1、ICS 67.120.30 B 50 一，但飞.，巳:.1r:._r.: . :-l.: . .-胃、1二二,. I飞飞二.r飞，.1r.:.飞.:.:.:.:二二丑_ f:.:. r;. Xi-. 一唱唱-_.，中华人民共和国国家标准GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定Determination of malachite green and crystal violet residues in aquatic product 2005帽09-05发布中华人民共和国国家质量监督检验检夜总局中国国家标准化管理委员f2005-09-05实施060609000433
2、GB/T 19857-2005 前本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国水产标准化技术委员会归口。本标准起草单位z中华人民共和国上海出入境检验检疫局、厦门出入境检验检疫局、广东出入境检验检疫局、福建出入境检验检疫局、江苏出入境检验检疫局、北京出入境检验检疫局、宁波出入境检验检疫局。本标准主要起草人:郭德华、施冰、杨惠琴、林峰、李波、张志刚、林海丹、王传现、陈莺平、盛永刚、李耀平、杨芳、陈惠兰、张朝晖、殷居易、林立毅、袁辰刚。本标准系首次发布的国家标准。I 1 范围水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定GB/T 19857-2005 本标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿(leuco
3、malachitegreen)、结晶紫及其代2.2 试剂和材除另有规2.2. 1 2.2.2 2.2.3 2. 2.4 2.2.5 5 mol/ 水定容至1002. 2. 7 5 mmol/ 4.5，过0.2m滤2.2.8 冰乙酸。2.2.9 0.25 g/ mL 22101O mol/ L 4 2.2. 11 体积分数为2%2.2. 12 体积分数为5%的100 mL。二.Mf:u:t2Z_+四质谱和高效液相色谱的测定方法。孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色2.2. 13阳离子交换柱zMCXJOm导向前肺气，: A X .Ai X V -Csi xA X A. X m X一一样品中待测组分残留量
4、，单位为微克每千克(flg/kg);. ( 1 ) c一一孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫标准工作溶液的浓度，单位为微克每升(g/L); Csi一一标准工作溶液中内标物的浓度，单位为微克每升(g/L); Ci一一样液中内标物的浓度，单位为微克每升(g/L); A. 孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫标准工作溶液的峰面积FA一一样液中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫的峰面积pA.i -标准工作溶液中内标物的峰面积;3 G/T 19857-2005 A;-样液中内标物的峰面积;V一一样品定容体积，单位为毫升(mL);m一一样品称样量，单位为克(g)。本方法孔雀石绿的残留
5、量测定结果系指孔雀石绿和它的代谢物隐色孔雀石绿残留量之和，以孔雀石绿表示。本方法结晶紫的残留量测定结果系指结晶紫和它的代谢物隐色结晶紫残留量之和，以结晶紫表示。2.8 方法检测限本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测眼均为O.5g/kg。3 高效液相色谱法3. 1 原理试样中的残留物用乙经酸性氧化铝柱净化后3.2 试剂和材料除另有规定外，3.2. 1 3.2.2 3.2.3 3.2.4 溶液pH到4.3.2.5 3.2.6 3.2.7 4. 5。3.2.8 3.2.9 3.2.12 标准品:于98%。3.2.13 标准榕液:准100g/mL的标准储3.2.14 混合标准工作溶液
6、:结晶紫、隐色结晶紫均为20ng 3.3 仪器和设备3.3. 1 高效液相色谱仪:配有紫外-可见光检测器。3.3.2 匀浆机。3.3.3 离心机:4000r/min。3.3.4 固相萃取装置。中，用冰乙酸调节水叶，冰乙酸调pH到晶紫，用乙睛分别配制成80C避光保存。毫升含孔雀石绿、隐色孔雀石绿、3.3.5 25%二氧化铅氧化柱:不锈钢预柱管5cm X4 mm(内径汀，两端附2m过滤板，抽真空下，填装含有25%二氧化铅的硅藻土，添加数滴甲醇压实，旋紧。临用前用甲醇冲洗。并将二氧化铅氧化柱连接在紫外-可见光检测器与液相色谱柱之间。3.3.6 酸性氧化铝柱:1g/ 3 mL.使用前用5mL乙睛活化。
7、3.4 样晶制备3.4.1 提取GB/T 19857-2005 称取5.00g样品于50mL离心管内，加入1.5mL20%的盐酸楚股溶液、2.5mL 1. 0 mol/L的对甲苯磺酸溶液、5.0mL乙酸盐缓冲溶液，用匀浆机以10000 r/min的速度均质30s，加入10mL乙睛剧烈震摇30So加入5g酸性氧化铝，再次震荡30So 3 000 r/min离心10min。把上清液转移至装有10 mL 7(和2mL二甘醇的100mL离心管中。然后在50mL离心管中加入10mL乙睛，重复上述操作，合并乙睛层。3.4.2 净化在离心管中加入15mL二氯甲烧，振100 mL的梨形瓶中，再用5mL乙腊、梨
8、形瓶中。450C旋转蒸发至约1将酸性氧化铝柱(3.3.6)两次，每次2.5mL，把洗涤发至近干，残液准确用o.3.5 测定3.5. 1 液相色谱条件a) b) c) 流速:1. 0 d) 柱温:室e) 检测波长。进样量:时间4 15 15.1 17 17. 1 20 3.5.2 液相色谱测定次，合并二氯甲烧层于100mL 柱上，再用乙腊洗涤瓶部流出液，450C旋转蒸5 40 40 根据样液中被测孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参
9、插进样测定。在上述色谱条件下，孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的保留时间约为6.10min、7.88min、17.77 min、18.22min，标准品色谱图参见附录A中图A.2。3.6 空白试验除不加试样外，均按3.4，3.5步骤进行。3. 7 结果计算和表述按式(2)计算样品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫残留量。计算结果需扣除空GB/T 19857-2005 白值。式中Ex=兰主兰主-A. Xm X一一样品中待测组分残留量，单位为毫克每千克(mg/kg); C一一待测组分标准工作液的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); A一一样品中待测组分的峰面积gA.一一待测组分
10、标准工作液的峰面积FV一一样液最终定容体积，单位为毫升(mL);m一一最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。.( 2 ) 本方法孔雀石绿的残留量测定结果系指孔雀石绿和它的代谢物隐色孔雀石绿残留量之和，以孔雀石操表示。本方法结晶紫的残留量测定结果系指结晶紫和它的代谢物隐色结晶紫残留量之和，以结晶紫表示。3.8 方法栓测限本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测限均为2.0g/峙。6 GB/T 19857-2005 附录A(资料性附录)标准离子流固及灌相色谱固1!隐色孔雀石绿A 户:1孔雀石绿yi w l结晶紫-m/z 337/322 %iA 100 11.代孔雀石绿210 m/z
11、 334/318 %-1 I 01Ii1iIii(:i1ii:;目目.，.，霄，.1.，.1目I，ii，.ii.Time0.50 1. 00 1. 50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 AU 0.00 固A.1孔雀右绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、焦代孔雀石绿和?在代隐色孔雀石绿标准的离子流固结晶萦隐色结晶紫孔雀石绿隐色孔雀石绿5.00 10.00 15.00 t/min 圄A.2孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫标准的渡相色谱圄的CON-hmFH阁。华人民共和国家标准水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定GB/T 19857-2005 国中陪中国标准出版社出版发行北京复兴门外三旦河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销陪印张o.75 字数14千字2005年12月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2005年12月第一版 定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号，155066 1-26770 GB/T 19857-2005
