SN T 3729.11-2014 出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第11部分 橘、橙成分检测 PCR-DHPLC法.pdf
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1、华人鉴定入境检翰栓擅行标准SN/T 3729.11-2014 晶及饮料中常见7k第口部分:擂飞撞PC日PLC5!晶科的检测Identification of fruit species in export food and drink一Part 11 : Detection of C.reticulatand C.sinensis ingredient一PCR-DHPLC method 2014-01-13发布2014田08-01实施中华人民共和国发布E家展量监督检验栓接总踌目。昌SN/T 3729(出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法共分为11个部分:第1部分:草莓成分检测PCR法;第2部
2、分:杏成分检测实时荧光PCR法;一一一第3部分:梨成分检测实时荧光PCR法;一一一第4部分:芒果成分检测实时荧光PCR法;一一第5部分:木瓜成分检测实时荧光PCR法;一一一第6部分:苹果成分检测实时荧光PCR法;一一第7部分:葡萄成分检测PCR法;第8部分:山植成分检测实时荧光PCR法;第9部分:桃成分检测实时荧光PCR法;一一一第10部分:香蕉成分检测实时荧光PCR法;一一第11部分:楠、橙成分检测PCR-DHPLC法。本部分为SN/T3729的第11部分。本部分是按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T 3729.11-2014 本
3、部分起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。本部分主要起草人:陈颖、吴亚君、韩建勋、黄文胜、王斌、曹际娟、邓婷婷、陈文柄。I 1 范围出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法第门部分:福、橙成分检测PCR皿DHPLCi去SN/T 3729.11-2014 SN/T 3729的本部分规定了本部分适用于果汁、果酱及法的最低检出限(LOD)为1%(重PCR检测方法。2 规范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件,GB/T 6682 分析实验室用GB/T 27403 实验室质量3 术语、定义和缩略i吾下列术语和定义适用于本文3.1 术语和定
4、义3. 1. 1 榻Citrusreticulata 情是芸香科柑擂属情种,为3.1.2 4萤Citrussinensis 橙是芸香科柑擂属橙种,为常绿乔木双子叶植物。3.1.3 i音?十Clarifiedjuice 经过澄清工艺加工,没有浑浊和沉淀的果汁。3. 1. 4 i虫?十Cloudyjuice 未经过澄清工艺加工,浑浊但未分层和沉淀的果汁。3.2 缩略语3.2.1 DNA: deoxyribonuleic acid,脱氧核糖核酸。3.2.2 dNTP: deoxyribonuleoside triphosphate,脱氧核昔酸三磷酸。3.2.3 dATP: deoxyadenosin
5、e triphosphate,脱氧腺昔三磷酸。的定性检测。本部分所规定方SN/T 3729.11-2014 3.2.4 dCTP: deoxycytidine triphosphate,脱氧胞昔三磷酸。3.2.5 dGTP: deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟昔三磷酸。3.2.6 dTTP: deoxythymidine triphosphate,脱氧胸昔三磷酸。3.2.7 dUTP: deoxyuridine triphospha忧,脱氧尿昔三磷酸。3.2.8 CT AB: cetyltrithylammonium bromide,十六皖基三甲基澳化钱。3.2.9
6、 Tris: TrisC Hydroxymethyl) aminomethane,王起甲基氨基甲烧。3.2.10 EDT A: Ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胶四乙酸。3.2.11 Taq: Thermus aquaticus,水生栖热菌。3.2.12 OD: optical density,光度密度。4 方法提要提取DNA,以DNA为模版,分别采用情橙的特异性检测引物进行PCR扩增,将PCR产物经DHPLC分析,进行食品及饮料中桶橙成分的检测鉴定,其中以桶撞果肉DNA为阳性对照,以非桶橙来源的DNA为阴性对照,无菌水作为空白对照。5 试剂和材料除另有规
7、定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1 检测用引物和探针:见表10表1寻|物和探针序列引物/探针引物/探针序列(53) 扩增片段长度靶基因内参照5端引物CTTGA丁TTTACCAAAGATGATGA植物核酬糖1,5-二磷酸竣化酶159 bp /加氧酶基因内参照3端引物TTCTTCGCATGTACCCGCAG 桶u橙5端引物GGAATCTGGATTAGAATGAG 92 bp 橙TrnL-TrnF基因间区情/橙3端引物GCGGAATACTCGAACGGTC 5.2 CTAB提取缓冲液:20g/L CTAB,1.4 mo
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