1、ICS 67050X 04 a雪中华人民共和国国家标准GBT 22979-2008牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的测定气相色谱一质谱法Determination of boscalid residues in milk and milk powderGCMS method2008-12-31发布 2009050 1实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局学者中国国家标准化管理委员会仅11刖 置GBT 22979-2008本标准的附录A、附录B均为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出入境检
2、验检疫局。本标准主要起草人：潘国卿、张春艳、白国涛、郑书展、刘来俊、李红、张伟、庞国芳。牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的测定气相色谱一质谱法GBT 22979-20081范围本标准规定了牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的气相色谱一质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中啶酰菌胺残留量的测定。本标准方法检出限：牛奶为0010mgkg；奶粉为0080mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版
3、本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GBT 637912004，IS0 57251：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 637922004，ISO 57252：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 66822008，Is0 3696：1987，MOD)3原理试样中的啶酰菌胺用乙腈提取，提取液经盐析、离心、浓缩和溶剂交换后，经凝胶渗透色谱净化，用气相色谱一质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说
4、明外，所用试剂均为分析纯，水为GBT 6682规定的一级水。41乙腈：色谱纯。42乙酸乙酯：色谱纯。43环己烷：色谱纯。44无水硫酸钠：650灼烧4 h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。45氯化钠。46乙酸乙酯环己烷溶液：将乙酸乙酯(42)与环己烷(43)按照1：1体积比进行混合。47啶酰菌胺标准品：纯度大于98。48啶酰菌胺标准储备溶液：准确称取一定量的啶酰菌胺标准品，用乙酸乙酯一环己烷溶液(46)配成010 mgmL的标准储备溶液，于4避光保存。49啶酰菌胺标准工作溶液：根据需要吸取适量的啶酰茵胺标准储备溶液，用乙酸乙酯环己烷溶液(46)逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液，于4避光保
5、存。410啶酰菌胺基质标准工作溶液：根据需要吸取适量的啶酰菌胺标准工作溶液，用阴性样品提取液配制成浓度范围在0010 pgmL050 pgmL的系列基质标准工作溶液，该溶液应现用现配。411滤膜：02 pm。】GBT 22979-20085仪器和设备51气相色谱一质谱仪：配有电子轰击源(EI)。52凝胶渗透色谱仪：配有凝胶渗透色谱柱。53分析天平：感量01 mg和001 g。54均质器。55旋转蒸发器。56超声波清洗器。57离心机：转速不小于10 000 rrain。58鸡心瓶：200 mL。59分液漏斗：250 mL。6试样制备与保存61试样的制备611牛奶：取有代表性试样约500 g，搅拌
6、均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。612奶粉：取有代表性试样约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。准确称取12 g乳粉试样(精确到0ol g)于250 mL烧杯中，少量多次加入50 mL煮沸并冷却到60左右的水溶解，冷却至室温后，移入i00 mL容量瓶中，用少量水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶，再用水定容到刻度，混匀，制备成奶粉复原乳试样。62试样的保存将试样于4保存。7测定步骤71提取准确称取lO g牛奶试样(精确到0Ol g)或量取1000 mL奶粉复原乳试样(612)于100 mL离心管中，加入50 mL乙腈(41)，用均质器以15 000 rrain提取2 rai
7、n，用离心机以3 000 rrain离心5 min，上清液转入250 mL分液漏斗中，残渣中再加入30 mL乙腈(41)，以15 000 rrain提取2 rain，以3 000 rmin离一tl,5rain，合并上清液于上述分液漏斗中，加入3 g氯化钠(45)，剧烈振荡3rain，静置分层后，除去分离的水层，乙腈层溶液通过装有10 g无水硫酸钠(44)的漏斗过滤到200mL鸡心瓶中，用适量乙腈(41)淋洗无水硫酸钠及漏斗，收集全部滤液，在低于40条件下旋转蒸发除去溶剂至干，残留物中加入约3 mL乙酸乙酯环己烷溶液(46)溶解后，超声波提取1 rain，提取液转入10 mL容量瓶中，重复操作三
8、次，合并提取液，用乙酸乙酯一环己烷溶液(46)定容至刻度，摇匀。72凝胶渗透色谱净化721条件凝胶渗透色谱条件如下：a)凝胶渗透色谱柱：300 minxl0 mm，内装Bio Beads S-X3填料或者相当者；b)检测波长：254 nm；c) 流动相：乙酸乙酯一环己烷溶液(46)；d)流速：5 mLmin；e)进样量：5 mL；f)开始收集时间：85 rain；g)结束收集时间：20 rain。2GBT 22979-2008722净化将上述提取液以3 000 rmin离心5 min，上清液过045 pm有机相滤膜(411)，取500 mL提取液注入凝胶渗透色谱仪的色谱柱中，以乙酸乙酯一环己烷
9、溶液(46)洗脱，收集85 min20 min的流出液，在低于40条件下浓缩至近干，用乙酸乙酯一环己烷溶液(46)定容到100 mL，供气相色谱一质谱测定。73阴性样品提取液的制备取不含啶酰菌胺的阴性牛奶或者奶粉样品，按71和72步骤制备阴性样品提取液，用于配制啶酰菌胺基质标准工作溶液。74气相色谱一质谱测定741仪器条件气相色谱一质谱条件如下：a)色谱柱：HP一5MS石英毛细管柱(30 m025 mmX 025 pm)或相当者；b)色谱柱温度程序：100保持l rain，然后以30rain升温至280，保持8 mi“；c)载气：氦气，纯度99999；d)载气流速：10 mLmin；e)进样口
10、温度：290；f)进样量：1 pL；g)进样方式：不分流进样，15 min后打开分流阀和隔垫吹扫阔；h)电子轰击源：70 eV；1)离子源温度：230；j)GCMS接口温度：280；k)驻留时间：100 ms；1)选择离子监测：定量离子为140，定性离子为142、342。定量离子与定性离子的相对丰度比值，见表l。表1 定量离子与定性离子的相对丰度比值项目 定量离子 定性离子 定性离子特征碎片离子(mz) 140 342 142相对丰度 100 35 32742定性测定在相同的实验条件下进行样品测定时，如果样品中待测物质的色谱峰保留时间与标准品色谱峰保留时间相差在士25以内，并且在扣除背景后的样
11、品质谱图中，所选择的离子均出现，且样品谱图中定性离子的相对丰度与浓度接近的基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在该种待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K50 20K50 10K20 K10f 允许最大偏差 20 士25 ：L30 50743定量测定在仪器最佳工作条件下，对啶酰菌胺基质标准工作溶液(411)进行色谱分析，以峰面积为纵坐标，基质标准工作溶液浓度为横坐标绘制，用标准工作曲线对样品进行定量，基质标准工作溶液和样液中啶酰菌胺的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱和质谱条件下，啶酰菌胺的
12、参考保留时间为112 rain，啶酰菌胺标准溶液的选择性离子色谱图和气相色谱一质谱图参见附录A中的图A 1、图丸2。3GBT 22979-2008本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B1。75平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。76空白试验除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。8结果计算样品中啶酰菌胺残留量的测定按式(1)计算：xc筹獬F式中：x试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克(mgkg)；c从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升(pgmL)V样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)；F换算系数，牛奶F-1，奶粉F-
13、10。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r)，试样中啶酰菌胺含量范围在0010mgkgO050mgkg之间时，重复性方程为：牛奶为lg r=O989 0Igmo820 4，奶粉为lg r=1020 0 lg mO845 4。如果两次测定值的差值超过重复性限(r)，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，试
14、样中啶酰菌胺含量范围在0010mgkgO050mgkg之间时，再现性方程为：牛奶为19R=0976 0lgmO7961，奶粉为lgR一1108 9 Ig mo513 9。注：m为两次铡定结果的算术平均值。附录A(资料性附录)啶酰菌胺标准溶液的选择离子色谱图及质谱图啶酰菌胺标准溶液的选择离子色谱图及质谱图，见图A1、图A2。70 00065 00060 00055 00050 00045 00040 00035 00030 00025 00020 00015 00010 0005 000GBT 22979-20089 50 10 00 10 50 11 00 11 50 12 00 12 50 13 00 13 50t|rain图A1 啶酰菌胺标准溶液的选择离子色谱图图A2 啶酰菌胺标准溶液的气相色谱一质谱图黜黜黜黜黜黜黜黜黜黜黜骝孔坞埘坫H堙加0；0；GBT 22979-2008附录B(资料性附录)回收率啶酰菌胺添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B1。表B1 啶酰菌胺添加浓度及其平均回收率的试验数据样品基质 添加浓度(mgkg) 平均回收率0010 890牛奶 0 020 8960 050 90 70010 88 9奶粉复原乳 0020 88 60050 89 l
