1、ICS 67180。10B 47 圆目中华人民共和国国家标准GBT 21 1 692007蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量测定液相色谱法Determination of amitraz and metabolite residues in honeyLiquid chromatography2007-10-31发布 20080401实施宰瞀髁鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪19刖 昌GBT 2”692007本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。本标准主要起草人：赵增运、陈惠兰、林宏、吴斌、
2、丁涛、徐锦忠、沈崇钰、朱成晶、蒋原、陶宏锦。蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量测定液相色谱法GBT 21 16920071范围本标准规定了蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量液相色谱测定方法提要、测定步骤、结果计算。本标准适用于蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 1992，neq
3、 ISO 3696：1987)3方法提要蜂蜜样品中双甲脒及其代谢物用正己烷、异丙醇混合提取液提取，提取液浓缩后，依次用乙腈、水定容，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料41水：应符合GBT 6682规定的一级水。42乙腈：HPLC级。43正己烷：优级纯。44异丙醇：分析纯。45混合提取液：将60 mL的正己烷与30 mL的异丙醇混合。46氢氧化钠：分析纯。47氢氧化钠溶液：01 toolL。称取40 g氢氧化钠，溶于1 000 mL水中。48乙酸铵溶液：002toolL。称取154 g乙酸铵，溶于1 000mL水中。49双甲脒标准品(纯度99)。410 2，4-二甲基
4、苯胺标准品(纯度99)。411双甲脒标准储备溶液：01 mgmL。准确称取适量的双甲脒标准物质(49)，用乙腈配成01 mgmL的标准储备液。储备液保存于4C冰箱中，根据需要再用乙腈稀释成适当浓度的标准工作液。保存3个月。412 2，4-二甲基苯胺标准储备溶液：01 mgmL。准确称取适量的2，4一二甲基苯胺标准物质(410)，用乙腈配成01 mgmL的标准储备液。储备液保存于4C冰箱中，根据需要再用乙腈稀释成适当浓度的标准工作液。保存3个月。5仪器51高效液相色谱仪：配有紫外检测器。52分析天平：感量01 mg。53天平：感量001 g。1GBT 21 169200754旋转蒸发器或相当者。
5、55旋涡混匀器。56移液管：10 mL，5 mL，1 mL。57有机滤膜：045 pm。58离心机：3 000 rmin，10 000 rmin。59具塞离心管：50 mL，15 mL。6试样的制备与保存61试样制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。均分成两份，分别装入样品瓶内作为原始样品。密封并标明标记。62试样保存将试样于常温状态下保存。注：在取样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤71提取称取5 g试样(精确至001 g)。置于50 mL具塞离心管中，加
6、入50 mL氢氧化钠溶液，旋涡混匀l min，再加入15o mL混合提取液，旋涡混匀1 min，混匀后于3 000 rmin下离心5 rain，吸取上层液转移至50mL离心管中；再加入100mL正己烷，旋涡混匀1min，混匀后于3 000 rmin下离心5rain，吸取上清液转移至50 mL离心管中，于3540的水浴中旋转蒸发浓缩至干，用050 mL乙腈溶解残渣，转移至15 mL离心管；再加入050 mL水溶解残渣，合并转移至15 mL离心管，在10 000 rmin离心5 min，溶液过045 pm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱仪测定。72测定721液相色谱条件a)色谱柱：C18，5 pm，1
7、50 mmX46 mm(内径)，或相当者；b) 流动相：乙腈(A)+o02 molL乙酸铵水溶液(B)；c)梯度洗脱程序：0 min 60 rain 35A，6 rain85 min 3590A，85 min 16 min90A，160 min161 min 9035A，161 min200 min 35A；d) 流速：10 mLmin；e)柱温：30；f)进样量：20“L；g)检测波长：235 nm(0 min100 min)；289 nm(100 min200 min)；h)检测器：紫外检测器。722液相色谱测定根据样液中双甲脒残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中
8、双甲脒及其代谢物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测定。在上述色谱条件下，双甲脒的保留时间约为1344 min，其代谢物的保留时间约为724 min。标准品色谱图参见图A1。73空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。2GBT 2 1 169_20078结果计算81结果用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中双甲脒残留量，计算结果需扣除空白值。 x。一冬业(1)qtSl。m1式中；x。试样中双甲脒残留含量，单位为毫克每千克(mgkg)；A。样液中双甲脒的峰面积；c。标准工作溶液中双甲脒的浓度，单位为微克每毫升(-gmL)；v，样液最终定容体积，单位为毫升(m
9、L)；A。r一标准工作溶液中双甲脒的峰面积；m，最终样液代表的试样量，单位为克(g)。82结果用色谱数据处理机或按式(2)计算试样中代谢物换算成双甲脒残留量，计算结果需扣除空白值。x：一叁生二旦121 (2)ns2。m2式中：x。试样中代谢物换算成双甲脒残留含量，单位为毫克每千克(mgkg)；A。样液中双甲脒代谢物(2，4一二甲基苯胺)的峰面积；C。标准工作溶液中双甲脒代谢物(2，4一二甲基苯胺)的浓度，单位为微克每毫升(t-gmL)；U样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；A。标准工作溶液中双甲脒代谢物(2，4一二甲基苯胺)的峰面积；m：最终样液代表的试样量，单位为克(g)；121由2，4-
10、二甲基苯胺分子质量换算为双甲脒分子质量的转换系数。83双甲脒残留总量按式(3)计算。X：一X1+X2 (3)式中：x。试样中双甲脒残留总含量，单位为毫克每千克(mgkg)；x，试样中双甲脒残留含量，单位为毫克每千克(mgkg)；蜀试样中代谢物换算成双甲脒残留含量，单位为毫克每千克(mgkg)。9检测低限、回收率91检测低限本方法的检测低限双甲脒为001 mgkg，双甲脒代谢物(2，4一二甲基苯胺)为002 mgkg。92回收率蜂蜜中双甲脒在添加水平0010 mgkg0100 mgkg范围内，其回收率为998100o；双甲脒代谢物(2，4一二甲基苯胺)在添加水平0020 mgkg0100 mgkg范围内，其回收率为717736。GBT 211692007mAU654321附录A(资料性附录)标准品色谱图图A1 双甲脒及双甲脒代谢物(2，4一二甲基苯胺)标准品的液相色谱图
