1、ICS 65. 020. 30 B 40 GB 中华人民共和国国家标准GB/T 20366-2006 动物源产品中睡诺自同类残留量的测定液相色谱-串联质谱法Method for the determination of quinolones in animal tissues一LC咱MS/MSmethod 2006-05-25发布中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员2006-09-01实施目Ui=i 本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国山东省质量技术监督局提出。本标准起草单位:中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本标准主要起草人:林黎明、张鸿伟、梁增辉、王
2、岩、孟兆宏。GB/T 20366-2006 1 范围动物源产品中喳诺酬类残留量的测定夜相色谱，串联质谱法GB/T 20366-2006 本标准规定了动物源产品中11种哇诺酣类残留量液相色谱串联质谱的测定方法。本标准适用于禽、兔、鱼、虾等动物源产品中11种哇诺酣类残留的确证和定量测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6379 测试方法的精密度通过实验
3、室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法(GB/T6682-1992 , neq ISO 3696: 1987) 3 原理试样中喳诺自同类残留，采用甲酸乙腊提取，提取液用正己炕净化。液相色i普串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料4.1 水:应符合GB/T6682中一级水的规定。4.2 乙睛:液相色谱级。4.3 冰乙酸:液相色谱级。4.4 正己皖:液相色谱级。4.5 甲酸:优级纯。4.6 乙睛饱和的正己烧:量取正己皖恪液80mL于100mL分液漏斗中，加入适量乙腊后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腊层既得。4.7 2%甲酸榕液:2mL甲酸用水
4、稀释至1000 mL，混匀。4.8 甲酸乙腊梅液:98mL乙脂中加入2mL甲酸，混匀。4. 9 伊诺沙星、氧氟剖，、星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、凹，、拉沙星、双氟沙星、司帕沙星标准品:纯度二99%。4.10 11种喳诺酬类标准贮备榕液:0.1mg/mL。分别准确称取适量的每种哇诺嗣标准品，用乙睛配制成0.1mg/mL的标准贮备珞液(40C保存可使用3个月)。4. 11 11种唾暗自同类标准中间潜液:10g/mL。分别准确量取适量的每种唾诺酣标准贮备榕液(4.10) ，用乙腊稀释成10g/mL的标准中间溶液(40C保存可使用1个月)。4.12 11种唾诺自同类
5、泪合标准工作榕液:准确量取适量的哇睹酣类标准中间溶液(4.11)，用甲酸-乙腊溶液(4.8)配制成浓度系列为5.0 ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、250.0 ng/mL、500.0ng/mL的唾诺自同类混合标准工作洛液(40C保存可使用1周)。4. 13 11种喳诺自同类混合标准添加溶液:100 ng/mL。准确量取适量的喳睹酣类标准中间溶液(4.11)，用乙腊稀释成100ng/mL的喳晤酣类标准添加溶液(40C保存可使用1周)。GB/T 20366-2006 5 仪器5. 1 液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源。5. 2 高速
6、组织捣碎机。5. 3 均质器。5.4 旋转蒸发仪。5.5 氮吹仪。5. 6 涡流混匀器。5. 7 离心机:转速4000 r/min。5. 8 分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台5.9 移液器:200L，lmL。5.10 棕色鸡心瓶:100 mL。5. 11 聚四氟乙烯离心管:505. 12 分液漏斗:125 mL。5. 13 一次性注射式滤器5. 14 6.2 试样保存试样应在20 7 测定步骤7. 1 标准曲线制质1min，然后，于离心机上以离心管中。将离心残渣用20mL 7. 3 净化将上清液转移到125mL分液漏斗中?将青带中明节5mL乙腊饱和的正己烧(4.6)，振摇2 min，
7、弃去上层溶液，将下层溶液移至100mL棕色鸡心瓶中，于400C水浴中旋转蒸发至近干，用氮气流吹干。准确加入1.0 mL甲酸-乙腊榕液(4.8)溶解残渣，涡流混匀后，用一次性注射式滤器过滤至样品瓶中，供液相色谱串联质谱仪测定。7. 4 测定7.4. 1 液相色谱条件a) 色谱柱:C18柱(可用IntersilODS-3，粒径5m，柱长150mm，内径4.6mm或相当者); b) 流动相t乙腊+2%甲酸溶液(梯度洗脱见表1);2 c) d) 7 . 4 . 2 a) b) c) d) e) f) g) h) nm U 20 流速:0.8mL/ min; 进样量:20L。质i普条件离子源:电喷雾离子
8、拥;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测;电喷雾电压:5500V; 雾化气压力:0.413气帘气压力:0.344辅助气压力:0.表2名称伊诺沙星氧氟tJ、星诺氟沙星培氟沙星环丙沙星洛美沙星丹诺沙星恩诺沙星沙拉沙星双氟沙星司帕沙星320. 9/ 234. 0 36 1. 9/ 318.0 36 1. 9/ 26 1. 0 386.0/299.。386. 0/ 367.9 400.0/356.。400.0/382.。393.0/349.。393.0/292.。表1乙腊/(%)15 17 386.0/299.。400.0/356.。393.0/349.。40 45 42 30 35 30 36
9、 GB/ T 20366-2006 2%甲酸溶液/(%) 85 83 簇电压/V93 76 89 104 92 77 95 77 92 92 78 99 95 95 90 90 83 83 90 100 109 109 3 GB/T 20366-2006 7.4.3 在相色谱串联质i普测定用混合标准工作搭液(4.12)分别进样，以峰面积为纵坐标，工作榕液浓度(ng/mL)为横坐标。绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行走量，样品榕液中11种目标化合物响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，11种目标化合物的参考保留时间见表3011种目标化合物标准品的总离子流图和选择离
10、子流图参见附录A中的图A.1、图A.2。表311种睡诺酣类标准晶的参考保留时间名称保留时间/min名称保留时间/min伊诺沙星6.20 丹诺沙星10.02 氧氟tJ、星7.26 恩诺沙星11. 03 诺氟沙星7. 35 沙拉沙星16.36 培氟沙星7.89 双氟沙星17.22 环丙沙星8. 14 司帕沙星17.99 洛美19星9.09 8 结果计算试样中每种哇诺自同类残留量按式(1)计算:二CV1000一一一m 1 000 .( 1 ) 式中tX 试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(g/kg);c 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); v-一试样溶掖定容体
11、积，单位为毫升(mL); m一一试样榕液所代表的质量，单位为克(g)。注:计算结果应扣除空白值。9 检出低限(LOD)和定量限(LOQ)9. 1 检出低限(LOD)伊诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星为0.1月/kg;恩诺沙星、丹诺沙星为O.5g/kg。9.2 定量限(LOQ)伊诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星为1.0g/kg。10 精密度精密度数据接GB/T6379的规定制定，其重复性和再现性的值以95%的可信度计算。10. 1 重复性在重复性条件下获得的两次独立测试
12、结果的绝对差值不超过重复性限(刊，动物源产品中11种喳诺自同类残留含量范围及重复性方程见表30如果差值超过重复性限(r)，应舍弃实验结果并重新完成两次单个试验的测定。10.2 再现性在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，动物晾产品中11种喳诺酣类残留含量范围及再现性方程见表404 G/T 20366-2006 表4含量范围及重复性和再现性方程名称含量范围/(阳也g)重复性限r再现性限R依诺沙星1. 050. 0 r= -0.067 00+0.192 1x R=一0.0532十0.2043x 氧氟沙星1. 050. 0 19r=-O. 9075+ 1. 127 11
13、gx R=一0.0523+0.2250x诺氟沙星1. 050. 0 r=-0.0159十0.1497xR= -0.1169十0.2624x培氟沙星1. 050. 0 r=O. 022 4十O.102 1x R=-0.0171十0.2135x 环丙沙星1. 050. 0 19r=一O.952 7十1.0424 19x R= -0. 0676十0.2329x 洛美沙星1. 050. 0 r=一0.0012十O.104 8x IgR= -0.909 6一卡1. 150 61gx 丹诺沙星1. 050. 0 r=0.014 0十0.1117xR= -0.007 9+0.218 2x 恩诺沙星1. 05
14、0. 0 r=0.0516十O.132 3x R= -0.0109十0.2463工沙拉沙星1. 050. 0 19r= -1. 022 4十1.133 61gx R= -0.0799十0.1979x 双氟沙星1. 050. 0 19r=一0.8660十1.054 Olgx R= -0. 034 7十0.1996x 司帕沙星1. 050. 0 =一0.0343十0.1716xR= -0.061 0十0.212Ox 注:x为两次测定值的平均值。5 GB/T 20366-2006 附录A(资料性附录)标准晶串联质谱固7. 31 4. 6e6 4. 4. 4. 3. 3.6e6 、t. 3. 4e6
15、3.2e6 3. 0e6 2.8e6 2. 6e6 2. 4e6 6.20 2. 0e6 1. 8e6 1. 6e6 1. 4e6 1. 2e6 1. Oe6 8. 0e5 6.0e5 圄A.l1 6 nH m / 。dl GB/T 20366-2006 6.20 1/附星(3201. 5e6 e: 则 , 5. Oe5 4 Oe5 3 Oc5 2.0e5 1. Oe5 0.0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 I/mm d) 培氟t星8. 14 /环丙沙星(332川0)7.0e5 6.0e5 支。队M4.0e5 3.0e5 2.0e5 1.
16、Oe5 0.0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 t/mm e) 环丙沙星9.09 L-洛美沙星(旧的伍。)7.0e5 6.0e5 是而5.0e5 轧4.0e5 3.0c5 2.0e5 1. Oe5 0.0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 I/min f) 洛美沙星图A.2(续)8 GB/T 20366-2006 10.02 /附星(358.0/3川5.0e5 e; 4.0e5 -3.0e5 2.0e5 1. Oe5 0.0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 1
17、7 18 19 t/mm g) 丹诺沙星11. 03 A/恩诺沙星(360.0/川.0)8.0e5 7.0e5 、6.0e5 电5.0e54.0e5 3.0e5 2.0e5 1. Oe5 O. 0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 t/口1mh) 恩诺沙星16.36 沙拉沙星(386.0/299.0)_ 2.5e5 - 2.0e5 1. 5e5 1. Oe5 5.0e4 0.0 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 t/mm 沙拉沙星圈A.2(续)9 GB/T 20366-2006 4.4e5 4.
18、 0e5 3.5e5 EeL e 3.0e5 2. 5e5 2.0e5 1. 5e5 1. Oe5 5. 0e4 0.0 4 5 q, ， 1 AU CU RU qd , A 内nu auz 星沙氟双3. 3. F问UFhuLWLW FhuU。，内，也1. 5e5 1. Oe5 。10 19 t/mm 19 I/mm CON-的ONH筒。定捆肌的量去和准蛐楠川叫标瞅rEE诺-E川队人cz睡刊T华国肿耐由产商源物动国中来中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张1字数21千字2006年9月第一次印刷1/16 2006年9月第一版开本880X 1230 争等定价12.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066. 1-28122 GB/T 20366-2006
