1、E 核固和共民人华中EJ/T 954-95 展岛素放射免疫分析试剂盒06054000154 1995-07-05发布1995-11-01实施中国核工业总公司发布中华人民共和国核行业标准腕岛素放射免疫分析试剂盒1 主题内窑与适用范围本标准规定了膜岛素放射免疫分析试剂盒的技术条件及检验方法等。EJ/T 954-95 本标准适用于双抗体聚乙二醇法的膜岛素放射免疫分析试剂盒，也适用于其它免疫沉淀剂为分离剂的腕岛素放射免疫分析试剂盒。2 51用标准GB 11806 放射性物质安全运输规定EJ/T 804 放射性同位素产品代号3 产品代号及试剂盒的组成3. I 产品代号根据EJ/T804规定，编写产品代号
2、。膜岛素放射免疫分析试剂盒的代号为：RIAI 125 5 02 X 3.2 试剂盒的组成及主要试剂特性3. 2.1 试剂盒的主要组成如下a. 12s1膜岛素Fb. 膜岛素标准品pc. 抗膜岛素抗体Fd. 温育液；e. 第二抗体Ff. 聚乙二醇CPEG）。3.2.2 主要试剂特性如下za. 标记抗原比活度：22.4 44. 4GBq mol-1(100 200)Gi 闯一1)放射化学纯度z不小于90%0b. 膜岛素标准品应用国家标准品标定，标准品的标定值与国家标准品的标示值偏差不超过土10%0c. 抗膜岛素抗体亲和常数：K注11010L mol-1 交叉反应与人和猪膜岛素交叉反应为100%，与膜
3、高血糖素交叉反应小于0.1%。中国核工业总公司1995-07-05批准1995-11-01实施1 4技术指标4.1 灵敏度EJ/T 954-95 最小检出值不大于2.5mlU L -i. 4.2 非特异结合率（NSB)应不大于5%。4. 3最大结合率侣。应在40%70%之间。4.4精密度用变异系数（CV）表示。批内CV不大于10%(n二月0),批间F不大于13%(n注10）。4.5准确度在一次测定中，低、中、高三个剂量的质量控制血清测定值，均应在允许范围（主士ZSD）内。4.6 回收率（R)应在90%110%之间。4.7 相关系数r和有效剂量值ED剂量响应曲线的相关系数r的绝对值应不小于0.9
4、9。有效剂量ED25、ED50、ED75值即结合率分别为25%、50%、75%时的对应值应在测定范围内，其变化均应在Y士ZSD范围内。4.8测定范围推荐在2.5 160mlU L l之间。4.9 有效期在28条件下贮存，从生产日期计算有效期为五周。5检验方法按附录A（补充件实验程序操作，也可用其它等效方法5. 1 灵敏度的测定按附录A实验程序操作。求出零管结合率侣。的标准差SD(n10），以零管结合率的均值减去ZSD所得结合率的相应剂量值，即为试剂盒的灵敏度。5.2 NSB的测定取两支放免试管，分别加入与待测样品和抗膜岛素抗体相同体积的温育液及1251膜岛素，然后按附录A实验程序操作。NSB按
5、公式(1）计算。NSB= (C.-Cb)/(C,-Cb)100% . . (1) 式中：C.一一非特异管计数率，计数minJCb仪器本底计数率，计数mini2 EJ/T 954-95 c，总放射性管计数率，计数mino5.3 B。的测定按附录A实验程序操作，B.按公式（2）计算B。（C。一C.)/(C,-Cb）100%. (2) 式中：C。一一零标准管计数事，计数min05.4精密度的测定精密度用样品测定值的变异系数表示。按附录A实验程序操作，CV按公式（3）计算。CV=(SD芳100%. (3) 式中：SD-n次测定膜岛素值的标准差z万一n(n关10）次测定膜岛素的均值s.s准确度的测定按附
6、录A实验程序操作，用低、中、高三个剂量的质量控制血清测定值计算SD。5.6 R的测定在已知膜岛素含量的血样中加入一定量的膜岛素，然后测定血样中总膜岛素含量。按附录A实验程序操作，R按公式（4）计算。R = (D.-Dk)/D.)100% . (4) 式中：D.一血样中测得的总膜岛素值，mIU L 1; Dk一血样中已知的膜岛素值，mIU L一l;D，一一血样中加入的膜岛素值，mIU L 1。5.7 剂量响应曲线的绘制及r和ED值的计算5. 7.1 曲线的绘制按附录A实验程序操作。各标准剂量点的放射性结合物率B（习惯用BIB。表示按公式（5）计算。B（C.-C.)/(C。一C.）100%. (5
7、) 式中：C.一一各标准剂量点结合物（B）的放射性计数率，计数min。以各标准剂量点的B为纵坐标，以各相应的标准剂量点的浓度为横坐标，绘制剂量响应曲线，并求出r和ED值。6检验规则产品的质量检验分为型式检验和出厂检验两项。6.1 型式检验产品投产前及投产后工艺流程改变、原料变更，均须按第4章技术要求中规定的内容检验。6.2 出厂检验6. 2.1全检项目试剂盒组分、包装及标志等。6. 2. 2抽检项目3 EJ/T 954-95 NSB、B。、剂量响应曲线及质量控制血清测定值。6. 2. 3 抽检方式及结果判断抽捡采取随机取样方式。100盒以下抽取1盒、101300盒抽取2盒、301500盒抽取3
8、盒、501盒以上抽取4盒。如果检验结果有一项不符合本标准的要求时，应重新以两倍的数量随机取样进行复检。复栓的结果，有一项指标不符合本标准所规定的要求，本批试剂盒判为不合格。6.2.4检验证书产品应有检验合格证书，见附录B（参考件。7 标志、包疆、贮存和运输7. 1 标志包括试剂盒封面标志、放射性试剂标志、试剂标志。7.1.1 试剂盒封面标志内容包括2a. 生产厂家pb. 产品名称pc. 注册商标pd. 产品代号Fe. 产品批号；f. 批准文号Fg. 注意事项；b. 有效期。7.1. 2放射性试剂瓶标志内容包括2a. 名称sb. 批号fc. 放射性活度gd. 测量日期Fe. 放射性标志。7. 1
9、. 3 试剂瓶标志内容包括za. 名称gb. 批号sc. 浓度$d. 储存条件Fe. 有效期。7.2包装和运输1.2.1 包装4 包装必须保证运输及防护安全，应符合GB11806豁免运输包装规定。包装盒内必须附有产品使用说明书。说明书内容包括2a. 生产厂家Fb. 产品名称Fc. 产品代号Fd. 批准文号；e. 产品批号sr. 适用范围pg. 方法原理Fb. 试剂盒的组成及其配制pi. 操作程序；j. 结果计算pk. 技术指标zI. 注意事项sm. 有效期zn. 参考文献。7. 2. 2 运输运输应符合GB11806的规定。7.3 贮存试剂盒应贮存于28。EJ/T 954-95 5 Al 方法
10、提要EJ/T 954-95 附录A鹏岛素放射兔瘦分析方法（补充件膜岛素是分子量约为6000D的多肤激素。膜岛素的放射免疫分析的基本原理是将I吁，膜岛素、膜岛素（标准品或待测样品和有限量抗膜岛素抗体在适宜条件下进行竞争性结合反应。一部分1251膜岛素与抗体结合，另一部分则呈游离状态。膜岛素含量高，则游离的125J膜岛素量就多F反之，膜岛素含量低，游离的1251膜岛素量就少。用二抗和聚乙二醇作分离剂，将抗原抗体复合物沉淀下来，测定其放射性计数率，用不同浓度的膜岛素作标准品，获得有函数关系的剂量响应曲线。从剂量响应曲线上查出待测样品中膜岛素的含量。A2 仪器及设备r计数器、微量加样器、放免试管、负压
11、泵、离心机、恒温水浴锅和一般生物化学实验室仪器设备。A3 实验程序a. 按说明书要求配制有关试剂。b. 试管编号。1,2为总放射性管（T）管；3,4为非特异（NSB）管；5,6为零标准管；718为标准管F标准管编号以后为质量控制血清及样品管。c. 操作顺序，按表Al实验顺序进行操作，逐步加入相应的试剂。溶液量以L表示。表Al膜岛素测定操作顺序表L 试管编号操作顺序T(l ,2) NSB (3,4) 零标准（5，的标准（718)样品温育液400 300 200 200 腆岛素标准溶液100 待测样品100 山I腆岛素溶液100 100 100 100 100 抗膜岛素抗体溶液100 100 10
12、0 摇匀，28温育过夜（2024h)第二抗体溶液100 100 100 100 播匀，37温育lhPEG榕液100 100 100 100 6 EJ/T 954-95 上述操作完毕后，混匀，离心（3500r/min)20min.吸出上清液（T管除外。测量T管和各管结合物的放射性计数率。A4 结果计算各管结合物的放射性计数率减去NSB的放射性计数率，标准管按公式（5）计算，样品管计算见下式。B（C0-Cn)/(C。C）100% (Al) 式中：Co一一待测样品管结合物的放射性计数率，计数min.以各标准管的B为纵坐标，膜岛素标准剂量点的浓度为横坐标，绘制剂量响应曲线。根据待测样品的B，在剂量响应
13、曲线上查得样品膜岛素含量（见图Al)。B 100 60卡40卡,J 5 图Al10 2 40 8(1 膜岛素标准品）：（.度膜岛素剂量响应曲线1 (l (I mil; L 7 产品名称放化纯度标记物% 标准晶批号抗血清批号检验NSB B 指标结论EJ/T 954-95 附录B放射免疫分析试剂盒检验合格证书（参考件放射免疫分析试剂盒检验合格证书批号生产人员比活度每瓶放射性活度kBq mol 1 kBq 质量控制血清批号y ED25 ED50 ED75 剂量低值中值范围实测高值检验复核检验单位印章年月日8 附加说明本标准由全国核能标准化技术委员会放射性同位素分技术委员会提出。本标准由中国原子能科学研究院同位素所负责起草。本标准主要起草人z王衍真。法a品mH同国
