1、ICS 11.020 C50 备案号:15864-2005 明TS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 248-2005 厌氧菌的抗微生物药敏感试验方法Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaero bic Bacteria 2005-0508发布2005-12-01实施叶=1#主川、民三主EE来口自言IJ主主仨音庐发布WS/T 248-2005 目。本标准是在卫生部颁发的全国临床检验操作规程)(第三版)的基础上，依据美国国家临床实验室标准化委员会CNationalCommittee for Clinical Laborato
2、ry Standards, NCCLS) MI1-A5文件一厌氧菌的抗微生物药敏感试验方法(巳批准的标准一第五版)ISBN 1-56238-429-5J，结合中国实际情况和要求制定。本标准的附录A为资料性附录。本标准从2005年12月1日起实施。本标准由卫生部提出。本标准起草单位:北京大学人民医院检验科。本标准主要起草人:张正、岳志红。本标准由卫生部负责解释。WS/T 248-2005 厌氧菌的抗微生物药敏感试验方法1 范围本文件所述方法主要用于测试普通分离到的厌氧菌。琼脂稀释法可用于测试大多数厌氧病原菌。目前做量肉溺稀释法仅用于9!试脆弱拟杆菌菌群的病原菌。本标准适用于厌氧菌的抗做生物药敏感
3、试验。2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1 琼脂稀释敏感试验将某一种抗做生物药的系列踉度?昆人用于敏感试验的琼脂生长培养基进行的抗微生物药敏感试验。2.2 敏感指该菌株所致感染可以用推荐用于此型感染及病原菌的抗微生物药剂量进行合理地治疗。2.3 中介药物在生理浓集的部位具有临床效力或者可用高于正常剂量的药物进行治疗;另外还包括一个缓冲区M可以防止做小的、未能控制的技术因素造成的重大结果解释错误。2.4 耐药指常规剂量的抗橄生物药不能抑制该菌株的生长和/或该菌株的MIC低于某范围内。在此植围内，可存在某些特定的耐药机制(如-内酷腊酶类)，并且临床治疗显示其疗效并不可靠。2.5 最低
4、抑菌度琼脂或肉汤稀释敏感试验中抗做生物药抑制某一种微生物可见生长的最低地度。3 厌氧菌敏感试验的指征临床上有厌氧菌感染存在并在实验室分离出厌氧菌，原则上均应进行抗做生物药敏感试验。3. 1 常规试验从脑服肿、心内膜炎、骨髓炎、关节感染、人工装置或人工血管感染及菌血症分离到的特殊感染的标本应该测试，并应参考临床医生的合理建议。当感染的性质不清楚，标本含有内性厌氧茵茵群，而且病原菌与正在治疗的感染关系很小时，通常不必做敏感试验。当存在多种厌氧菌时，参考临床情况选择可能引起厌氧菌感染的最重要菌种进行敏感试验。一般分离到拟杆菌属、普雷沃菌属、梭杆菌属、梭菌属、嗜胆菌属和萨顿菌属的一些菌种应做敏感试验。
5、敏感试验应使用分纯后菌悬、液。一般不能直接用临床标本进行敏感试验。MIC试验一般采用倍比稀释。采用本标准推荐方法，做好质控，结果报告采用在实际终点时的一个倍比稀释范围内较为科学。例如:终点为1年gj时，真正报告应(832)g/ml范围更好。并做出敏感、中介或耐药判断，以供临床参考。3.2 监酣试验当技术条件不允许每个实验室都进行厌氧菌敏感试验时，建议建立当地参考实验室，收集一定量临床菌株(不少于50.-.100株)，集中测试后公布结果供大家参考。4 厌氧菌敏感试验的局限性体外结果不足以预测某个病人对厌氧菌感染治疗的反应，仅供临床选药参考。此标准的试验方法l WS/T 248-2005 也并不一
6、定适用于所有的厌氧菌，需考虑以下两点。 4. 1 折点和临床相关关于确定厌氧菌对大多数抗做生物药的敏感性的折点，现在并无一致意见。目前折点的确定是基于动物模型或需氧和厌氧菌多重感染的病人的临床试验结果。因为大多数厌氧菌感染发生于密闭空间，涉及多种微生物，单一抗微生物药抗单一微生物的体外活性并不直接与其体内效力相关。除数目分布和临床效力之外，MIC结果的敏感和中介折点解释是基于最大的推荐剂量获得的血清水平，因为厌氧菌感染通常推荐最大剂量用药。建立中介范围是因为有些药物难于判读终点和MIC在折点附近聚集。4.2 病原菌琼脂稀释法适用于测试多种气fz以群。当测试菌呈蔓延生长时(例L.:&，i;对于败
7、毒梭菌，每个平板只能郝|叫5 抗微生物药5. 1 来源抗微生物药标商业途径。不分析活力(常用每5时防止或5.3 制备贮存液抗微生的10倍。某些药物待用药品公式如下:存液可用水或附录A表A.-60.C可保存半年。5.4 测试液度的数目限于测试脆弱拟杆茵茵., ，划开接种物。而局检定所及其他的通用名，批号，和?显度中。用品应使用经计量或者是最高测试浓度微生物药。最终的贮贮存于规定温度下，一般一种特定抗微生物药的测试浓度应包宙附安静哗囔性呢二所示的解释性折点，但实测的浓度数目是由实验室决定的。MIC结果报告推荐选用5个或更多浓度。建议选用的范围应包含质控菌株的在控数值。6 常规i式验和报告中抗微生物
8、药的选择敏感试验抗微生物药品种类选择可参考附录A表A.l。在实际应用中，应结合我国实情，参考实验室所在的临床单位医生及感染控制科意见做出合适选择，不断积累经验。完整的报告单应包括患者一般资料(姓名、性别、年龄和病理号等)。药品名称应按照我国药典颁布名称。菌种名称按照卫生部己公布名词标准。应报告敏感、中介和耐药。2 WS;T 248-2005 7 稀释试验接种物的制备受试菌应是从强化布氏血琼脂选择经充足时间孵育(2448小时)产生的合适大小的菌落。菌落直径通常至少lmmo快速生长菌如脆弱拟杆菌菌群和产气英膜梭菌可经24小时孵育后测试，而其他大多数厌氧菌需要48小时孵育。对于缓慢生长的厌氧菌，如嗜
9、胆菌属和纤细弯曲杆菌，可以从多个琼脂平板制备接种物以保证标准化的准确。可通过生长法或直接菌落悬液法制备接种物。7. 1 制备接种物时的浊度标准为使敏感i式验的接种浓度标准化，应使用一个等同于O.5号麦氏CMcFarland)标准管的BaSOj7虫度括准管或其光学等同物性日乳胶颗糙悬液:.q.:.，l)aE)4:跑弘5号麦氏标准管制备见附录。7.2 分离株的贮存和复苏7.2. 1 冷在大多数厌氧菌可在20含有一份无菌甘汹的基。另外，也可将487.2.2 复苏i焦存的7.3 生长法从强化布取至少5个形盐培养基。如，J硫酸盐肉汤。沸后冷却的肉渴了A TCC25285 ，).:盹变化。7.4 直接菌此
10、法是应超过30分钟。还原或煮沸后冷却数会轻度升高。8 参考琼脂稀释法(8. 1 试剂和材料8. 1. 1 厌氧罐(箱)采用环境含4%，_7%CO2厌8. 1.2 强化布氏琼脂48小时肉汤培养物转移到们使用不加糖的擅肉培养合适大小环取满一环，接布民肉汤，强化脑心漫液或度。如人布氏肉肠杆菌A意到不同中，-60oCf令冻。至少lmm)。挑示剂的硫代硫酸k民肉溺替代硫代还原或煮目;或脆弱拟忏菌俨菌分离株接种大小的使用的培养基是每m!布民琼脂中添加5g氧化血红素、l(J-g维生素K1和5%脱纤维羊血(旷的。布氏琼脂的组成和制备，补充剂的制备和添加详见附录。也可提前配制琼脂，使用当天融化。制备抗微生物药稀
11、释液后，抗微生物药和脱纤维羊血一起加入到融化琼脂中。8.2 琼脂稀辑平板的制备步骤开始前，确定抗微生物药及其所用浓度。制备琼脂稀释平板时，15X100固形平板需要20m!琼脂，方形平板需要30mL平板的制备是将一份10X抗微生物药溶液加入到九份琼脂中。例如:制备20ml琼脂的圆形平板，需要在17m!己添加氧化血红素和维生素乱的融化的布氏琼脂(保持在45.C500C)中加入1ml脱纤继羊血和2mll0X抗微生物药恪液。方形平板则是25.5ml布氏琼脂、1.5ml脱纤维羊3 WS/T 248-2005 血和3mll0X抗微生物药踏破。8.2.1 制备琼脂空白试验前或试验中，准备足够己添加维生素Kj
12、和氟化血红素的布氏琼脂，分配合适的量到试管中。每种抗微生物药的每个浓度准备一管。如果试验当天使用，分配后置于48.C-50.C水浴。如果提前制备，融化培养基(梯腾水浴，微波炉或高压锅)，置于水洛(480C50.C)中冷却。8.2.2 制备抗微生物药稀释液融化以前制备的抗微生物药贮存液，或试验当天制备。将设计好数量(见表的的灭菌蒸懦水加人相应管中，制各稀释液空白。使用附录A表A.4所述稀释规则，1: 2、1: 4和1: 8连续稀释制备中间浓度(lOX)抗微生物药榕液，而不是直接倍比稀释。此方法制备稀释液可使稀释错误最小化。8.2.3 制备琼脂稀释平板标记制备的每一种抗微生物药的每一种浓度的平板，
13、将平板置于水平台面上。对于制备的每一种抗微生物药浓度，将1ml脱纤维羊血(对于方形平板1.5mD和2ml10X抗微生物药溶液(对于方形平板3m!)加入到17ml融化井怜却的强化布氏琼脂(对于方形平板25.5ml)试管中。盖紧试管盖子，轻轻翻转数次强匀，小心不要产生气泡。倒人平板，由化。如果测试一种抗微生物药，应准备另外4个不加抗微生物药的平板，和以上相同的步骤，但用灭菌蒸馆水替代抗微生物药溶液。对于另外测试的每一种抗微生物药，准各另外一个不加抗微生物药的平板。琼脂固化后，可将平板盖子半开置于层流罩或温箱约30分钟使其干燥。或者是翻转平板将琼脂底盖支在盖子上。8.2.4 琼脂稀释平板的贮存用于常
14、规试验，试验前密封于塑料袋中于2.C-8.C贮存，不超过7天。用于研究和评估目的，推荐贮存期不超过72小时。含亚牍培南，克拉维酸或其他已知不稳定的伊内酌胶/庐内酌胶酶抑制剂组合的抗微生物药的平板必须在试验当天配制。8.3 接种琼脂稀释平板接种物接种到琼脂表面的最简便的方法是使用多点接种器取12l接种到琼脂表面。那么最终琼脂上接种物每点接近105CFUo由于大多数厌氧菌能暂时容忍暴露于氧气，所有操作可在外界环境中进行。一些苛养菌分离株则必需使用预还原平板和在厌氧环境中进行所有操作。使微生物生长到浊度等于O.5号麦氏标准或将菌落直接制成悬液到相同油度，制备标准化的接种物。试管按顺序排列在架子上，将
15、少量体积(约O.5mD移至多点接种器的相应孔中。在琼脂平板上做标记，以标明接种点的方位。小心避免飞暇。顺序:从最低到最高的药物泼皮依次接种。质控:试验开始时首先接种两个无抗微生物药的对照平板。其中一个平板标记pre-02 (检查需氧菌污染)，另外一个平板标记pre-Ana气厌氧菌最初生长对照)。每一系列平板之间，接种一个元抗微生物药的对照平板做生长对照。最后，再次接种两个平板，标记为post-02和post-Ana，来证实最终病原菌生长力和纯度。8.4 孵育琼脂稀释平板平板一旦变干，翻转后置于厌氧罐或替代庆氧环境中350C孵育4248小时，有氧孵育平板(证实有氧环境中未能生长)应置于含有5%C
16、O2环境中35.C孵育42，.48小时。8.5 判读琼脂稀释终点在黑色不反光的背景下观察每一平板。首先判读对照平板，寻找需氧菌可能污染或孔间交叉污染。如果检测到污染，则必需重新测试。判读MIC终点是和厌氧菌对照平板相比生长特征发生显著抑制的测试平板的浓度。样本的一个显著生长变化包括薄雾状、多个细小菌落，或一个到数个正常大小菌落。9 微量肉汤稀释法此法仅适用于测试脆弱拟杆菌菌群。4 WSjT 248-2005 9. 1 试剂和材料9. 1. 1 厌氧罐(箱)附录所述琼脂稀释法条件同样也适用于微量肉汤稀释法。9. 1. 2 强化布氏肉汤布氏肉汤的组成和制备，补充剂的制备和添加详见附录。9.2 微量
17、肉汤稀释板准备本法被称为微量稀释是因为使用了小体积的肉汤。这些小体积肉汤被分配到无菌塑料微量稀释板。每个小孔至少应装O.lml肉汤。为制备(lOX)抗微生物药恪液，应将浓缩的抗微生物药贮存液按表4所述内容进行稀释或进行倍比稀释。将一份10X抗微生物药榕液加入到九份肉汤中，得到所需最终浓度。制备微量稀释板的最简便方法是使用分配装置。它可以将至少10ml肉汤制成的抗做生物药稀释液按照每孔O.1C士0.02)n1的最分配到标准的96孔中。加完各种抗微生物药稀辞液的微量稀释板应使用塑料袋密封井立即置于冰箱-200CC最好600C)贮存。某些药物如克拉维酸和亚股培南，必须贮存在一600C以下。应防止反复
18、冻融。9.3 微量肉汤稀释板的接种使微生物生长到浊度等于0.5号麦氏标准或将商落直接制成悬液得到相同浊度，制备标准化的接种物。调整好的接种菌悬液最好在15分钟内用水或盐水稀释，接种后每管或每孔大约含1X106CFUjml。为获得此最终接种物而采取的稀释步骤，可因接种物加到单个孔的加样方法不同而不间，因此对于每一种情况都必须进行计算。计算时必须知道微量稀释试验要加到孔内的接种物的确切体积。例如，如果孔内培养基体积是O.1时，接种物体积为0.01时，那么应将0.5号麦氏悬液约1.5X108CFUjml)按1: 15稀释以获得1X 107CFUjml的菌液。当取O.Olml此菌液接种肉汤时，细菌的最
19、终测试浓度为1X 106CFUjml(或1X105CFUj孔)。按上述方法对接种物进行标准化后15分钟内，可以用接种装置取体积不超过小孔体积10%的接种物(如在O.lml抗微生物药液中接种物应101)接种徽章稀释板的每个孔。相反，如果用0.05ml的吸管，每孔的内容物将被1: 2稀释。为菌落计数，实验室应经常用脆弱拟杆菌ATCC25285练习，以保证技术熟练。9.4 微量肉汤稀释板孵育为保证孵育温度，微量稀释板的叠放不应超过四层。接种好的微量稀释板应放在厌氧环境中350C孵育4648小时。应采取措施防止微量稀释板的蒸发。9.5 判读微量肉汤稀释终点在黑色，使用间接光无反射光的背景下观察，放大镜
20、可使用。如果生长对照孔的生长微弱或不生长，则不应判读。MIC终点应是观察到的无细菌生长或最显著抑制细菌生长的抗微生物药泼皮。一些药物/病原菌组合可观察到拖尾效应。10 p-内酷脏酶试验在敏感试验之前，可使用产色头抱菌素为基础的方法进行除脆弱拟杆菌菌群外厌氧菌。-内酷胶酶活性检测。大多数脆弱拟杆茵茵群分离株产生伊内酷胶酶，认为对青霉素耐药，因此不需要常规伊内酷胶酶检测。11 质量控制的方洁11. 1 目的质控工作的目的是监测敏感试验步骤的精密度和准确度，试剂和设备的质量和进行试验的人员的操作。为达到上述目的，最好选用遗传性稳定和在特定方法中有用的标准参考菌株。可向国家药品及食品监督管理局检定所菌
21、种库购买。11. 2 批次的质控5 6 WSjT 248一2005对于琼脂稀释，每一批新的培养基、试剂、补充剂或抗微生物药首次使用时应进行所有3种质控菌株的质控试验。对于自制的微量肉汤稀释板，每一批至少取一个微量稀释板孵育过夜以保证培养基的无菌性(剩余稀释板可冷冻贮存于一200C，最好是一600C)。对于商业制备的平板，应依据厂商说明进行质控。11. 3 质控菌株和质控频率有3种质控菌株常用于质控。厌氧菌敏感试验时，琼脂稀释推荐使用以下至少2种质控菌株来监测试验步骤。微量肉汤稀释和临床分离株的常规试验则推荐使用一种或一种以上质控菌株。应使用列于附录A的表A.5和表A.6中的限制对试验系统的整体
22、表现进行监控。脆弱拟杆菌ATCC25285 多型拟杆菌ATCC29741 迟缓优杆菌ATCC4305时11. 4 纠正措施当质控超过特定范用了错误的孵育测。11.5 其他对照11. 5. 1 生长对每一种以评价受试菌的琼脂或肉过夜以检测?昆合法恃别重要，因/矶11.5. 4 终点定期对终人员都应独读者相互之间，菌株明显的污染，或使，IJ.J.人批准再实施临床检J厌氧和需氧孵育肉汤稀释接种物的稀释点接种器进行本试验的实验室果进行比较。所有判WS/T 248-2005 附录A(资料性附录)培养基和补充剂的制备A.1 补充剂A. 1. 1 氯化血红素贮存粮(5mgJml)将O.19氯化血红素梅解于2
23、ml1.QN的NaO日中.!.ti.，加入蒸铺水至20ml，121 C灭菌15分钟。避光贮存于4C8C不超过一个月JA. 1.2 氢氧化纳(1. ON) 将40g氮氧化铀附附妒主)刷卢产手Oh_1l;，./;eA. 1.3 维生素K1溶液 A.1.3.1 贮存液(10mddJ;KFwdPEt A. 2.1 强化布氏琼脂按下列配方配制布氏取物2g，氯化铀5g，亚硫酸铀O.素贮存液1ml，维生素K1工作液148C50C。加入50ml灭菌脱纤维羊血。注意:不加入脱纤维羊血的培养基可以在试管或瓶子小体积分装冷冻。试验时溶解培养基，冷却至于黑色瓶氓月。使阳旷血阳市化mmh肌肉ApgP际比啪啪川剧叫咱醋、
24、量4吨呻料全。微N:L融和完加于飞fA琼括胞MV用革-2、加们中菌H淀串将l-C浴J元到沉意际5扩水6E的注-h或LJ点2A化mAA次终A菌(孔径0.2m)。飞。可允许方法包括斗3阳活中快速融。加入到百蚓七布阮琼脂前480C-fOC)和融化5.7含影响判读MIC化物10g，右旋糖19，酵母提:布氏琼脂粉末43g，氧化血红压灭菌15分钟。培养基冷却至48C -50C。每100ml培养基加入5ml灭菌脱纤维羊血。A. 2. 2 强化布氏肉汤按下列配方配制布氏肉汤粉末:膜消化醋蛋白10g，动物组织多肤消化物10g，右旋糖19，酵母提取物址，氯化铀5g，亚硫酸铀O.19,(1 OOOml蒸锢水中加人:
25、布氏肉汤粉末28g，氯化血红素贮存液1时，维生素K1工作液1mL煮沸榕解。121C高压灭菌15分钟。肉汤冷却至4C，加入100m1灭菌马冻融血(50%)。4C8C贮存。A. 2. 3 硝代碗酸盐营养肉汤7 WS/T 248-2005 ( 1 OOOml蒸馆水中加人不含指示剂的硫代硫酸盐培养基30g，氯化血红素贮存液1m!，维生素Kl工作破1mlo煮沸溶解琼脂(硫代硫酸盐肉汤含有少量琼脂)。每管5ml分装至试管中。1210C高压灭菌15分钟。避光贮存于常温不超过6个月。使用时煮沸5分钟;冷却。每管加入O.25ml滤过灭菌的碳酸氧饷贮存液。做为加入碳酸氢饷替代品，高压灭菌前每管可加入大理石碎片。A
26、. 2. 4 麦氏浊度标准(0.5号)将O.5ml O.048rnol/L的BaCl2(1. 175%w/v BaClz 2H20)加到99.5时O.18mol/LC O. 36N)的H2创(l%v/v)中并不断搅动以维持海悬状态。按每管46ml将硫酸顿悬液分装于带悬盖的管子中，管子尺寸应与培养或稀释接种菌所用的管子一致。这些管子应密封并贮存于室温避光处。每次使用前，应将浊度标准管置于旋转棍匀器上剧烈振动，目测其外观浊度应均匀一致。若有大颗粒出现，此标准管应更换。使用前核实其正确放度，每个月都应证实或更换。烛度标准的正确浓度应使用分光光度计测定吸光度核实。该分光光度计光径为1cm，并配有合适的
27、比色杯。O.5号麦氏标准管在625nm处的吸光度值应为O.08O.10 0 注意:商业上可得到乳胶颗粒悬液制成的麦氏分光光度计标准。使用时轻轻反转1昆匀(而不是在旋转槐匀器上。表A.l厌氯菌试验抗微生物药的推荐与分组除脆弱拟杆菌菌群外产气英膜梭菌消化革兰民阴性厌氧菌.1除产气英膜梭菌脆弱拟杆菌菌群球菌属无芽抱革-内酷胶脚。.C)-内航腊酶bl外梭菌属菌利1去士民阳性菌阳性菌株阴性菌株氨节西林/舒巴坦或氨主iP西林/舒巴坦氨节西林或青霉素或氨节西林或阿莫西林/克拉维酸或阿莫西林/克拉青霉素摞氨节西林然青霉素淤*拉西林/二三I也巴坦维酸或替卡西林/克拉维P)民拉西林/一幢巴酸(分离株对氨节西坦或替
28、卡西林/克克林霉素阿英西林/克拉维酸克林霉素林/霄巴坦和/或阿莫拉维酸(对氨带回或氨节西林/舒巴坦西林/克拉维酸耐药林/舒巴坦或阿莫Pj拉西林/二I唆巴坦时)西林/克拉维酸耐或替卡西林/克拉维首选药时)酸头抱西丁头抱商丁或头抱替头抱替坦坦头抱西丁或头抱替坦克林霉素克林霉素克林霉素甲硝I坠甲硝盹亚脑培商或美罗培南亚股培商或美罗培南亚腊堵商或美罗培南甲硝i些甲硝峰甲硝聪头子包峨肪头抱I唆脂头抱替坦或头抱哗脂头抱替坦或头子包曲松头抱曲松头抱西丁或头抱曲松头子包盹院或头抱略后头子包西丁氯霉素氯霉素头子包曲松头子包曲松次选IJI民拉西林或赈拉西林四环素IJI匠拉西林或替卡西林或月底拉西林或替卡西林或美艳
29、西林替卡西林或美洛西林曲发沙星曲发沙星曲发沙星美洛西林a)包括拟杆菌属其他菌种、普雷沃菌属、吟琳单胞菌属、梭杆菌属、韦荣球菌属、萨顿菌属和嗜胆菌属。b)仕内酌腊酶(发色头抱菌素)。如果仕内眈腊酶阳性，报告青霉素和氨节西林耐药。8 WS/T 248-2005 表A.2解释标准和相对应最低抑菌读度(MIC)值(g/ml)抗微生物药敏感中介耐药阿真西林/克拉维酸4/2 8/4 16/8 氮节西林o. 5 2 氮f西林/帘巴坦主二8/416/8 32/16 头子包美|些16 32 64 头抱nJR酣运1632 64 头抱略后16 32 64 头础替坦16 32 64 头抱西丁16 32 64 头子包嗖
30、脂32 64 128 头拍曲松16 32 64 氯霉素三二816 32 克林霉素2 4 8 亚服培南4 8 16 甲硝!座8 16 32 美罗培南4 8 16 美洛西林32 64 128 青霉素O.5 1 2 q展拉西林32 64 128 拉西林/一啤巴坦主豆32/464/4 128/4 四环素主豆48 16 替卡西林32 64 128 替卡西林/克拉维酸主三32/264/2 128/2 曲发沙星2 4 8 表A.3制备抗微生物药贮存液所需溶剂和稀释液抗做生物药溶剂稀将被阿莫西林和替卡西林;克拉维酸磷酸辑冲液，pH6.0, O. 1mol/L 磷酸缓冲攘，pH6.0, O. 1mol/L 氨节
31、西林磷酸缓冲液，pH8.0, O. 1mol/L 磷酸缓冲液，pH6.0 ,0. 1mol/L 头抱替坦二甲基亚枫水氯毒素95%乙醇水甲硝瞠二甲基亚枫水亚腊i音南磷酸缓冲攘，pH7.2, 0. Olmol/L 磷酸缓冲液，pH7.2,0. 01mol/L 注1.所有贮存液应置于一70.C或更低。融化后不应重新冷冻。通常不适于贮存在无霜冷冻柜中。注2.这些溶剂和稀释液用于制备抗微生物药贮存液，这些药物需要水以外的溶剂，它们可以用水或肉汤进一步稀释。除此外，可用水作溶剂的药物包括:搜带回林、头砸孟多、头抱美腹、头抱酣、头抱嚓腊、头子包西丁、头抱瞠肝、头抱曲松、克林霉素、美洛西林、青霉素、fJ匠拉西
32、林、fJ匠拉西林/二础巴坦、四环素类、由发沙星和万古霉素。注3，以上来列出的所有其他头抱毒素类和头霉素英用pH6.0 , O. 1mol/L磷酸缓冲液(除非厂商有其它说明L用灭菌燕馆水进一步稀释。9 WSjT 248-2005 表A.4浓度步骤(g/mD 1 5 120 2 5 120 3 5 120 4 ilO 5 640 6 640 7 80 8 80 9 80 10 10 11 10 12 10 头J包美瞧头于包0)在酣头砸噬脂头子包替坦头于包西丁头抱哗肝头?包幽松氧霉素克林衫、星克林霉素ertapenem 亚脑培甫美洛培南甲睛瞠荣洛西林10 琼脂稀释法或微量肉汤稀释法敏感试验中抗微生物
33、药稀释液的制备方案抗散生物药稀释班十蒸饿水来讲;体积(m)Cml) 贮存液2 2 贮存液3 贮存掖7 步骤32 、2气步骤33 0.03町O.12 0.5-2 0.06-0. 25 0.03-0.12 0.06-0. 25 0.25-1 16早日4|琼脂或肉汤中1: 10 :中间浓度(g/mD 2560 1 280 640 320 2.5 1. 25 多型拟杆菌TCC 29741 l64 32-128 g 8-32 AII . .4道吗:O. 06-0. 5 2-8 O. 25-1 O. 125-0.5 O. 125-0.5 0.5-2 8-32 i事稀释的最终浓度(g/mll 256 128
34、 64 32 16 B 4 2 l ，I ;1 4-16 gl 32-128 64-256 32 1284-16 16-64 NR 一_. 0.03-0.12 0.06-0.25 0.5-2 O. 125-0. 5 O. 125-0. 5 一_. 8 32 Log2 8 7 6 5 4 3 2 l 。一l-2 -3 WS/T 248-2005 抗微生物药青霉素服拉西林昵拉西林/三嗤巴坦四环素替卡西林替卡西林/克拉维酸曲发沙星注1.除青霉素外，注2:NR表示此病原菌/，围广(阿莫西林/克拉维拟杆菌)。相应地，rj二3.NR表明脆弱1:(杆菌ATCC 25285 8-3206-64)法2-8 0.
35、 12/4-0.4/4 0.12-0. 5 16-64 多型拟杆菌ATCC 29741 8-3206-64 )仇8品324/4-1 6/4 8-32 16-64 结表迟缓优杆菌ATCC 43055 一句_8-32 4/4-16/4 _ 巳rtapenem16-64 16/2-6,1/2 O. 25-1 控范围显示得到的数值范西林/克拉维酸和脆弱围山一些由A哇。-nb-内L亚股培南甲硝I垫拉西林JJ拉西林/三嗖巴坦替卡西林/克拉维酸曲发沙星注:对于4倍稀释范围，允许植围边缘0.25-2 O. 125-0. 5 8-32 8/4-32/4 8/2-32/2 O. 25町211 的OON-寸NH旨JF华人民共和卫生行业标准厌氧菌的抗做生物药敏感试验方法WS/T 248 - 2005 国中印张:1. 25 2006年5月第1版第1次印刷* 出版发行:人民卫生出版社(中继线67616688)地址:(100078)北京市丰台区方庄芳群固3区3号楼网址:http:/飞1fWW.pmph. com E-mail: 印刷:北京新丰印刷厂经销:新华书店开本:880 x 1230 1/16 字数:34千字版次:2006年5月第1版书号:14117 . 11 定价:9.00元著作权所有，请勿擅自用本书制作各类出版物，造者必究(凡属印装质量问题请与本社销售部联系退换)wsrr 248-2005
