1、中华人民共和国国家标准食用植物油卫生标准的分析方法Melhod for analysis of hygienic slandard of edible oils 1 主题内容与适用范围4正如、Iit规定f食用植物油卫生指标的分析方法。牛二标准适用f食用植物油卫生指标的分析。残留溶剂的最低检出量为O.1 mg/kg , 2 引用标准(;82716 食用植物油卫生标准(;B/T 5009.11 食品中总碑的测定方法GB/丁5009.22 食品中黄曲霉毒素队的测定(山/丁.5009.27 食品中苯并(a)泛的测定方法3 感官检查3. 1 色泽3. 1. 1 仪器烧材、:直径50mm，杯高100mm
2、, 3. 1. 2 分析步骤GB/T 5009.37-1996 代替GB5009. 37 85 将样品1屁匀并过滤，然后倒入烧杯中，油层高度不得小于5mm，在室温下先对着自然光观察，然后再1:f 1￥色背景前借其反射光线观察并按下列词句记述z白色、灰白色、拧橡色、淡黄色、黄色、橙色、棕黄色、棕色、棕红色、棕褐色等。3. 2 气味反滋咪3. 2. 1 分析步骤将样品倒入150mL烧杯中，置于水浴上，加热至50C.以玻璃棒迅速搅拌。嗅其气味，并蘸取少许样品，辨尝其滋味，然后按正常、焦糊、酸败、苦辣等词句记述。4 理化检验4. 1 酸价4. 1. 1 原理植物泊中的游离脂肪酸用氢氧化饵标准溶液滴定，
3、每克植物油消耗氢氧化何的运克数，称为酸价。4. 1. 2 试剂4. 1.2. 1 乙酷乙醇混合液z按乙酷乙醇(2+1)混合。用氮氧化御溶液(3g/L)中和至盼献指示液呈中L 4.1.2.2 氢氧化锦标准滴定溶液(c(KOH)=O.05 mol/LJ , 中华人民共和国卫生部1996-06-19批准1996-09-01实施76 GB/T 5009.37-1996 4.1.2.3 酌Iit指示液，10g/L乙醇溶液。4. 1. 3 分析步骤准确称取3.005. 00 g样品，置于锥形瓶中，加入50mL中性乙酷乙醇混合液，振摇使油溶解，必要Al可?:热水中，温热促其溶解。冷至室温，加入盼欧指示液23
4、商，以氢氧化饵标准滴定溶液(0.05 mol/Ll滴定，至初现微红色，且O.5 min内不褪色为终点。4. 1. 4计11X, = V , X c, X 56.11 m , ) I ( 式中:XI样品的酸价;V, 样品消耗氢氧化锦标准滴定溶液体积，mL;kl 氢氧化锦标准i商定的实际浓度，mol/L，m，一一样品质量，g; 56.11-二与1.0mL氢氧化饵标准滴定溶液c(KOH)= 1. 000 mol/LJ相当的氢氧化饵毫克数。结果的表述2报告算术平均值的二位有效数。4. 1.5 允许差相对相差10%。4.2 过氧化值4. 2. 1 原理油脂氧化过程中产生过氧化物，与破化饵作用，生成游离腆
5、，以硫代硫酸销溶液滴定，计算含量。4. 2. 2 试剂4.2.2.1 饱和腆化御溶液z称取14g腆化饵，加10mL水溶解，必要时微热使其溶解，冷却后贮于棕色瓶中。4. 2. 2. 2 三氯甲烧冰乙酸混合液.量取40mL三氯甲饶，加60mL冰乙酸，混匀。4.2.2.3 硫代硫酸销标准滴定溶液c(Na2S20，)= O. 002 mol/LJ 0 4.2.2.4 淀粉指示剂(10g/U，称取可溶性淀粉O.5 g，加少许水，调成糊状，倒入50mL沸水中调匀，煮沸。临用时现配。4.2.3 分析步骤称取2.003. 00 g I昆匀(必要时过滤)的样品，置于250mL破瓶中，加30mL三氯甲:烧-冰乙酸
6、混合液，使样品完全溶解。加入1.00 mL饱和破化饵溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇O.5 min，然后在暗处放置3mm。取出加100mL水，摇匀，立即用硫代硫酸销标准滴定溶液(0.002mol/U滴定，至淡黄色时.加1mL淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失为终点，取相同量三氯甲烧冰乙酸溶液、腆化饵溶液、水，按同一方法，做试剂空白试验。4.2.4 计算X V2- V ,) X c2 X 0.126 9 Z EX100 m2 ( 2 l X , =X2X78.8 .( 3 ) 式中，X , 样品的过氧化值，g/100g，X1 样品的过氧化值，meq/kg;V , 样品消耗硫代硫酸纳标准滴定溶液体积，m
7、L;V:1二一试剂空白消耗硫代硫酸纳标准滴定溶液体积，mL;Q 硫代硫酸销标准滴定溶液的浓度，mol/L，m , 样品质量，g;O. 126 9 与1.00 mL硫代硫酸纳标准滴定溶液c(Na，S，O，)二1.000 mol/LJ相当的映的质量，g;77 GB!T 5009. 37-1996 78.8 换算因子。结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。4.2.5 允许差相对相差;10%。4.3 毅基价4. 3. 1 原理量最基化合物和2.4-二硝基苯脐的反应产物，在碱性溶液中形成褐红色或酒红色，在440nm下，测定吸光度，讨算碳基价。4.3.2试剂4.3.2.1 精制乙醇2取1000mL无水乙
8、醇，置于2000mL圆底烧瓶中，加入5g铝粉、10g氢氧化绑，接好标准磨口的回流冷凝管，水浴中加热回流1h.然后用全玻璃蒸馆装置，蒸馆收集偏液。4. 3. 2. 2 精制苯=取500mL苯，置于1000mL分液漏斗中，加入50mL硫酸，小心振摇5mn，开始振摇时注意放气.静置分层，弃除硫酸层，再加50mL硫酸重复处理一次，将苯层移入另一分液漏斗，用水洗涤三次，然后经无水硫酸销脱水，用全玻璃蒸馈装置蒸馆收集馆液.4. 3. 2. 3 2.4二硝基苯脐溶液z称取50mg 2.4二硝基苯脐，溶于100mL精制苯中。4. 3. 2. 4 :氯乙酸溶液z称取4.3g固体三氯乙酸，加100mL精制苯溶解.
9、4. 3. 2.5 氮氧化饵乙醇溶液z称取4g氢氧化饵，加100mL精制乙醇使其溶解，置冷暗处过夜，取上部澄清液使用。溶液变黄褐色则应重新配制.4. 3. 2.6 三苯麟溶液(0.5g!L)，称取100mg的三苯麟用苯溶解后转入200mL容量瓶中并定容至费j度。4.3.3 仪器分光光度计。4.3.4 分析步骤称取约O.0250. 10 g样品，置于25mL具塞试管中，加入5mL三苯鹏溶液(0.5g!L) (三苯鹏还原氧过氧化物为非毅基化合物)溶解样品，室温暗处放置30min，再加3mL三氯乙酸溶液及5mL2. 二硝基苯脐溶液，仔细振摇混匀，在60C水浴中加热30min，冷却后，指试管璧慢慢加入
10、10mL氢氧化御-乙醇榕液，使成为二液层，塞好，剧烈振摇混匀，放置10mino以1cm比色杯，用不含三苯鹏的试剂空白调节零点，含三苯麟还原剂的试剂空白吸收作校正于波长440nm处测吸光度.4. 3. 5 计算X. = A, -4-854 m2 v. 式中，X , 样品的量最基价.mmol!kg , A，一一测定时样液吸光度，m，一一样品质量.g I V，一一测定用样品液的体积，mLJ854一一各种酶的毫摩尔数的平均值。结果的表述z报告算术平均值的三位有效数。4.3.6 允许差相对相差运5%。4.4 游离棉盼(本法适用于棉籽泊)04.4.1 紫外分光光度法4.4.1. 原理X 1000 . (
11、4 ) 样品中游离棉盼经用丙嗣提取后，在378nm有最大吸收，其吸收值与棉酷量在一定范围内成正78 比，与标准系列比较定量。4. 4. ,. 2仪器。紫外分光光计。4.4.3试剂GB/T 5009. 37-1996 4.4. 3. 丙嗣(70%) :将350mL丙嗣加水稀释至500mL4. 4. 1. 3. 2 棉盼标准溶液准确称取O.1 g棉盼，置于100mL容量瓶中，加丙嗣(70%)溶解并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1mg棉盼。4. 4. 1. 3. 3 棉盼标准使用液g吸取棉盼标准溶液5.0mL.置于100mL容量瓶中，加丙嗣(70%)稀释至刻度。此溶液每毫升相当于50.0吨棉盼。4.
12、4. 1.4 分析步骤称取.00 g精制棉油或0.20g粗棉泊，置于100mL具塞锥形瓶中，加入20.0mL丙嗣(70%).并加入玻璃珠35粒，在电动振荡器上振荡30min，然后在冰箱中放置过夜。取此提取液之上清液，过滤。吸取O.O. 1. O. 2. O. 4. O. 8. 1. 6.2. 4 mL棉盼标准使用液(相当于0.5.10.20.40.80.120问棉盼) 分别置于10时，具寨试管中。各加入丙嗣(70%)至10mL.混匀，静置10min。取滤液及标准液于lcm石英比色杯中，以丙嗣(70%)调节零点于378nm波长处，测吸光度，绘制标准曲线比较。4.4.5 计算X但ma, = . :
13、 . . X 100 X 2 , m. X 1 000 X 1 000 式中:Xs一样品中游离棉盼的含量.g/100g，m , 测定用样液中游离棉酷的质量，闸叫一样品质量.g。结果的表述g报告算术平均值的三位有效数。4.4. 1.6 允许差相对相差豆豆10%。4.4.2 苯胶法4.4.2. , 原理样品中游离棉盼经提取后，在乙醇溶液中与苯胶形成黄色化合物，与标准系列比较定量。4.4 .2.2 试剂4.4.2.2. 丙酣(70%):量取70mL丙酬，加水至100mL. 4.4.2.2.2 乙醇(95%4.4. 2.2.3 苯胶应为无色或淡黄;若色深则重蒸馆。4.4.2.2.4 棉盼标准溶液g同4
14、.4. 1. 3. 2和4.4. 1. 3. 3。4.4. 2.3 分析步骤. ( 5 ) 称取约.00 g样品，置于150mL具塞锥形瓶中，加入20.0mL丙嗣(70%)，加入玻璃珠35粒，剧烈振摇1h.在冰箱中过夜，过滤，滤液备用。在两支25mL具塞比色管中，各加入2.0mL上述滤液。以甲管为样品管，乙管为对照管。另吸取0 , 0.10 , 0.20, 0.40 , 0. 80 ,. 00 mL棉盼标准使用液(相当0，5，10，20，40，50问棉盼)各两份，分别置于甲、乙两组25mL具塞比色管中，各管均加入丙酣(70%)至2mL，甲组标准管与样品管甲管各加入3 mL苯股，在80C水浴中加
15、热15min，取出冷至室温，各加入乙醇至25mL，乙组标准管与样品管乙管各加乙醇至25mL。两组溶液在加乙醇后均放置15min，以甲组标准的零管为试剂空白，以乙组的零管为溶剂空白，用lcm比色杯，以各组标准零管调节零点，在波长445nm处，捆!定两组的吸光度，以两组付町的吸光度之差，以及相应标准浓度绘制标准曲线，以样品管甲管与乙管的吸光度之差从标准曲线查79 出棉E结合盐。4.4.2.4 计算X6= GB/T 5009.37-1996 rn5一一一一一X 100 m , X 2/20 X 1 000 X 1 000 式中，X。样品叶游离棉盼的含量.g/100g，附5测定肘样液中游离棉盼的质量，
16、g，叫-一样品质量.g结果的表述.同4.4. 1. 5 4.4.2.5 允许差同1.4.1.6。4. 5碑按GB/T5009. 11操作。4.6 黄曲霉毒素B，按心B/T5009.22操作。4. 7 苯并(aHE按GB/T5009.27操作。4.8 残留溶剂4. 8. 1 原理 ( 6 ) 将植物汹样品放入密封的平衡瓶中.在一定温度下，使残留溶剂气化达到j平衡时，取液上气体注入气相色谱中测定，与标准曲线比较定量。4.8.2 试剂4.8.2.1 N-N二甲基乙酿胶(简称DMA)，吸取1mL放入100150 mL顶空瓶中，在50C放匠。5h.取液上气0.1mL注入气相色谱仪在0.4min内无干扰即
17、可使用e如有干扰可用超声波处理30 mn或通入氮气用曝气法蒸去干扰。4.8.2.2 六号溶剂标准溶液:称取洗净干燥的具塞2025mL气化瓶的质量为A.瓶中放入比气化瓶体积少1mL的DMA密塞后称量为B.用1mL的注射器取约0.5mL六号溶剂标准通过塞注入瓶中(不要与溶液接触).混匀，准确称最为C。用下式计算六号溶剂汹的浓度zx mE-me 7=d 1000 (m, - m ,) /0. 935 式中zX7一一六号溶剂的浓度.mg/mL。川7一一瓶和塞的质量，g; 叫一-一瓶、塞和DMA的质量，g;刑5B加六号溶剂的质量，g;0.935 DMA在20C时密度，g/mL。4.8.3 仪器4. 8.
18、 3. , 气化瓶(顶空瓶)，体积为100150mL.具塞。气密性试验g把1mL己烧放入瓶中，密塞后放入60C热水中30min，密封处无气泡外漏。4.8.3.2 气相色谱仪，(带氢火焰离子化检测器)。4.8.4 分析步骤4.8.4. , 气相色谱参考条件. ( 7 ) 4.8.4.1.1 色谱性:不锈钢柱，内径3rnm，长3m，内装涂有5%DEGS的白色担体I02(6080日)。4.8.4.2 检测器氢火焰离子化检测器。4.8.4.3 柱温，60C。80 4.8.4. 1.4 汽化室温度140C , 4.8.4. 1.5 载气(N2):30 mL/min。4.8.4.1.6 氢气:50mL/m
19、in , 4.8.4.1.7 空气:500 mL/min , G/T 5009.37-1996 4.8.4.2 测定称取25.00g的食用油样，密塞后于50C恒温箱中加热30miD，取出后立即用微量注射器或注射器吸取O.1O0. 15 mL液上气体与标准曲线进样体积一致)注入气相色谱，记录单组分或多组分(用归一化法)测量峰高或峰面积，与标准曲线比较，求出液上气体六号溶剂的含量。i z 3 4 图l气化装置1 铝盏，2 橡胶塞，3输液瓶，4样晶4.8.4.3 标准曲线的绘制取预先在气相色谱仪上测试管六号溶剂量较低的油为曲线制备的体底汹(或经70C开放式赶掉大部分残留溶剂的食用汹或压榨汹)，分别称
20、取25.00 g放入6只气化瓶中，密塞。通过塞子注入六号溶剂标准液(4.8.2.2川、20、40、60、80、100L(含量分别为0，0.02XX7. 0.10XX7g)。放入50C烘箱中，平衡30min，分别取液上气体注入色谱，各响应值扣除空白值后，绘制标准曲线(多个色谱峰用归一化法汁算)。4. 8. 5 计算式中:几一一油样中六号溶剂的含量，mg/kg，Xg=空E m，-一测定气化瓶中六号溶剂的质量，g，m，一一样品质量，g。结果的表述:报告算术平均值的三位有效数。4.8.6 允许差相对相差15%。4. 9镣(适用于人造奶油)4. 9. 1 原理. ( 8 ) 样品中的镰用稀酸提取后，在强
21、碱性溶液中以过硫酸钱为氧化剂，镰与丁二翻腾形成红褐色络合物，与标准系列比较定量。4. 9. 2 试剂4.9.2.1 盐酸。+23):量取4mL盐酸加水稀释至96mL。4.9.2.2 石油酷z沸程3060C。4.9.2.3 拧橡酸纳溶液(100g/U。4.9.2.4 盼红指示液(1g/U:称取0.1g盼红用乙醇(20%)溶解后稀释至100mL, 81 GB/T 5009. 37-1996 4. 9. 2. 5 氨水。4.9.2.6 丁二酬炳(C.H，Nz2)乙醇浴液(10g/Ll。4.9. 2.7 三氯甲烧。4.9.2.8 氨水(+10)。4. 9. 2. 9 酒石酸梆纳溶液(500g/Ll 4
22、. 9. 2. 10 氢氧化锅溶液000g/Ll。4.9.2.11 过硫酸镀溶液(60日/Ll，临用现配。4.9.2.12 镣标准溶液:准确称取0.1000g镰粉或0.4954g硝酸镇CNi(NO，)2 6H20J溶于少量盐酸0+23)，移入1000mL容量瓶中，并用盐酸(+23)稀释至刻度。此溶液每毫升相当于100.0吨镇。4. 9. 2. 13 锦标准使用液z吸取1.0 mL锦标准溶液景于100mL容量瓶中，以盐酸(1十23)稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0吨镰。4.9.3 仪器所有玻璃仪器先用硝酸(1十1)浸泡4h，再以水冲洗干净。4.9. 3. 1 电动振荡器。4.9. 3. 2
23、分光光度计。4.9.4 分析步骤4.9.4.1 样品处理称取50.00 g经水浴上加热融化的样品，置于125mL具塞锥形瓶中，加30mL盐酸(+23)，贵80C水浴中，加热10min，趁热置振荡器上振荡30min，再置水浴中待油层与水层分离后，倒入125mL 分液漏斗中，静置分层后，水层放入第二只分液漏斗中，泊层再倒回原锥形瓶中，再加10mL盐酸(1+23)，霞80C水浴中，加热5min，再振荡10min，再置水浴中分层后，仍倒入第一只分液漏斗中，水层并入第三只分液漏斗中，弃去泊层。4.9.4.2 去脂第二分液漏斗中样品提取液冷却后，加15mL石油隧，振荡1min，分层后弃去石油酿。4.9.4
24、.3 提纯于提取液中加3滴盼红指示液，5mL拧糠酸制溶液(OOg/Ll，滴加氨水，使溶液由红变黄再变红后.再滴加24滴，使溶液pH为8.510，再加2mL丁二嗣后乙醇溶液(10g/L)，振摇1min后，用兰氯甲烧提取3次，每次5mL，振摇2min，合并兰氯甲:烧，置于50mL分液漏斗中，加10mLl10氨水振摇1min，静置分层后弃去氨水，将三氯甲烧分入另一分液漏斗中，用盐酸。+23)提取2次，每次2.5 mL，振摇2min，使兰氯甲镜中的镰转九酸液中，弃去三氯甲饶，收集酸液于10mL具塞比色管中。4.9. 4,4 测定吸取0，0.5.1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL镰标准使用液相当
25、0，O. 5 , 1 , 2 , 3，4，5月镇)，分别肯于10 mL具塞比色管中，分别加盐酸。十23)至5mLo 于样品及标准管中分别依次加入0.5mL酒石酸僻纳溶液(500g/L) , 1. 5 mL氢氧化纳溶液(OO g/Ll, 0.5 mL过硫酸镀溶液(60g/Ll, 1m匀，放置3min。再各加入0.2mL丁二嗣后乙醇溶液(O日/Ll，加水至10mL，混匀。放置15min后，用3cm比色杯，以水调节零点，于波长470nm处测吸光度.绘制标准曲线比较。4. 9. 4. 5 计算式中:X g 样品中镰的含量，mg/kg;刑测定用样品镇的质量，何;m 样品质量，g。82 Xo 生L三土旦9
26、 ml1 X 1 000 . ( 9 ) GB/T 5009. 37一1996结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。4.9.4.6 允许差相对相差;10%。4.10 泊中非食用油的鉴别对常见的三类非食用泊进行定性鉴别-4. 10. 1 桐汹4.10.1.1 三氯化锦兰氯甲烧界面法g取油样1mL移入试管中.沿试管壁加1mL三氯化锦一三氯甲烧溶液(10g/L)，使试管内溶液分成两层，然后在水浴中加热约10min如有榈汹存在，贝tl溶液两层分界面上出现紫红色至深咖啡色环。4. 10. 1. 2 亚硝酸法:适用于豆泊、棉油等深色泊中桐泊的检出，但不适用于梓泊或芝麻油中桐泊的检出。取样品510滴于试管
27、中，加2mL石油酶，使油溶解，有沉淀物时，过滤一次，然后加入结晶亚硝酸饷少许，并加入1时，硫酸(1+1)摇匀，静置，如有桐油存在，泊液混浊，并有絮状沉淀物，开始呈白色，放最后变黄色。4.10.1.3 硫酸法z取样品数滴，置臼瓷板之上，加硫酸12滴，如有桐泊存在，则出现深红色并且凝成固体，颜色渐加深，最后成炭黑色。4.10.2 矿物油取1mL样品，置于锥形瓶中，加入1mL氢氧化饵溶液(600g/L)及25mL乙醇，接空气冷凝管回流皂化约5min，皂化时应振摇使加热均匀.皂化后加25mL沸水，摇匀，如浑浊或有泊状物析出，表示有不能皂化的矿物油存在。4.10.3 大麻油取样品和对照大麻油各10L，点
28、祥于硅胶G薄层板，此薄层板厚O.250. 3mm，105C下活化半小时。泊太粘稠则用5倍苯稀释，再进行点样，点样量稍多一点约10-20L.展开剂用苯，显色剂为牢固蓝盐B溶液(1.5 g/L)(I脑用配制).当斑点和对照颜色及比移值相当时表示有大麻油.胡麻油、芝麻油和牢固蓝盐B也呈红色，但在薄层板上比移值枝小.4.11 黄曲霉毒素按GB/T5009. 22操作。附加说明2本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由上海市卫生防疫站、天津市卫生防疫站、安徽省卫生防疫站、陕西省卫生防疫站、辽宁省卫生防疫站、湖南省卫生防疫站、卫生部食品卫生监督检验所负责起草.本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品E生监督检验所负责解释.83
