或致病性球菌） 不得检出 6 霉菌总数 200（个/g ） 4.3 无公害农产品（水产类）质量安全标准（见表 10） 表 10 鱼类质量安全标准 序 号 项 目 指 标（ mg/kg） 1 砷（以 AS 计） 0.5 2 汞（以 Hg 计） 0.3 3 铅（以 Pb 计） 0.5 4 铬（以 Cr 计） 2.0 5 镉（以 Cd 计） 0.1 6 氟（以 F 计） 2.0 7 亚硝酸盐（以NaNO2计） 3 8 氯霉素（C11H10C12N2O5） 0
15、.01 9 土霉素（氧四环素）Oxyteracycline （ C22H24N2O9） 0.1 10 已烯雌酚Diethylstilbestrol （C18H20O2） 0 5 检测方法 5.1 磷化物、氰化物的测定按照 GB/T5009.36-96 中 4.3、4.4 执行。 5.2 二硫化碳的测定按照 GB/T5009.36-96 中 4.6 执行。 5.3 总砷的测定按照 GB/T5009.11 执行。 DB34/T207-2000 5.4 铅的测定按照 GB/T500.12 执行。 5.5 总汞的测定按照 GB/T5009.17 执行。 5.6 镉的测定按照 GB/T5009.15 执
16、行。 5.7 氟的测定执照 GB/T5009.18 执行。 5.8 硝酸盐、亚硝酸盐的测定执照 GB/T5009.33 执行。 5.9 对硫磷、乐果、甲拌磷、水胺硫磷、甲基对硫磷、久效磷、敌敌畏的测定按照 GB/T5009.20 执行。 5.10 甲胺磷、乙酰甲胺磷的测定按照 GB14876 执行。 5.11 氯氰菊酯、氰戊菊脂、溴氰菊酯的测定按照 GB/T14929.4 执行。 5.12 涕灭威的测定按照 GB/T14929.2 执行。 5.13 黄曲霉毒素M1和B1的测定按照GB/T5009.24 执行。 5.14 苯并（）芘的测定按照 GB/T5009.27 执行。 5.15 茶叶卫生标
17、准测定方法的测定按照 GB/T5009.57 执行。 5.16 锌的测定按照 GB5009.14 执行。 5.17 菌落总数的测定按照 GB4789.2 执行。 5.18 大肠菌群的测定按照 GB4789.3 执行。 5.19 致病菌的测定按照 GB4789.4-14 执行。 5.20 霉菌总数的测定按照 GB/T4789.15 执行。 5.21 呋喃丹的测定按照 GB14877 执行。 5.22 六六六和滴滴涕的测定按照 GB/T5009.19 执行。 5.23 国家未规定测定方法的农药，按照行业规定的测定方法执行。 5.24 氯霉素、克伦特罗、已烯雌酚、恩诺沙星、庆大霉素、青霉素、链霉素、
18、磺胺类、泰乐菌素的测定按照附录 A 中所列的方法检测。 6 检测规则 6.1 产品或产品原料必须符合安徽省无公害生产技术规范要求。 6.2 产品必须符合安徽省无公害农产品质量安全标准。 6.3 检验结果的数据修约按照 GB8170 执行。 6.4 产品生产过程中取样方法按照 GB/T2828-1987 进行。 6.5 产品市场取样方法按照 GB/T15482-1995 进行。 附加标准： 本标准由安徽省农业委员会提出； 本标准起草单位：安徽省农业环境保护监督站； 本标准主要起草人：赵颍南、汤天明、丁凌志、程晓冬、周伟 DB34/T207-2000 附 录 （试验方法的附录） DB34/207-
19、2000 中兽药类的测定方法 1氯霉素在动物可食性组织中残留的气相色谱检测方法。 2克伦特罗在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法。 3已烯雌酚在动物可食性组织中残留的分光光度计检测方法。 4恩诺沙星在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法。 5庆大霉素在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法。 6土霉素在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法。 7青霉素在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法。 8链霉素在动物可食性组织中残留的微生物学检测方法。 9磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效淮相色谱检测方法。 10泰乐菌素在动物可食组织中残留的高效液相色谱检测方法。 方法
20、1 氯霉素在动物可食性组织中残留的气色相色谱检测方法 Gas cromatographic method for the determination of Chloramphenicol residues in edible tissues of animal 1 药物概述 1.1 药品名称 氯霉素 Chloramphenicol 1.2 化学文摘名称 D-苏式-1 对硝基苯基-2- 二氯乙酰胺基-1 ，3- 丙二醇 D-Threo-1-p-nitrophenyl-2-dichloroacetamido-1,3-propanol 1.3 化学结构式 1.4 分子式 C11H10C12N2O51
21、.5 分子量 323.13 DB34/T207-2000 1.6 作用与用途 抗菌药。用于肠道、呼吸道等细菌性感染。 1.7 用法与用量 内服 一次量 每 1kg 体重 驹、犊、猪犬、猫 10-20mg 一日二次 1.8 在动物组织中的最高残留限量 在动物可食性组织中药物的最高残留限量规定如下： 牛 0.01mg/kg 羊/ 山羊 0.01mg/kg 猪 0.01mg/kg 家禽 0.01mg/kg 鱼 0.01mg/kg 2 氯霉素残留的气相色谱测定法 2.1 适用范围 本方法用于测定肉牛的肌肉组织中氯霉素的残留量。 2.2 原理 组织经- 葡萄糖醛酸酶消化，经乙酸乙酯提取，然后将乙酸乙酯浓
22、缩。加 4%氯化钠溶液，剩余的乙酸乙酯用氮气吹干。将盐溶液过C18萃取小柱，用 20%甲醇洗涤, 用甲醇洗脱。将洗脱液蒸发至干并固化，用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定氯霉素。异氯霉素做内标物定量。 2.3 可靠的检测限 本方法在牛肌肉组织中的检测限为 1.0ng/g。 2.4 仪器 2.4.1 气相色谱仪，配电子捕获检测器（63Ni） 2.4.2 电子天平：感量 0.00001g 2.4.3 匀浆机。 2.4.4 离心机。 2.4.5 旋转蒸发仪。 2.4.6 振荡器。 2.4.7 电热恒温水浴锅。 2.4.8 固相萃取柱：C18柱。 2.5 药品与试剂 2.5.1 氯霉素标准品：纯度99
23、% 。 2.5.2 异氯霉素标准品：内标物。 2.5.3 - 葡萄糖醛酸酶-IX：生化试剂。 2.5.4 甲醇：色谱纯。 2.5.5 乙酸乙酯：分析纯。 2.5.6 正已烷：分析纯。 2.5.7 氯仿：分析纯。 2.5.8 乙膊：色谱纯。 2.5.9 环已烷：分析纯。 2.5.10 氯化钠：分析纯。 2.6 溶液 2.6.1 氯霉素标准液：准确称取氯霉素 50mg，用甲醇溶解，使成浓度为 500g/mL 的标准储备液， DB34/T207-2000 置 4冰箱中保存。临用前，取此储备液，用甲醇稀释成浓度为 100ng/mL 的标准工作液。 2.6.2 异氯霉素标准液：准确称取异氯霉素 50mg
24、，用甲醇溶解，使成浓度为 500g/mL 的标准储备液，置 4冰箱中保存。临用前，取此储备液，用甲醇稀释成浓度为 100ng/mL 的内标液。 2.6.3 0.1mol/L KH2PO4和Na2HPO4的缓冲液（pH6.8 0.1 ）：用相应的干试剂调节pH 为 6.8。 2.6.4 - 葡萄糖醛酸-IX ：用缓冲液稀释至 4000 单位/mL 。 2.6.5 Sylon HTP 溶液：六甲基二硅烷（HMDS ）3 份，氯化三甲基硅烷 1 份，吡啶 9 份。 2.7 分析 2.7.1 抽取和纯化 2.7.1.1 将组织解冻，称取肌肉组织 10g（精确到 0.1g） ，置于 50ml 玻璃离心管
25、中。向每个样品中加100l 异氯霉毒内标准（100ng/mL ）。 2.7.1.2 每个分析样品配制 1 个空白、 3 个添加样品。向空白组织中加内标。回收率样品中加工作液，制成 0.5ppb（50l 工作液），1.0ppb （100l 工作液），2.0ppb(200 l 工作液 )的样品。由添加样品得到的数据用于计算。 2.7.1.3 向所有空白、添加对照和样品管中加 15ml 磷酸盐缓冲液（pH6.8 0.1）和 200l - 葡萄糖醛酸酶（800 单位），在室温条件下混合 30-60s。 2.7.1.4 将所有管置于 37保温 90min。保温后，样品可以放在冰箱中过夜。 2.7.1.5
26、 样品放回室温平衡。向各管加乙酸乙酯 15ml，旋涡混合 30s 提取氯霉素。 2.7.1.6 2000r/min 的速度离心 2min。 2.7.1.7 用一次性滴管吸取乙酸乙酯液（上层）留用并转移到另一干净的 50ml 离心管中。 2.7.1.8 重复（步骤 5-7）提取样品，并合并提取液。 2.7.1.9 在氮气流下，用温度约 60的沙浴去除乙酸乙酯使体积约为 1ml。 2.7.1.10 向各管加 4%氯化钠溶液 4ml，混合 5-10s。 2.7.1.11 继续蒸发去除乙酸乙酯至乙酸乙酯层干，剩下小量的油性残留物。 2.7.1.12 向 4%氯化钠溶液层加正已烷 4ml，混合 10s。
27、 2000r/min 的速度离心 1min，弃掉上层。 2.7.1.13 重复步骤 12。 注意：以下步骤 14 至步骤 17 必须立即连续做完。切莫让吸附剂变干。 2.7.1.14 给每个样品、空白和添加对照准备一根C18柱，顺序用 5ml甲醇、 5ml氯仿、 5ml甲醇和 10ml水洗涤C18柱。弃掉洗涤液。 2.7.1.15 用一次性巴氏吸管吸取全部水溶液装入C18柱过柱，弃掉流出液。 2.7.1.16 用 1ml水混合淋洗样品管 2 遍，并将淋洗液加入C18柱过柱，弃掉流出液。 2.7.1.17 用 1ml水，然后 2ml甲醇- 水（ 2+8）洗涤 C18柱。让最后一次洗涤液完全流出C
28、18柱。弃掉洗液。 2.7.1.18 用乙腈将C18柱中的氯霉素洗脱，洗脱 2 次，每次 1.5ml，合并洗脱液到一干净的 10ml培养管中。 2.7.1.19 在氮气流下，用温度约 60的沙浴蒸发去除乙腈至约为 0.5ml。 2.7.1.20 转移至 1ml 锥形瓶中。用 0.5ml 乙腈洗涤 10ml 培养管，旋涡混合 5s，并将洗涤液加到 1ml锥形瓶中。在 60用氮气流吹干。 注意：从这儿开始要防潮。 2.7.1.21 向干的残留物中加 200l Syion HTP 。 2.7.1.22 盖塞并旋涡混合 5s。在 60-70沙浴中反应 15min。 2.7.1.23 60用氮气流吹干去
29、除多余的试剂蒸发至 10 l。 注意：此步过长的吹干时间可导致丢失分析物。 DB34/T207-2000 2.7.1.24 将残留物重新溶于 100l 环已烷- 正已烷（6+4）中，旋涡混合 5s。 2.7.1.25 注入适量微升体积的衍生物到气相色谱仪作定量测定。 2.7.2 测定条件 2.7.2.1 色谱柱：DB-1 ，30m 0.254mmi.d. 。 2.7.2.2 载气：氦气，线性速度 29cm/s。 2.7.2.3 初始柱温：80，维持 1min。 2.7.2.4 温度程序：设定 30/min 升至 260，维持 10min 或直到对位异体和氯霉素已经流出。然后设定 30 /min
30、 升至 300，维持 5min 以确保所有的样品已经流出。 2.7.2.5 进样室温度 280。 2.7.2.6 检测器温度：350 。 2.7.2.7 预期保留时间：氯霉素 10-11min，异氯霉素 9.5-10.5min。 2.7.2.8 预期响应值：对 0.2ng 氯霉素可以达到 50%全刻度。 2.7.2.9 进样量：适量。 2.7.3 样品测定 分别注入适量标准工作溶液及适当浓度的样品溶液于气相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析。响应值均应在仪器检测的线性范围之内。 2.7.4 计算 用色谱数据处理机或按下式计算试样中氯霉素残留量： W= HCs HsC 式中：W 试样中氯霉素残
31、留量（g/g） H试样液中氯霉素的峰高（ mm） Hs标准工作液中氯霉素的峰高（ mm） Cs标准工作液中氯霉素的浓度（g/mL ） C最终试样液所代表的试样的浓度（g/ mL ） 注：计算结果需扣除空白值。 2.8 起草说明 2.8.1 本方法参考美国农业部 FSIS 的测定方法。 2.8.2 标准工作液的线性范围为 0.5-2.0ng/mL。 2.8.3 回收率为 50%-60%。 2.8.4 批内变异系数10% ，批间变异系数15% 。 DB34/T207-2000 方法 2 附 录 （试验方法的附录） 克伦特罗在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法 High performanc
32、e liquid chromatographic method for the determination of clenbuterol residues in edible tissues of animal 1 药物概述 1.1 药品名称 克伦特罗 Clebuterol 1.2 化学文摘名称 - （叔丁氨基）甲基-4 氨基-3 ，5- 二苯甲醇盐酸盐 4-Amino-alpha-(tert-butylamimo)methyl-3,5-dichlorobenzyl alcohol hydrochioride 1.3 化学结构式 1.4 分子式 C12H18CL2N2OHCL 1.5 分子量
33、313.65 2 克伦特罗残留的高效液相色谱测定法 2.1 适用范围 本方法用于测定畜禽肌肉和内脏组织中克伦特罗的残留量。用 0.5ml 甲醇液溶解后取 100l 供高效液相色谱仪检测。 2.7.2 检测条件 2.7.2.1 色谱柱：C18柱，150mm 6.0mm i.d. 。 2.7.2.2 流动相：甲醇- 水（75+25 ）。 2.7.2.3 流动相流速：0.65ml/min 。 2.7.2.4 检测波长：243nm 。 2.7.2.5 进样量：100l 。 2.7.3 样品测定 分析样品按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析。 2.7.4 计算 用色谱数据处理机或按下式计算试样中克伦特
34、罗残留量： DB34/T207-2000 W= HCs HsC 式中：W 试样中克伦特罗的残留量（g/g ）。 H样液中克伦特罗的峰高（ mm）。 Hs标准工作溶液中克伦特罗的峰高（ mm） Cs标准工作液中克伦特罗的浓度（g/mL ）。 C最终试样中所代表的试样浓度（g/mL ）。 注：计算结果需扣除空白值。 2.8 起草说明 2.8.1 本方法参考国内外有关文献，经研究制订。 2.8.2 标准工作液的线性范围为 0.1-1.0 g/mL。 2.8.3 回收率为 80%20% 。 2.8.4 批内变异系数10% ，批间变异系数15% 。 方法 3 附 录 （试验方法的附录） 已烯雌酚在动物可
35、食性组织中残留的分光光度计检测方法 Spectropliotometric method for the determination of diethylstilbestrol residues in edible tissues of animal 1 药物概述 1.1 药品名称 已稀雌酚 Diethylstilbestrol 1.2 化学文摘名称 4，4-(1,2- 二乙基 -1，2- 已烯基) 双苯酚 4，4-(1,2-Diethyl-1 ， 2-ethenediy)bisphenol 1.3 化学结构式 1.4 分子式 C18H20O2DB34/T207-2000 1.5 分子量 26
36、8.36 1.6 作用与用途 雌激素类药。用于不明显发情的催情。 1.7 用法与用量 肌肉注射 一次量 马 10-20mg 牛 5-20mg 羊 1-3mg 猪 3-10mg 犬 0.2-5mg 1.8 在动物组织中的最高残留限量 未定 2 已烯雌酚残留的分光光度测定法 2.1 适用范围 本方法用于测定各种动物肌肉组织中已烯雌酚残留量。 2.2 原理 组织经正已烷和氢氧化钠溶液依次提取。取部分含已烯雌酚的氢氧化钠溶液，用磷酸调 PH。加乙醇和水至一定体积。此澄清液在紫外光下辐射，使已烯雌酚转变为辊式的化合物，测定其吸收值，由标准曲线求得其含量。 2.3 可靠的检测限 本方法在肌肉组织中的检测限
37、为 0.05g/g 2.4 仪器 2.4.1 分光光度计。 2.4.2 紫外灯。 2.4.3 匀浆机。 2.4.4 电子天平：感量 0.00001g。 2.4.5 分液漏斗。 2.4.6 锥形瓶。 2.4.7 容量瓶。 2.5 试剂 2.5.1 已烯雌酚标准品：纯度98% 。 2.5.2 正已烷：分析纯，经重蒸馏。 2.5.3 乙醇：分析纯。 2.5.4 磷酸：分析纯。 2.5.5 氢氧化钠：分析纯。 2.5.6 无水硫酸钠；分析纯。 2.6 溶液 已烯雌酚标准液：准确称取已烯雌酚标准品 25.0g ，加精制花生油至 50.00mg（每毫克花生油中含已烯雌酚 0.5g ）制成储备液。准确称取储
38、备液 100.0mg（含已烯雌酚 50 g）于 50ml 烧杯中，用 50ml 正已烷定量转移至分液漏斗中。用氢氧化钠溶液 20， 20 和 10ml 提取三次，合并氢氧化钠溶液。取氢氧化钠 0.5、 1.0、 2.5、 5.0、 7.5、和 10.0ml（分别含已烯雌酚 0.5、 1.0、 2.5、 5.0、 7.5 和 10.0g ）分别置于一组 25ml 试管中，用氢氧化钠溶液补足至 15ml。加入一定量的磷酸中和。再加乙醇2.5ml，最后用水稀释至 25mL。分别制成 0.02、 0.04、 0.10、 0.20、 0.30、 0.40g/mL 的标准工作液，用于绘制标准曲线。 2.7
39、 分析 2.7.1 辐射条件的选择（注意保护眼睛，勿直接接触紫外线） DB34/T207-2000 移取适当体积的标准工作液（0.04 g/mL），放入比色池中，垂直放置在紫外灯的 7cm 处，辐照10min，在波长 418nm 处测定其吸收度，以未辐照的溶液为参比液。然后每辐照 1-2min 重复测定其吸光度。记录达到最大吸光度的辐照时间。重复以上试验，或改变比色池和紫外灯的距离，直至得到最合适的条件，得出稳定的并可以重复的最大吸光度（约为 0.09）。记录辐照时间和距离，以后试验按此条件进行。 注：温度对辐照时间长短有一定影响，室温高辐照时间则短。 2.7.2 样品测定 称取组织样品 5-
40、15g（精确到 0.1g）于 100ml 烧杯中，加入 20-50g 无水硫酸钠，充分混匀，定量转入容量瓶中。加入正已烷 100ml，强烈振荡 2min，静置。取澄清液 80ml（相当于 4-12g） ，置分液漏斗中，加 20ml 氢氧化钠溶液，强烈振荡 2min，静置分层（必要时可微热）。取 15ml 氢氧化钠溶液（相当于 3-9g 试样），置于试管中，加入一定量的磷酸中和，再加乙醇 2.5ml，然后用水稀释至25ml，用分光光度仪测定其吸光度。 2.7.3 计算 按下式计算样品中已烯雌酚含量： W= 式中：W 试样中已烯雌酚残留量（g/g） Cs C Cs按测得的吸光度从标准曲线上查得每毫
41、升溶液中含有的已烯雌酚量（g ） C每毫升样液含有的试样量（g ） 2.8 起草说明 2.8.1 本方法参考 AOACOfficial Methods of Analysis 39.018-39.021,14thEdition,1984,FDA-Anima Drug Analitical Manual,Feed 1-8,1985。 2.8.2 标准工作液的线性范围为 0.02-0.4 g/mL。 2.8.3 回收率为 80%20% 。 2.8.4 批内变异系数10% ，批间变异系数15% 。 方法 4 附 录 （试验方法的附录） 恩诺沙星在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法 High
42、performance liquid chromatographic method for the determination of enrofloxacin residues in edible tissues of animal 1 药物概述 1.1 药品名称 恩诺沙星 Enrofloxacin 1.2 化学文摘名称 1-环丙基-6- 氟-4- 氧代-1 ，4- 二氢-7- （4- 乙基-1- 哌嗪基）-3- 喹啉羧酸 1-Cyclopropyl-6-fluro-4-oxo-1，4-dihydrc-7-(4-ethyl-1-piperazinyl)-3-quinoline carboxyl
43、ic acid DB34/T207-2000 1.3 化学结构式 1.4 分子式 C19H22FN3O31.5 分子量 359.40 1.6 作用与用途 抗菌药。主要用于畜禽细菌和支原体感染。 1.7 用法与用量 混饮 鸡 每 1L 水 25-75mg 一日 2 次 连用 3-5 天 肌内注射 一次量 每 1kg 体重 猪、鸡 2.5mg 一日 2 次 连用 3 天 1.8 在动物组织中的最高残留限量 按欧共体在动物可食性组织中的最高残留限量规定为 0.03mg/kg。 2 恩诺沙星残留的高效液相色谱测定法 2.1 本方法用于测定鸡的血清、肌肉、脂肪、肝脏和肾脏组织中恩诺沙星的残留量。 2.2
44、 原理 组织经碱性乙腈提取处理，离心去除沉淀，上清液用正已烷脱去脂肪，离心后留取下层，加正丙醇浓缩后，用磷酸盐缓冲液重新溶解残余物，过滤，供高效液相色谱仪分析。 2.3 可靠的检测限 本方法以鸡可食性组织中的检测限为 0.01g/g。 2.4 仪器 2.4.1 高效液相色谱仪，配荧光检测器。 2.4.2 匀浆机。 2.4.3 离心机。 2.4.4 电热恒温水浴箱。 2.4.5 旋涡混合器。 2.4.6 电子天平：感量 0.0001g。 2.5 药品试剂 2.5.1 恩诺沙星标准品：纯度98% 。 2.5.2 乙腈：分析纯。 2.5.3 三乙胺：分析纯。 2.5.4 正已烷：分析纯。 DB34/
45、T207-2000 2.5.5 正丙醇：分析纯。 2.5.6 磷酸：分析纯。 2.6 溶液 2.6.1 恩诺沙星标准液：准确称取恩诺言沙星 10.0mg，用乙腈溶解，使成浓度为 100g/mL 的标准储备液，置 4冰箱中保存。临用前，取此储备液用乙腈稀释成浓度为 1g/mL 的标准工作液。 2.6.2 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH12 ） 2.6.3 提取溶液：乙腈-0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH12 ）（ 3+1）。 2.7 分析 2.7.1 提取和纯化 2.7.1.1 将组织解冻，称取组织 2g（精确到 0.1g），加 20ml 提取溶液，高速匀浆。 2.7.1.2 以 30
46、00r/min 的速度离心 5min，移取上清液留用。 2.7.1.3 向残渣沉淀中再加 20ml 提取溶液，搅拌均匀，并振摇 10min。 2.7.1.4 以 3000r/min 的速度离心 5min，移取上清液留用并合并。 2.7.1.5 向上清液中加乙腈饱和的正已烷 10ml，搅拌均匀，并振摇 10min。 2.7.1.6 以 3000r/min 的速度离心 5min。 2.7.1.7 弃去上清液，留取下层。 2.7.1.8 向下层液加正丙醇 10ml，50 （真空）减压浓缩至干。 2.7.1.9 用 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH12 ）2.0ml 溶解残余物。 2.7.1.10 过滤，收集滤液供高效液相色谱仪分析。 2.7.2 测定
