1、 CS 7 1. 1 00. 70 Y 42 家GB/24800.2-2009 激素的测十一c 白白2 Determination of 4 1 gl日cocorticoidsin cosmetics by LC-MS-1值Sand TLC method 2010-001实施2009- 1 1-30发布发布中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局中国国家标准化管理委员会中华人民共和国国家标准化妆品中四十一种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法GB/T 24800.2 2009 今非中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:68523946685
2、17548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销今非开本880X 1230 1/16 印张1.25 字数34千字2010年5月第一版2010年5月第一次印刷今非书号:155066 1-40110 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533目四昌本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。GB/24800.2-2009 本标准起草单位:大连市产品质量监督检验所、大连标准检测技术研究中心、国家日化产品质量监督检验中心。本标准主要起草人:潘炜、李鹏、毛
3、希琴、王春燕、郑顺利、关成、于利军、董广彬。I G/T 24800.2-2009 号|本标准中的被测物质是我国化妆品卫生规范规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时，则化妆品成品应符合化妆品卫生规范对化妆品的一般要求，即在正常及合理的、可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害。目前我国尚未规定这些物质的限量值，本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。H 1 范围化妆品中四十一种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法GB/24800.2一2009本标准规定了化妆品中41种糖皮质激素的液相色谱/串联质谱方法和
4、薄层层析方法二种测定方法。本标准液相色谱/串联质谱测定方法适用于化妆品中糖皮质激素的定量测定，其检出限为O. 03g/g，定量限为O.1g/g。本标准薄层层析方法适用于化妆品中糖皮质激素的定性筛选。点样量为10mg时，其检出限为50g/g;点样量为20mg时，其检出限可达25g/g。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确
5、度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义CGB/T 6379. 1 一2004，ISO5725一1:1994, IDT) GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法CGB/T6379.2-2004 , ISO 5725-2: 1994 , IDT) GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法CGB/T6682-2008 , ISO 3696: 1987 , MOD) 3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1 糖皮质激素gl ucocorticoids 糖皮质激素类药物属简体类化合物，外用糖皮质激素的基本化学
6、结构为氢化可的松结构。即含17个碳原子的环戊烧并多氢菲母核、C10和C13位上有甲基、C17位上有二碳侧链、C3位朋基和C4一C5位双键。在此基础上，进行C1一C2位脱氢、C6一位甲基化、C9位氟化、C11位起基化等修饰后，构成一类应用范围不同、效果强弱不同的糖皮质激素类药物。4 液相色谱m串联质谱法4. 1 原理膏霜类化妆品用饱和氯化纳溶液分散，精油类化妆品用正己炕分散，用乙睛从分散液中提取激素类药物，用亚铁氧化饵和醋酸辞从提取液中沉淀大分子基质，经固相萃取小柱净化，用反相高效液相色谱/串联质谱测定，外标法定量。4.2 试剂与标准物质4.2. 1 甲醇:色谱纯。4.2.2 乙睛:色谱纯。4.
7、2.3 乙酸:色谱纯。4.2.4 正己烧:分析纯。l GB/T 24800.2-2009 4.2.5 饱和氯化纳溶液。4.2.6 10%亚铁氨化饵溶液:称量115g K4 F e ( CN) 6 3 Hz 0固体，用水溶解定容至1L。4.2.7 20%乙酸钵溶液:称量239g C4H604Zn. 2HzO固体，用水溶解定容至1L。4. 2. 8 Oasis HLB固相萃取小柱1)或相当者:60mg,3 mL。4.2.9 样品过滤器:有机膜，孔径。.2m。4.2. 10 标准物质:41种糖皮质激素标准物质的分子式、相对分子质量、CAS登录号列于表1，纯度不小于99.0%。化学结构图参见附录A的图
8、A.10表141种糖皮质激素药物中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量l 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 2 曲安西龙T riamcinolone 124-947 C21 H 27 F06 394.179 2 泼尼松龙Prednisolone 50-24-8 C21 H2805 360. 193 7 氢化可的松Hydrocortisone 50-23-7 C21H3005 362.209 3 泼尼松Prednisone 53032 C
9、21H2605 358.178 0 可的松Cortisone 5306-5 C21H2805 360. 193 7 甲基泼尼松龙h在ethylprednisolone8343皿2C22H3005 374.209 3 倍他米松Betamethasone 37844血9C22 H 29 F05 392. 199 9 地塞米松Dexamethasone 5002皿2C22 H29F05 392. 199 9 氟米松Fl umethasone 2135-17-3 C22 H 28 F2 0 5 410. 190 5 倍氯米松Beclomethasone 441939O C22 H 29 CI05 40
10、8. 170 4 曲安奈德Triamcinolone acetonide 76-25-5 C21H31F06 434. 210 5 氟氢缩松Fl udroxycortide 1524-88-5 C24H33F06 436.226 1 由安西龙双醋酸醋Triamcinolone diacetate 67-78-7 C25 H 31 F08 478.200 3 泼尼松龙醋酸醋Prednisolone 21acetate 52皿21-1C23H3006 402.204 2 氟米龙Fl uoromethalone 426-13-1 C22H29F04 376. 205 0 氢化可的松醋酸醋Hydroc
11、ortisone 21-acetate 50033 C23H3206 404.220 0 地夫可特Deflazacort 1448447O C25H31N06 441. 215 1 氟氢可的松醋酸醋Fludrocortisone 21 acetate 514-36-3 C23H31F06 422.210 5 泼厄松醋酸醋Predniso日e21-acetate 125-10-0 C23 H 28 0 6 400. 188 6 可的松醋酸醋Cortisone 21 acetate 50-04-4 C23H3006 402.204 2 甲基泼尼松龙醋酸醋h在ethylprednisolone21a
12、cetate 53-36-1 C24H3206 416.219 9 倍他米松醋酸醋Betamethasone 21-acetate 987-24-6 C24H31F06 434.210 5 布地奈德Budesonide 5137229町3C25H3406 430. 235 5 氢化可的松丁酸醋Hydrocortisone 17-butyrate 13609町67-1C25H3606 432.251 2 地塞米松醋酸醋Dexamethasone 21acetate 1177-87-3 C24H31F06 434.210 5 1) Oasis HLB固相萃取小柱是Waters公司产品的商品名称，给
13、出这一信息是为了方便本标准的使用者。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。GB/lf 24800.2-2009 表1(续)序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量26 氟米龙醋酸醋Fluorometholone 17-acetate 3801-06叩7C24 H31FOs 418.215 6 27 氢化可的松戊酸醋Hydrocortisone 17-valerate 57524叩89-7C26 H 3S 0 6 446. 266 8 28 曲安奈德醋酸醋Triamcinolone acetonide acetate 3870户07-3C26H33F07 476.221
14、 0 29 氟轻松醋酸醋Fluocinonide 356-127 C26H32F207 494.211 6 30 二氟拉松双醋酸醋Diflorasone diacetate 3356431-7 C26H32F207 494.211 6 31 倍他米松戊酸醋Betamethasone 17-valerate 2152-445 C27 H37 F06 476.257 4 32 泼尼卡醋Prednicarba te 73771-04-7 C27H360S 488. 241 0 33 晗西奈德Halcinonide 309335-4 C24 H32 CIFOs 454. 192 2 34 阿氯米松双丙
15、酸醋Alclomethasone di propiona te 66734-13-2 C28 H37 CI07 520. 222 8 35 安西奈德Amcinonide 51022但696C2sH3SF07 502. 236 7 36 氯倍他索丙酸醋Clo betasol 17血propionate25122四467C25 H32 CIF05 466. 192 2 37 氟替卡松丙酸醋Fluticasone propionate 80474-14-2 C25 H31 F3 0 5 S 500. 184 4 38 莫米他松糠酸醋Mometasone furoate 83919-237 C27 H
16、30 Clz 0 6 520. 141 9 39 倍他米松双丙酸酶Betamethasone di propiona te 5593-204 C28 H37 F07 504. 252 3 40 倍氯米松双丙酸醋Beclometasone di propiona te 5534-098 C28 H37 CI07 520.222 8 41 氯倍他松丁酸醋Clo betasone 17町butyrate25122 57O C26 H32 CIF05 478.192 2 4.2. 11 标准贮备液。mg/mL):准确称取标准物质(4.2.10)各10.0mg，用甲醇分别溶解定容至10.0 mL，于一1
17、8oc下冷冻保存。4.2.12 标准混合工作溶液:分别取(4.2.11)标准贮备液1.0 mL混合，用甲醇定容于50mL，制成浓度为20g/mL的标准混合储备溶液，于一18oc下冷冻保存。临用时用40%乙腊水溶液稀释成0.05g/mL、O.10g/mL、0.20g/mL、0.40g/mL、0.80g/mL系列浓度的标准混合工作溶液，用于制作标准曲线。4.3 仪器4.3. 1 高效液相色谱一串联质谱检测器(ESI源)。4.3.2 分析天平:感量0.1mg;O. 01 mg。4.3.3 游涡混合器。4.3.4 离心机:转速5000 r/mi口，容量10mL;50 mL。4.4 试样制备4.4. 1
18、 提取4. 4. 1. 1 膏霜类化妆品称取0.2g样品(精确至0.01g)于10mL具塞塑料离心管中，加入3mL饱和氯化纳溶液(4.2.5)，于游涡混合器上混合使样品分散，准确加入2mL乙睛，充分涡旋提取2mi口，5000 r/min离心10min , 吸出上层清液于另一50mL具塞塑料离心管中，下层氯化纳溶液用2mL乙腊重复提取步骤一次，合并二次乙腊提取液，往提取液中准确加入40mL高纯水，混匀，加入亚铁氟化饵溶液(4. 2. 6) O. 2 mL，混匀，加入乙酸钵溶液(4. 2. 7) O. 2 mL，混匀，5000 r/min离心10min，清液待进行固相萃取小柱净化。3 G/T 24
19、800.2一20094. 4. 1. 2 精油类化妆品称取O.5 g样品(精确至0.01g)于20mL尖底具塞塑料离心管中，加入正己烧4mL，于被涡混合器上混合至样品分散，准确加入50%乙腊水溶液4mL，充分游涡提取2mi且，5000 r/min离心10mi且，吸取下层提取液至一50mL具塞塑料离心管中，上层正己烧用4mL 50%乙腊水溶液重复上述提取步骤一次，合并二次50%乙腊提取液，往提取液中准确加入36mL高纯水，混合，加入亚铁氧化饵溶液(4.2.6)0.1 mL，混匀，加入乙酸钵溶液(4.2.7)0.1mL，混匀，5000 r/min离心10mi且，清液待进行固相萃取小柱净化。4. 4
20、. 1. 3 爽肤水类、洗面奶类、面膜类等化妆品按4.4.1. 1的方法处理。4.4.2 净化Oasis HLB固相萃取小柱(4.2.的接上固相萃取装置，小柱上端紧密连接一20mL,._, 50 mL垫有滤纸的磨口漏斗，小柱预先依次用5mL甲醇、10mL水进行活化。将待净化的样品清液(4.4.1)倒入漏斗，经滤纸过滤后流经小柱，待样品溶液自然流尽后，用10%的乙腊水溶液10mL清洗小柱，待清洗液自然流尽后，取下漏斗，用吸球吹出小柱中的残留液。在柱出口处接一10mL具塞玻璃离心管，用4 mL甲醇淋洗小柱，待甲醇自然流尽后，用吸球吹出小柱中残留液。取下离心管，准确加入4.0mL高纯水，混合，经0.
21、2m样品滤器过滤后作为测定液。也可将接收的4mL甲醇用氮气吹干，根据需要的浓度用50%的甲醇水溶液重新溶解定容后测定。4.5 测定4.5. 1 液相色谱参考条件以下为液相色谱参考条件:a) 色谱柱:SBC18 , 50 mmX2. 1 mm(内径),1. 8m，或相当者;b) 柱温:室温;c) 液相色谱流动相及参考分离条件见表2;d) 进样体积:5L。表2液相色谱流动相及参考分离条件时间/min流速/(mL/min)流动相A(水，含0.1%乙酸)流动相B(乙睛，含0.1%乙酸)。0.3 68 32 3 0.3 68 32 12 0.3 25 75 14 0.3 25 75 14. 1 0.3
22、68 32 16 0.3 68 32 4.5.2 质谱参考条件以下为质谱参考条件:a) 电离方式:电喷雾电离，ESI(+); b) 离子喷雾电压:4kV; c) 雾化气:氮气，38Psi; d) 干燥气:氮气，流速:12 L/mi且，温度:350oC; e) 碰撞气:氮气。f) 检测方式:多反应监测(MRM)。41种糖皮质激素药物的质谱测定参数见表3D4 GB/24800.2一2009表341种糖皮质激素药物的质谱测定参数序号药物名称出峰时间相对分子质量母离子(锥孔电压)子离子(碰撞能量)l 曲安西龙0.86 394.1792 395.2(140) 225. 1 (14) 357. 1(8)
23、2 泼尼松龙1. 39 360. 193 7 361. 2(110) 146.9(20) 343. 1(6) 3 氢化考的松1. 38 362.209 3 363.2(130) 121. 0(24) 105. 1(50) 4 泼尼松1. 47 358.1780 359.2(110) 147.0(24) 341. 1(6) 5 可的松1. 53 360. 193 7 361. 2(150) 163. 1(20) 121. 0(30) 6 甲基泼尼松龙2.01 374.209 3 375.2(110) 357. 1(6) 161. 1(20) 7 倍他米松2.26 392. 199 9 393.2
24、(130) 355.0(4) 146.8(24) 8 地塞米松2.42 392. 199 9 393.2(130) 355.0(4) 146.8(24) 9 氟米松2.36 410. 190 5 41 1. 2(120) 253.0(10) 121. 1(34) 10 倍氯米松3. 15 408. 170 4 409.2 (110) 39 1. 1(6) 146.9(30) 11 曲安奈德3.81 434.210 5 435.2(110) 338.9(10) 396.9(10) 12 氟氢缩松3.55 436.226 1 437.2(160) 120.8(40) 180. 9(30) 13 曲
25、安西龙双醋酸醋4.60 478.200 3 479.2(140) 321. 0(10) 440.9(4) 14 泼尼松龙醋酸醋4. 79 402.204 2 403.2 (110) 146.8(24) 384. 9(6) 15 氟米龙4.35 376. 205 0 377.2(110) 278.9 (10) 320.9(8) 16 氢化可的松醋酸醋4. 66 404.220 0 405.2 (150) 309. 1 (12) 120.8(34) 17 地夫可特5.35 441. 215 1 442.2 (180) 123.9(50) 141. 9(36) 18 氟氢可的松醋酸醋4.95 422
26、. 210 5 423.2(1 60) 238.9(22) 120.9(36) 19 泼尼松醋酸醋5. 64 400. 188 6 401. 2(120) 295.0(8) 146. 8(24) 20 可的松醋酸醋5. 75 402.204 2 403.2 (160) 162.8(24) 343.0(1 6) 21 甲基泼尼松龙醋酸6.42 416.219 9 417.2 (110) 399.2(6) 253.2(18) 22 倍他米松醋酸醋6.50 434.210 5 435.2 (110) 309.0(8) 337.0(8) 23 布地奈德7.88 430.235 5 43 1. 2(11
27、0) 413. 1(6) 146.9(30) 24 氢化可的松丁酸醋7.23 432. 251 2 433.2 (140) 120.8(24) 345.0(8) 25 地塞米松醋酸醋6.95 434.210 5 435.2 (110) 309.0(8) 337.0(8) 26 氟米龙醋酸醋7.45 418.215 6 419.2(110) 279.0(10) 321. 0(8) 27 氢化可的松戊酸醋8.56 446. 266 8 447.3 (140) 120.8(30) 345.2(8) 28 曲安奈德醋酸醋8.60 476.221 0 477.2 (110) 320.8(12) 338.
28、9(10) 29 氟轻松醋酸醋8.48 494. 211 6 495.2 (120) 120.8(40) 337.0(12) 30 二氟拉松双醋酸醋8.47 494.211 6 495.2 (120) 316.8(8) 278.8(10) 31 倍他米松戊酸醋9.45 476.257 4 477.3(110) 354.9(4) 278.8 (14) 32 泼尼卡醋10.28 488.241 0 489.2 (120) 114.8(12) 380.9(6) 33 哈西奈德9.66 454. 192 2 455.2 (160) 121. 0(40) 104.9(48) 34 阿氯米松双丙酸醋10.
29、32 520.222 8 52 1. 2(130) 301. 0 (10) 279.0(10) 35 安西奈德10.29 502.236 7 503.2(110) 321. 0 (14) 338.9(10) 5 GB/24800.2一2009表3(续)序号药物名称出峰时间相对分子质量母离子(锥孔电压)子离子(碰撞能量)36 氯倍他索丙酸醋10.26 466. 192 2 467.2 (110) 354.9(8) 372.9(6) 37 氟替卡松丙酸醋10.25 500. 184 4 50 1. 2(110) 292.9 (10) 312.9(8) 38 莫米他松糠酸醋10. 65 520. 1
30、41 9 52 1. 1 (120) 503.0(4) 263.0(24) 39 倍他米松双丙酸醋10. 68 504.252 3 505.2(110) 278.9 (12) 318.9 (10) 40 倍氯米松双丙酸醋11. 43 520.222 8 52 1. 2 (120) 319.0(10) 503.0(4) 41 氯倍他松丁酸醋11. 71 478.192 2 479.2 (1 50) 278.9 (14) 342. 8 (12) 4.5.3 测定结果4.5.3. 1 定性结果在相同实验条件下测定标准溶液和样品溶液，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中的某种组分峰的保留时
31、间一致，并且所选择的两对子离子的质荷比一致，样品定性离子相对丰度与浓度相当标准工作溶液的定性离子的相对丰度进行比较时，相对偏差不超过表4规定的范围，则可判定样品中存在该组分。41种糖皮质激素标准物质提取离子(定量)质谱图参见附录B的图B.104.5.3.2 定量结果相同实验条件下测定标准溶液和样品溶液，制作标准曲线，样品中糖皮质激素的含量用外标法定量，按式(1)计算含量。Ri = Ci XV/m ( 1 ) 式中:Ri样品中某种组分含量，单位为微克每克(g/g);Ci-一一由标准曲线得出的样液中某种组分的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一一样液定容体积，单位为毫升(mL); m一一样品
32、质量，单位为克(g)。4.6 精密度本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。膏霜类和精油类化妆品重复性和再现性标准差的值参见附录C的表C.10表4定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%允许的相对偏差/%+20 Ru qL +30 三三10土5050 2050 1020 5 薄层层析法5. 1 原理化妆品中的糖皮质激素药物经提取、净化、浓缩后，点于高效硅胶板上，经展开、显色后与标准品的Rf值及显色特征进行比较，判断样品中是否存在糖皮质激素。5.2 试剂与材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/
33、T6682中规定的一级水。与4.2相同的试剂与材料不再列出。5.2. 1 乙酸乙醋。5.2.2 正己烧。5.2.3 无水乙醇。5.2.4 甲醇。5.2.5 浓硫酸。5.2.6 元水乙酸。5.2.7 茵香酶(anisaldehyde):对甲氧基苯甲晖，CAS#123-11一5J。5.2.8 四氮瞠蓝(bluetetrazolium) : CAS # 187122一3J。5.2.9 氢氧化锅。5.2.10 12% NaOH甲醇溶液:12g NaOH溶于100mL的甲醇中。G/T 24800.2-2009 5. 2. 11 标准混合工作溶液:分别取(4.2.11)标准贮备液各0.5mL，按表5分组分
34、别混合至10mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为50吨/mL。5.2. 12 薄层层析板:高效硅胶板F254s2), 100 mmX 100 mm，涂层厚度0.20mm，使用前在110oc烘箱中活化1h，置于干燥器中放冷至室温，备用。5.2. 13 展开剂:乙酸乙酶十正己烧(11+10，体积比)。5.2. 14 显色剂1:在冰水浴中依次向90mL的元水乙醇(5.2. 3)中加入5mL浓硫酸(5.2.5)和1mL 元水乙酸(5.2. 6) ，待混合均匀冷却后再向其中加入5mL的茵香醒(5.2. 7) ，混合均匀，待用。5.2. 15 显色剂2:称取20mg的四氮瞠蓝(5.2.8)溶于10mL甲醇(5
35、.2.4)溶液，再加入10mL 12% NaOH甲醇溶液(5.2.10)，现用现配。5.3 仪器5.3. 1 薄层色谱展开槽。5.3.2 微量注射器:20L。5.3.3 玻璃喷雾器。5.3.4 电吹风。5.3.5 紫外灯:254口m。5.3.6 其他仪器同4.305.4 试样制备5.4. 1 非精油类化妆品称取0.2g样品(精确至O.01 g)于10mL具塞塑料离心管中，加入3mL饱和氯化纳溶液(4.2.5)，于涡旋混合器上混合至样品分散，准确加入2mL乙睛，充分涡旋提取2min , 5 000 r/min离心10min，吸出上层清液于另一50mL具塞塑料离心管中，下层氯化纳溶液用2mL乙腊重
36、复提取步骤一次，合并二次乙腊提取液，往提取液中准确加入40mL高纯水，混匀，加入亚铁氧化饵溶液(4.2.6)0.2 mL，混匀，加入乙酸辛辛溶液(4.2.7)0.2mL，混匀，5000 r/min离心10min，清液待进行固相萃取小柱净化。Oasis HLB固相萃取小柱(4.2.8)接上固相萃取装置，小柱上端紧密连接一20mL,._, 50 mL垫有滤纸的磨口漏斗，小柱预先依次用5mL甲醇、10mL水进行活化。将待净化的样品溶液倒入漏斗，经滤纸过滤后流经小柱，待样品溶液自然流尽后，用10%的乙腊水溶液10mL清洗小柱，待清洗液自然流尽后，取下漏斗，用吸球吹出小柱中的残留溶液。在柱出口处接一10
37、mL具塞玻璃离心管，用4mL甲醇淋洗小柱，待甲醇自然流尽后，用吸球吹出柱中残留甲醇。用氮气将洗脱液吹至近干后准确加入0.1 mL甲醇，混匀后用于点板。5.4.2 精油类化妆品称取0.5g样品于10mL具塞塑料离心管中，加入0.5mL正己烧(5.2.2)混合均匀，准确加入0.5 mL甲醇(5.2.4)，于游涡混合器上充分提取2mi口，5000 r/min离心5mi口，甲醇层溶液直接用于点板。2) 本标准使用的高效硅胶板F254s是MERCK公司的产品，商品编号为1.15696。给出这一信息是为了方便本标准的使用者。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。7 GB/T 24800.2
38、一20095.5 薄层层析5.5. 1 预展用微量注射器在距离薄层色谱板下端1.0 cm的位置点上10.0L，._，20.0L的点样液，同时在水平位置上点上标准溶液(5.2.11)作为对照。同时点两张层析板。把薄层层析板放入装有甲醇的展开槽中，按倾斜上行法展开O.6 cm_ 1. 0 cm，从展开槽中取出薄层板，用电吹风将展开剂吹干，放置到干燥器中冷至室温，备用。5.5.2 展开及显色将(5.5. 1)项中预展后的薄层层析板放入预先用展开剂(5.2.13)蒸汽饱和10min后的展开槽中，按倾斜上行法展开，当展开剂前沿到达薄层板顶端时，从展开槽中取出薄层板，用电吹风将展开剂完全吹干后，置于紫外灯
39、(5.3.5)下观察，用铅笔记录可疑点。然后将显色剂1(5.2.14)均匀喷雾在其中的一张层析板上，用电吹风把展开剂吹干后放入100oC ,._, 110 oC的恒温干燥箱中烘7min,._, 10 min使之显色，取出后立即目视观察显色结果。再将显色剂2(5.2.15)均匀的喷雾在另一张层析板上，立即直接目视观察显色结果。41种糖皮质激素的参考Rf值、四氮唾蓝和茵香醒参考显色特征见表5041种糖皮质激素标准物质(5组)及实测样品的参考薄层色谱图参见附录D的图D.1。注:显色结果需马上目视观察。5.6 结果判定在紫外灯下观察，若试样无与标准品Rf值相同的斑点，即可判定该样品中未检出41种糖皮质
40、激素;若试样中存在与标准品Rf值相同的斑点，且经四氮瞠蓝和菌香瞪显色后具有与标准品相同特征，即可判定该样品含有何种糖皮质激素;若试样中存在与标准品相同Rf值的斑点，但经四氮瞠蓝和茵香酶显色后与标准品显色特征有异罗则需通过液相色谱/串联质谱法(第4章)进行确认。表541种糖皮质激素的分组、Rf值、四氮瞌蓝及菌番醋的显色特征分组标准物质Rf 菌香醋显色泼尼松0.09 由安奈德0.18 氢化可的松丁酸醋0.23 第I组氢化可的松戊酸醋O. 27 工氟拉松双醋酸醋0.34 氟轻松醋酸醋0.45 泼尼卡醋O. 55 泼尼松龙0.05 倍他米松O. 14 倍他米松戊酸醋0.26 氟米龙0.34 不显色第E
41、组倍他米松醋酸醋0.43 倍他米松双丙酸醋O. 57 哈西奈德O. 63 氟替卡松丙酸醋O. 73 8 G/T 24800.2一2009表5(续)分组标准物质Rf 四氮l唾蓝显色菌香醒显色地夫可特0.02 紫色铜绿甲基泼尼松龙0.06 紫色铜绿地塞米松O. 14 紫色豆绿布地奈德0.27 紫色铜绿第皿组甲基泼尼松龙醋酸醋0.28 紫色铜绿氢化可的松醋酸醋0.29 紫色锋紫地塞米松醋酸醋0.43 紫色豆绿安西奈德0.44 紫色黛紫莫米他松糠酸醋O. 56 铜绿氟米松O. 10 铜绿氟氢缩松0.16 驼色泼尼松醋酸醋0.21 豆绿曲安西龙双醋酸醋0.25 露重紫色豆绿第N组氟米龙醋酸醋0.31 不
42、显色铜绿曲安奈德醋酸醋0.44 紫色藏青阿氯米松双丙酸醋0.48 紫色铜绿氯倍他索丙酸醋O. 63 驼色铜绿氯倍他松丁酸醋0.69 紫色驼色曲安西龙0.05 铜绿氢化可的松O. 10 黛紫可的松O. 19 倍氯米松0.20 第V组泼尼松龙醋酸醋0.27 可的松醋酸醋0.32 紫色络紫氟氢可的松醋酸醋0.45 紫色藏青倍氯米松双丙酸醋O. 62 紫色铜绿9 G/T 24800.2一200910 附录A(资料性附录)41种糖皮质激素的英文名称、分子式、相对分子质量、CAS登录号及化学结构图Prednisolone 50 24 8 Hydrocortisone 50_23_7 曲安西龙泼尼松龙泼尼松
43、氢化可的松Cortisone 53 06 5 Dexamelhasone 50 02 2 OH C22Hz;FOs 392才999. 可的松甲基泼尼松龙倍他米松地塞米松Flumethasone 2135 17 3 Beclomethasone 4419 39 0 Triamcinolone. acelonide 76 25 5 Fludroxycortide 1524_88_5 CnH2aFPs 410.1905 川;二氟米松倍氯米松曲安奈德氟氢缩松Tnamcinolonediacelale 67 78 7 Fluoromethalone 426 13 1 曲安西龙双醋酸酶泼尼松龙醋酸酶氟米龙
44、氢化可的松醋酸酶Deflazacort 14484 47 0 C2sH3,N05 441.2151 。=地夫可特Prednisone 21.acelale 125 10 0 头。叫与。氟氢可的松醋酸酶泼尼松醋酸醋可的松醋酸酶图A.141种糖皮质激素的英文名称、分子式、相对分子质量、CAS登录号及化学结构图GB/T 24800.2-2009 Betamethasone 21-acetate 967_24叩BDexamethasone 21-acetate 1177自673Methylprednisolone21-ac制e凡坑1日ud田onide51372_29_3 OH ，、0布地奈德地塞米松醋
45、酸酶倍他米松醋酸醋甲基泼尼松龙醋酸酶Hydro叶isone17.b川yrate13809_67_1 Fluorometholone 17-acetale 3801_0飞7u门nu ，n呻苟m0J -4 句，4FhJd w 7 5 e 罚r e 回归几由-2 14 5户。阳叫回dMn问肌肉yE HC Triamcinolone acetonide acetale 3670 07 3 W川川:一。氢化可的松戊酸醋|曲安奈德醋酸醋氢化可的松丁酸醋氟米龙醋酸酶Fluocinonide 356 12 7 C2H32F207 494.2116 Belamelhasone 17.valerale 2152_
46、44_5 I Prednicarbale 73771 047 Diflorasone diacelale 33564 31 7 川门/r h川人氟轻松醋酸酶二氟拉松双醋酸酶倍他米松戊酸醋泼尼卡醋A比如melhasonedipro阴阳le66734_1 3_2 Halcinonide 3093 35 4 Clobelasol17-propionale 25122_46_7CI / C1SH32CIFOs 466.1922 哈西奈德|阿氯米松双丙酸酶安西奈德氯倍他索丙酸醋m。AfBMFL口叮二Beclomelha回nedipropionate5534_09.吗B。/-.;. 氟替卡松丙酸醋莫米他松
47、模酸醋倍他米松双丙酸酶倍氯米松双丙酸醋Clobetasone 17.butyrale 25122_57.:。氯倍他松丁酸醋图A.l(续)11 GB/T 24800.2一2009附录B(资料性附录)41种糖皮质激素标准物质提取离子(定量)质谱图-i ?zc li 毛Zc、, iR I h 咿i clobetasone 17啕butyratebeclometasone dpropionate 口lometasonefuroate betamethasone dproponate flutcasone proponate clobetasol 17 -proponate 曰mcinondepredn
48、carbate halcinonde A部beta门lethasone17-valerate fluocnolone acetonide dflorasone diacetate tramcinolone acetonide acetate fluorometholone 17 -acetate hydrocortsone butyrate betametllasone 21而acetatedexamethasone 21伽acetatemethylprednisolone 21-acetate cortisone 21-acetate prednisone 21acetate deflaza
49、co同白udrocortsone21-acetate prednisolone 21-acetate Ilydrocortisone 21-acetate tramcinolone diacetate flu口口methalone triamcinolone acetonide 到udroxycortidebeclomethasone flumethasone dexamethasone betamethasone methylpreclnisolone COI吃IS口neprednisone Ilydrocortisone 吗?、1主1.0)prednisolone tranlcnolone 图B.1 41种糖皮质激素标准物质提取离子(定量)质谱图12 GB/24800.2-2009
