1、GB 762987 1 适用范围 本标准适用于谷物中维生素B2含量的测定。2 测定原理 维生素B2（即核黄素）在445nm紫外光激发下产生荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品中核黄素的含量。 3 仪器和设备 3.1 荧光分光光度计； 3.2 分析天平（感量1mg，0.1mg）； 3.3 电热恒温水浴； 3.4 具塞玻璃刻度试管，15mL。 4 试剂 除有说明外均为分析纯，所用水为蒸馏水。 4.1 盐酸（GB 62277），0.1mol/L盐酸溶液：将8.5mL盐酸用水稀释至1000mL。
2、4.2 冰乙酸（GB 67678）。 4.3 0.02mol/L冰乙酸溶液，将1.8mL冰乙酸用水稀释至1000mL。 4.4 无水乙酸钠（GB 69481）或结晶乙酸钠（GB 69377），2.5mol/L水溶液。205g无水乙酸钠或345g结晶乙酸钠溶于水。稀释至1000mL。 4.5 高锰酸钾（GB 64377），40g/L水溶液。贮于棕色瓶中，置于暗处。该溶液可保存一周。 4.6 过氧化氢（HG 3108277），100mL/L水溶液。现用现配。 4.7 核黄素标准溶液。 4.7.1 核黄素贮备液：核黄素（Q/HG 22148974）于五氧化二磷干燥器中干燥24h，称取0.0500g，
3、溶解于0.02mol/L乙酸溶液（4.3）中，在蒸汽浴上恒速搅动至溶解，冷却后定容至500mL。盛入棕色瓶加甲苯覆盖，低温（4）保存。 该溶液每毫升含0.1mg核黄素。 4.7.2 核黄素贮备液：取核黄素贮备液（4.7.1）10mL，用0.02mol/L乙酸溶液（4.3）定容至100mL。盛入棕色瓶中加甲苯覆盖，低温（4）保存。 该溶液每毫升含10 g核黄素。 页码，1/3GB 7629872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR762900A.htm 4.7.3 核黄素标准工作液：取核黄素贮备液（4.7.2）5mL。用水定容至100mL，现用现配。 该溶
4、液每毫升含0.5 g核黄素。 测定样品前，预先在相同的条件下测定标准工作液的荧光强度，如有异常，需重新配制标准溶液。 4.8 荧光素标准溶液 4.8.1 荧光素贮备液：称取荧光素（Q/HG 2278668）0.0500g，用水溶解后定容至1000mL。盛入棕色瓶中，低温（4）保存。 该溶液每毫升含50 g荧光素。 4.8.2 荧光素标准工作液：取荧光素贮备液（4.8.1）1mL，用水定容至1000mL。盛入棕色瓶中，低温保存。 该溶液每毫升含0.05 g荧光素。 4.9 连二亚硫酸钠（Na2S2O4）（Q/HG 200165）。5 试样的选取和制备 5.1 选取有代表性的谷物样品（带壳籽粒需脱
5、壳），拣净杂质，按四分法缩减取样。 5.2 将样品在6065烘干后粉碎，过60号筛（0.25mm），装入磨口瓶中备用。 6 测定步骤 6.1 称样：称取谷物样品25g（准确至0.001g），约含核黄素5 g。将待测样品置于100mL容量瓶中。 同时称样，按GB 352383谷物、油料作物种子水分测定法测定样品的水分含量。 6.2 制备样液：往盛样品的容量瓶中加75mL盐酸溶液（4.1），于沸水浴中加热 30min。开始加热的510min时常摇动容量瓶，以防样品结块。冷却至室温后，加5mL乙酸钠溶液（4.4）摇匀，用水定容。该试液的pH为4.5。 通过中速干滤纸过滤，弃去最初的510mL滤液，收
6、集滤液于100mL 锥形瓶中。 以下操作应避免直射光。 6.3 杂质氧化：于a、b、c三支15mL刻度试管中各吸入样液（6.2）10mL（同时做平行），往试管a加入1mL核黄素标准工作液（4.7.3），往试管b、c各加入1mL蒸馏水。然后各加入冰乙酸（4.2）1mL，旋摇混匀后逐个加入高锰酸钾溶液（4.5）0.5mL，旋摇混 匀，静置2min再逐个加入过氧化氢溶液（4.6）0.5mL旋摇，使高锰酸钾颜色在10s内消退。加盖摇动试管，使试管中的气体逸尽。 6.4 测定：用荧光素溶液（4.8.2）调整荧光仪，使其稳定于一定数值，作为仪器工作的固定条件。 页码，2/3GB 7629872006-3-
7、29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR762900A.htm 调激发波长445nm，发射波长530nm，测定试管a、b的荧光强度，样液在仪器中受激发光照射不超过10s。在试管c中加入2030mg连二亚硫酸钠，摇动溶解，并使试管中的气体逸出，迅速测定其荧光强度作为空白。若溶液出现浑浊，不能读数。 7 测定结果的计算 7.1 计算公式 7.2 平行测定的结果用算术平均值表示，保留小数后二位，第三位按GB 1.181标准化工作导则 编写标准的一般规定中附录C数字修约规则取舍。 7.3 平行测定的相对差不得超过5。 核黄素（ g/g，干基）=（ B-C）/（ A-B）（ V/V1） R/ m（1- H） 式中： A试管a（样液加标样）的荧光强度；B试管b（样液加水）的荧光强度；C试管c（样液加连二亚硫酸钠）的荧光强度，空白；R 加入核黄素标样的量， g；V样液的初始体积，mL；V1测定时取样液的体积，mL；m样品质量，g；H样品的水分百分率。页码，3/3GB 7629872006-3-29file:/C:InetpubwwwrootdatagbrR762900A.htm
