1、ICS 67050X 04 囝园中华人民共和国国家标准GBT 22972-2008牛奶和奶粉中噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑、苯硫氨酯残留量的测定 液相色谱一串联质谱法Determination of thiabendazole，albendazole，fenbendazole，oxfendazole20081231发布and febantel residues in milk and milk powderHPLCMSMS method2009050 1实施宰瞀髁紫瓣訾篓警瞥翼发布中国国家标准化管理委员会促1”刖 舌GBT 22972-2008本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标
2、准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国沈阳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：赵颖、刘宁、金雁、盂祥勇、姚家彪、庞国芳。牛奶和奶粉中噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑、苯硫氨酯残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 22972-20081范围本标准规定了牛奶和奶粉中噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑和苯硫氨酯残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑和苯硫氨酯残留量的测定。本标准的方法检出限：牛奶中噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑和苯硫氨酯的
3、检出限为001 mgkg；奶粉中噻苯达唑、阿苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑和苯硫氨酯的检出限为008 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第l部分：总则与定义(GBT 63791 2004，IS0 57251：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：
4、确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 637922004，ISO 5725 2：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理样品经乙腈提取，c，s固相萃取柱净化，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。41 水：GBT 6682，一级。42乙腈：色谱纯。43甲醇：色谱纯。44正丙醇。45碳酸氢钠(NaHCO。)。46碳酸钠(Na：CO。)。47碳酸氢钠溶液：01 molL。称取84 g碳酸氢钠(45)，用水溶解，定容至1 000 mL。48碳酸钠溶液
5、：01 molL。称取106 g碳酸钠(46)，用水溶解，定容至100 mL。49碳酸盐缓冲溶液(pH值为91)：将01 molL碳酸氢钠溶液(47)900 mL与01 molL碳酸钠溶液(48)100 mL混合。410标准物质：噻苯达唑(thiabendazoleCAS：14879 8)、阿苯达唑(albendazoleCAS：54965 218)、芬苯达唑(fenbendazole CAS：43210679)、奥芬达唑(oxfendazole CAS：5371650一o)和苯硫氨酯(febantelcAS：5830630 2)的纯度均99。1GBT 22972-2008411标准储备溶液：
6、10 mgmL。准确称取适量的五种苯并咪唑类药物标准物质(410)，分别用甲醇(43)配制成浓度为10 mgmL的标准储备液。保存于04冰箱中。412混合标准储备溶液：100#gmL。吸取适量五种苯并咪唑类药物标准储备溶液(411)，用甲醇稀释成100gmL的混合标准溶液，于04冰箱保存。413基质混合标准工作溶液：根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，吸取一定量的混合标准储备溶液(412)，用空白样品提取液配成系列浓度的基质混合标准工作溶液，当天配制。414 C-e固相萃取柱：500 mg，6 mL。使用前依次用5 mL甲醇、5 mL水和2 mL碳酸盐缓冲液(49)预处理，同时保持柱体湿润。4
7、15滤膜：02 pm。5仪器51液相色谱一串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。52分析天平：感量001 g和01 mg。53固相萃取装置。54旋转蒸发仪。55离心机：转速4 000 rrain以上。56涡旋混匀器。57超声波清洗器。6试样制备与保存61试样制备取代表性样品约500 g，混匀，装入洁净容器，密封，标明标记。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。62试样保存将试样于04保存。7测定步骤71提取711牛奶样品称取10 g牛奶试样，精确至001 g，置于100 mL具塞离心管中。加入30 mL乙腈，涡旋混匀3rain，超声30min，以4 000 rrai
8、n离心5rain，取上清液加入10mL正丙醇(44)，于40水浴旋转蒸发除去有机溶剂，用碳酸盐缓冲溶液(49)定容至10 mL。712奶粉样品称取125 g奶粉试样于烧杯中，加适量3545水将其充分溶解，待冷却至室温后，加水至100 g，混匀，准确称取10 g试样，精确至0Ol g，置于100 mL具塞离心管中，按711步骤进行处理。72净化移取5mL提取液，注入预处理过的c，s固相萃取柱(414)，调节流速为10mLmin，用5mL水淋洗，弃去全部流出液后抽干。用6 mL乙腈(42)洗脱被测物，流速10 mLmin，40水浴氮气吹干，再用甲醇溶液(1+4)溶解并定容至10 mL，过02 tL
9、m滤膜(415)，供液相色谱一串联质谱测定。73测定731液相色谱条件液相色谱条件如下：a)色谱柱：BEH C18，17 p-m，50 mmX 21 ram(内径)或相当者；2b)柱温：40；c)进样量：10“L；d)流动相及流速见表l。表1液相色谱梯度洗脱条件GBT 22972-2008时间rain 流速(pLmin) 甲醇 O1“甲酸水溶液0 0 200 5 95120 200 90 10121 200 5 9514O 200 5 95732质谱条件质谱条件如下：a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测；d)电离电压：20 kV；e)离子源温度：110；
10、f)锥孔反吹气流量：80 Lhg)脱溶剂气温度：380；h)脱溶剂气流量：700 Lh；)五种苯并眯唑类药物定性离子对、定量离子对、锥孔电压及碰撞能量质谱参数见表2。表2五种苯并咪唑类药物的质谱参数化台物名称 母离子(,nz) 子离子(m：) 锥孔电压V 碰撞能量eV1747 46 25噻苯达唑 202o1307 46 31233，91 34 19阿苯达唑 266o1909 34 332679。 34 21芬苯达唑 30001S87 34 341587 38 34奥芬达唑 31601908 38 213829 26 18苯硫氨酯 44704149 26 148定量离子。733液相色谱一串联质谱
11、测定7331定性测定每种被测组分选择一个母离子，两个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中相对应物质的保留时间偏差在25之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。RGBT 22972-2008表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K50 20K50 10K20 KlO允许的最大偏差 士20 25 土30 士5。7332定量测定用基质混合标准工作溶液(413)分别进样，以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线
12、，用标准工作曲线对待测样品进行定量，样品溶液中的待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，五种苯并咪唑类药物标准物质多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图A1。五种苯并眯唑类药物的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B1。74平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。75空白试验除不称取样品外，均按上述步骤进行。8结果计算五种苯并咪唑类药物残留量的测定按式(1)计算。x=c筹揣式中：x试样中被测组分的残留量，单位为毫克每千克(mgkg)；c从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升(p-gmL)v样品溶液定容体积，单位为毫升(mL
13、)；m样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，其重复性和再现性的值以95的可信度来计算。92重复性在重复性实验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，牛奶和奶粉中五种苯并咪唑类药物添加浓度范围及重复性方程见表4。表4牛奶和奶粉中五种苯并咪唑类药物添加浓度及重复性限和再现性限方程 单位为毫克每千克化合物名称 添加浓度范围 样品基质 重复性限r 再现性限R牛奶 lg r-0919 9Igm一1123 3 lgR=O999 5 lgm一0886 1噻苯达唑 oo
14、IO50奶粉 lg r-1108 6lgm一0809 7 lgR；1084 5igm一0813 6牛奶 lgRl 001 7lg m 1171 2 lgR=0983 6lg1 037 8阿苯达唑 001050奶粉 lg r-0981 9lg1 158 8 lgR=0953 7 lg1 131 6牛奶 Ig r-0 950 8lgm一1100 2 IgR=O947 4 Igm一1 088 8芬苯达唑 001050奶粉 lg r一1137 0lg m 0837 3 lg尺一1062 6 lg0 875 8GBT 22972-2008表4(续) 单位为毫克每千克化舍物名称 添加浓度范围 样品基质 重
15、复性限r 再现性限R牛奶 lg r一0973 719m 1071 2 lgR-1028 5 lg优一0977 1奥芬达唑 001050奶粉 Ig r-O。949 319m一1。095 9 lgR-0930 9 Igm1078 6牛奶 IgR0 907 4191 176 1 lgR=0888 7lgm一1182 0苯硫氨酯 001050奶粉 Ig r一1000 3lgm一10081 IgR=0977 1 IgmO993 0注：m为两次测定结果的算术平均值。如果差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性实验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现
16、性限R，牛奶和奶粉中五种苯并咪唑类药物添加浓度范围及再现性限方程见表4。SGBT 22972-2008附录A(资料性附录)标准物质多反应监测(MRM)色谱图五种苯并咪唑类药物标准物质多反应监测(MRM)色谱图，见图A1。10001000100噻苯哒唑202 0174 7200 4 00 6 00 0 00 i0 00 12 00 train阿苯哒唑266023392 00 4 00 6 00 8 0091510001200“mln芬苯哒唑300 026792 00 4 00 600 800 10 00 12 00mln6 44臭芬哒唑316 o108 72 oo 4oo 6 oo 8 00 l
17、O oo 12oo 苯硫氨酯4470382 92 00 400 600 8 00 1000 13 00 dmin图A1 五种苯并咪唑类药物标准物质多反应监测(MRM)色谱图附录B(资料性附录)回收率五种苯并眯唑类药物的添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B1。GBT 22972-2008表B1 五种苯并咪唑类药物的添加浓度及其平均回收率的试验数据平均回收率化合物名称 添加浓度(mgkg)牛奶 奶粉ool 725 71 4噻苯达唑 o10 804 81 2o50 824 83 3o01 802 826阿苯达唑 O10 85o 874o50 927 936o01 81o 791芬苯达唑 010 852 862o50 83o 902o01 785 752奥芬达唑 0 10 816 807o50 836 839o01 712 708苯硫氨酯 010 801 805o50 811 828
