1、ICS 65. 120 B 46 道昌中华人民共和国国家标准GB/T 13080.2一2005饲料添加剂蛋氨酸铁(铜、锤、铸)萤合率的测定凝胶过滤色谱法Feed additive-Determination of chelation percentage of iron、copper、manganese and zinc methionine-Gel filtration chromatography 2005-09-05发布中华人民共和国国家质量监督检验检痊总局中国国家标准化管理委员人2006-02-01实施GB/T 13080.2-2005 前本标准是在国内生产实际基础上研究制定的。本标准
2、由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(武汉)、长沙兴嘉生物工程有限公司、广州康瑞德生物技术有限公司。本标准主要起草人:杨林、杨海鹏、杨先奎、刘贤荣、黄逸强、陈璇、钱沁。I 1 范围饲料添加剂蛋氨酸铁(铜、钮、铸)整合率的测定凝胶过滤色谱法GB/T 13080.2-2005 本标准规定了用凝胶色谱法测定蛋氨酸、琵基蛋氨酸与可榕性铁、铜、锤、怦盐反应生成的整合物整合率的方法。本标准适用于蛋氨酸铁、蛋氨酸铜、蛋氨酸锤、蛋氨酸挥、短基蛋氨酸铁、起基蛋氨酸铜、提基蛋氨酸锤、程基蛋氨酸钵等整合物整合率的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而
3、成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(neqISO 3696: 1987) GB/T 13885 饲料中铁、铜、锤、僻、模的测定原子吸收光谱法GB/T 14699. 1饲料采样3 原理试样在水中加热、离心后，分成沉淀和溶液两部分。溶液中所含的可榕性氨基酸整合物及金属离子经过凝胶分离，在规定条件下洗脱，金属离子形成氢氧化物沉淀，将固定在凝胶柱顶端无法洗脱，可榕性氨基酸
4、整合物则可通过配体氨基酸的携带从凝胶柱上洗脱下来，实现和金属离子的分离;可榕性氨基酸整合物洗脱分离完成后，加入EDTA洛液洗脱，使金属离子从色谱柱上洗脱。用原子吸收光谱法测定沉淀态氨基酸整合物、可溶性氨基酸整合物及金属离子的含量，分别计算出沉淀态氨基酸整合物、可溶性氨基酸整合物占金属元素总量的比例即可计算出相应的氨基酸整合物的整合率。4 试剂和溶液实验用水应符合GB/T6682中二级用水的规格。所用试剂除特殊规定外，均为分析纯。4. 1 氢氧化铀溶液c(NaOH)=0.1 mol/LJ :称取2.00g氢氧化铀溶于500mL水中，由匀。4.2 棚酸洛液c(H3B03)=0.4mol/LJ:称取
5、12.28g棚酸溶于500mL水中，棍匀。4.3 氯化饵溶液c(KCD=0.2 mol/LJ :称取7.455g氯化饵溶于500mL水中水，氓匀。4.4 洗脱液的配制4.4. 1 pH7.0的洗脱液:分别量取1.0 mL氢氧化铀榕液(4.1), 12.5 mL棚酸搭液(4.2)，12.5mL氯化饵榕液(4.3)，注入100mL容量瓶，用水稀释至刻度。4.4.2 pH9.0的洗脱液:分别量取20.8mL氢氧化纳溶液(4.1)，12.5mL唰酸溶液(4.2)，12.5mL氯化拥溶液(4.3)，注入100mL容量瓶，用水稀释至刻度。4.4.3 pH10.0的洗脱液:分别量取43.7mL氢氧化饷溶液(
6、4. 1) , 12. 5 mL棚酸洛液(4.2)，12.5mL氯化饵溶液(4.3)，注入100mL容量瓶，用水稀释至刻度。4.5 乙二胶四乙酸二饷(EDTA)溶液c(EDTA)=O.lmol/LJ:称取37.2g乙二股四乙酸二铀加热恪于100mL水中，棍匀。GB/ T 13080.2-2005 4.6 葡聚糖凝胶:G-15。4. 7 盐酸溶液:将1体积的盐酸加入到10体积的水中，棍匀。5 仪器5. 1 恒温水浴锅:30C-80C可调。5. 2 原子吸收分光光度计:波长范围190nm-900 nm。5.3 离心机:3 000 r/min。5.4 色谱柱:长300mm.内径9mm。5.5 恒流泵
7、。6 试样制备按GB/T14699. 1取有ff昆匀，装入样品瓶内密闭保:c:r.7 测定步骤7.1 试样预处理称取试样约O.30 min.不时搅拌，容量瓶中，沉淀分A用可溶性氨基酸整25 mL容量瓶中7.2 凝胶色谱7.2. 1 凝肢的称取约10g 7. 2. 2 凝肢的且将色谱柱垂闭出口开关。沿玻1开启柱下面的出口恒流泵，开启柱下面7.2. 3 上样排出洗脱液至凝胶胶表面约1mm.小心加入，及残留在凝胶表面的样品。、7.2.4 洗脱分离7. 2.4.1 可溶性整合金属元素的分离60C水浴中加热)溶解，转入另一用相应pH的洗脱液洗脱，流速为0.7mL/min.收集洗出组分约100mL.定容至
8、100mL.得可溶性氨基酸整合物溶液，称为溶液C。7. 2.4.2 游离态金属离子的分离可溶性氨基酸整合物分离完成后，在色谱柱顶端用吸管移入1mL EDTA溶液(4.日，用pH7.0洗脱液(4.4.1)继续洗脱，合并所有洗出组分，定容至100mL.得金属离子溶液，称为溶液D。8 测定将上述榕液A(7.1)、溶液B(7.1)、溶液C(7.2. 4.1)、溶液D(7.2. 4. 2)稀释至一定浓度(稀释倍数2 GB/T 13080.2-2005 视含量而定)，按GB/T13885上机测定，分别测定榕液中金属元素的含量。9 整合率的计算氨基酸整合物整合率按式(1)计算:)x 100% :(CAVA
9、ccVc CBVB L CAVA十CBV B Cc V c + CD V D C A V A十CBVBJ式中:X一一-氨基酸整合物整合率，%;CA、CB、Cc、CD一一分别为A、B、C、D溶液中金属离子的含量，单位为微克每毫升(g/mL); VA、VB、Vc、VD一一分别为A、B、C、D搭液的体积，单位为毫升(mL)。( 1 ) 计算结果表示到小数点后一位。每个试样取两份试料进行平行试验，以算术平均值为测定结果。10 重复性在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%，以大于这两个测定值的算术平均值的5%的情况不超过5%为前提。的CON-N.O02同阁。华人民共和国家标准饲料添加荆蛋氨酸铁(铜、锤、铸)整合率的测定凝股过滤色谱法GB/T 13080.2- 2005 国中节吃中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张o.5 字数6千字2006年2月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2006年2月第-版唔定价8.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-26933 GB/T 13080.2-2005
