1、ICS 65.120 B 20 中华人民共和国国家标准GB/T 18969-2003 饲料中有机磷农药残留量的测定气相色谱法Determination of residues of organaphosphorus in feeds一一一一-Gasc巾hr啊nata吨graphicmethod 。SO14182: 1999 Animal feeding stuffs-Determination of residues of organophosphorus pesticides Gas chrom在tagraphicmethod,MOD) 2002-02-21发布2003-09-01实施中华人
2、民共和国发布国家质量监督检验检瘦总局GB/T 18969-2003 前言本标准修改采用了ISO14182，1999(饲料中有机磷农药残留量的测定气相色谱法以英文版。本标准根据ISO14182，1999重新起草。考虑到我国国情，本标准与ISO14182: 1999主要差异如下z根据汉语的习惯对ISO14182: 1999的语气、语态、标点符号进行编辑性修改，以便我国使用。ISO 14182，1999的条款1和4.11中提到的16种农药，因农药标准品不易获得，只对其中的五种，即谷硫磷、乐果、乙硫磷、马拉硫磷、甲基对硫磷进行了验证，经验证，本标准也适用于饲料中伏杀磷和蝇毒磷残留量的检测，另外马拉硫磷
3、的检测限也有差异.ISO14182: 1999为0.01 mg/kg而验证结果为0.05mg/烛。ISO 14182，1999中的条款4的警告z一些有机溶剂可能致癌改为可能影响健康。一-ISO14182:1999的条款11、1因删除了附录B而无保留必要，增加了允许差，使结果表示更直观和方便。用GB/T14699. 1饲料采样方法代替了ISO6419和ISO6498;用GB/T6682代替了ISO 3696 0 一一删除了附录B和参考文献以免标准过于冗长。有关技术性差异己编入正文中，并在它们所涉及条款的页边空白处用垂直单线标识。本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出
4、。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人高生、赵根龙、饶正华、范理、李丽蓓、赵浮京、杨曙明、苏晓鸥。GB/T 18969-2003 饲料中有机磷农药残留量的测定气相色谱法1 范固本标准规定了利用气相色谱检测动物饲料中有机磷农药残留量的方法。本标准适用于饲料中有机磷农药残留量的检测。用于检测配合饲料、预混合饲料及饲料原料中谷硫磷、乐果、乙硫磷、马拉硫磷、甲基对硫磷、伏杀磷、蝇毒磷等农药中一种或几种的残留量，各农药的检测限依次为0.01mg/kg、0.01mg/kg，O.Olmg/kg、0.05mg/kg、0.01mg/kg、0
5、.01mg/kg、0.02mg/kg。注E本方法可能等同应用于虫蟠畏和杀蟆松等其他有机磷农药，但未做验证。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误内容)或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可以使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 6682 分析实验用水规格和试验方法(neq150 3696) GB/T 14699. 1 饲料采样方法(neq150 6419、neq150 6498) 3 原理以丙嗣提取有机磷农药，滤液用水和饱和氯化销(NaC
6、)溶液稀释。经二氯甲烧萃取，浓缩后用10%水脱活硅胶层析柱净化。然后用磷选择性检测器进行气谱检测。4 试剂与材料仅用分析纯和适合做残留分析纯度的试剂。通过在相同条件下做空白试验来检查试剂纯度。色谱图上应没有任何杂质峰干扰。警告g一些有机溶剂可能影响健康，应小心使用。4.1 水2符合G13/T6682二级用水的规定。4.2 正己烧。4.3 丙酬。4.4 二氯甲烧。4.5 乙酸乙醋。4.6 硅胶，用10%水(质量百分数)脱活。130 c活化粒度为63m200m的硅胶60过夜，在干燥器中冷却至室温后，将硅胶倒入密封的玻璃容器中。加足够蒸馆水使质量百分浓度为10%。用机械或手用力摇动30s，静止30m
7、in，其间应不时摇动。30min后硅胶即可用。此硅胶6h之内必须使用。4.7 洗脱溶剂z混合二氯甲烧(4.4)与正己统(4.2)0+1)。4.8 惰性气体，如氮气。4.9 元水硫酸销。4.10 饱和氯化饷(NaCl)溶液。4.11 农药标准品，如下=GB/T 18969-2003 谷硫磷:0.。二甲基-s(4-氧代1，2.3苯并三氮苯3甲基)工硫代磷酸酶;一一乐果:0.0-=甲基S-(N甲基胶基甲就甲基)二硫代磷酸醋p一一乙硫磷z双0.0-二乙基二硫代磷酸醋)甲烧;一一马拉硫磷:0.0-二甲基S-1，2双乙氧碳基)乙基二硫代磷酸醋g一一甲基对硫磷:0.。二甲基。(对硝基苯基)硫逐磷酸醋;一一伏
8、杀磷:0.。二乙基S-(6氯2氧苯并唔略琳3基)甲基二硫代磷酸醋g一一-蝇毒磷:0，0-二乙基。(3氯4甲基2氧代2H-l-苯并毗喃7基)硫逐磷酸醋。4.12 内标=三丁基磷酸醋。4.13 农药标准溶液4.13.1 贮备液z浓度为1000g/mLo按如下方法，每种农药标准做一个贮备液，作为农药标准品(4.11)和内标(4.12)。称一定量的农药(精确到0.1mg).使得标准品和内标物浓度为1000吨/mLo称量时注意各标准品的纯度。将称量物转移到100mL容量瓶中，溶解于乙酸乙醋(4.5)中，并用乙酸乙酣定容至刻度。黑暗处4:可保存6个月。4.13.2 中间溶液g浓度为10g/mL.分别用移液
9、管取1mL贮备液(4.13.门，加入到100mL容量瓶中，用乙酸乙酶(4.5)稀释到刻度。这些溶液可在40C、黑暗处保存1个月。注z农药标准品保存适当时是稳定的，研究表明，所有的纯农药标准品，在18c时可稳定15年。农药的甲苯贮备液(mg/kg)至少可稳定3年。以下推荐的方法可以保存更长时间g转移部分标准品溶液到带有螺旋口的珑泊色小瓶中，称重，然后贮存在200C。需要时，将小瓶从冷藏室中取出，放置到室温，称重。如果净重的累积损失量(由于蒸发)比冷冻前达10%或更多，则不可使用。按此方法，可使用时间超过1个月中间溶液(通常用25时，瓶装).用后称重，重新冷冻。4.13.3 工作液z浓度为0.5g
10、/mL。用移液管吸取5时，中间溶液(4.13.2)加入到100时，容量瓶中，用乙酸乙醋(4.5)定容。在40C、黑暗条件下，此溶液可稳定保存1个月(4.13.3)。4.14 空白试样:与被测样品同类但不含检测物质的样品(4.14)。5 仪器使用前，用清洗剂彻底清洗所有玻璃仪器，以免杂质干扰。冲洗过程为先用水，后用丙酣，最后干燥。忌用塑料容器，勿用汹脂润滑活塞，否则杂质会混入溶剂中。5.1 分液漏斗:500时，和1000mL容量，配聚四氟乙烯旋塞和盖子。5.2 吸滤瓶:500mL容量。5.3 布式漏斗z瓷性滤芯，内径为90mm。5.4 刻度管:10mL容量，配聚四氟乙烯塞子。5.5 玻璃层析柱.
11、长约300mm.内径为8mm,., 10 mm，内装孔径为40m100m玻璃滤片或玻璃毛。5.6 旋转蒸发器配备100时，和500mL的困底烧瓶，水浴温度为40:。5.7 振荡器或高速均浆饥。5.8 气相色谱系统。5.8.1 组成a) 不分流或柱头进样系统，b) 色谱柱gc) 磷选择检测器;GB/T 18969-2003 d) 静电计;e) 毫伏记录器和积分器g。数据处理软件和计算机系统。进样口、柱箱和检测器应分别有独立加热装置。控温精度为0.1c的气谱系统，可根据仪器使用特性调整参数，使之最优化。5.8.2 条件z根据仪器使用说明，进样口和检测器温度分别为220C 240 C和180C380
12、 c。有机磷的分离用色谱柱及温度程序采用推荐条件。5.8.3 进样设备z自动进样器或其他适当的进样装置。于动进样，可用lL5L的微量进样器，针长适用于进样(不分流或柱头)。在将溶液注入气相色谱仪前，先用纯溶剂洗进样器10次，然后用待测试液洗5次。进样后，用纯溶剂洗5次。5.8.4 柱z毛细管柱应涂上元极性到中等极性范围的固定相，推荐使用如SE-30，SE-54 , V-17或其他等效固定相。填充色谱柱，长2m-4 m，内径2nun4 nun，内装10%配200，涂于ChromosorbWHP，粒度为O. 15 nunO. 18 mm，或2%QF-1和1.5%配2的混合固定相，涂于Chromos
13、orbWHP，粒度为O. 125 nun 1. 15 nun，也可用有机磷农药分析时推荐使用的其他固定相替代。色谱柱温度程序在附录A中有详细说明，以使农药的混合组分分离。新的柱子安装后，应在略高于最高操作温度老化至少48h。5.8.5 检测器=使用磷选择检测器(FPD或NPDP型)，各有机磷农药的最小检测限在50pg. 5.8.6 载气纯氮、纯氮或纯氢气。0.5 nm的分子筛安装在载气气路上，使用前在350c活化4h8 h. 每当装配新气瓶或必要时，应重新活化分子筛。5.8.7 补充气用氢气或空气。5.8.8 系统的线性确证2用O.1 ng2 ng的对硫磷检查系统线性。准备0.05g/mL1.
14、0问/mL的对硫磷工作液，进样最为2L.以峰值(面积或峰高)对对硫磷质量(ng)作图，图形应是一条通过原点的直线。如果不呈线性，应确定检测器响应为线性的浓度范围。6 取样采样按GB/T14699 1. 10 对实验室而言样品应具有真正的代表性，并且在运输和贮存过程中没有损坏或改变。7 试样制备依照GB/T14699 1. 1将采集的样品缩分成实验室样品。实验室样品为干燥或低湿度的产品，如谷类及其产物、棉籽、棉籽柏、配合饲料、干草等。将样品混合均匀后，进行研磨，使之能完全通过1rnrn孔径的筛子，彻底混合。将高湿度的样品如青草、青贮饲料等切成小块，彻底混合以获得均质样品，贮于冰箱内，冷冻保存。8
15、 步骤8.1 概述分析时应做空白，以作参比校lE之用。试样和相同基质的空白试样均按分析步骤进行。8.2 试样干燥或低湿度的试样，称取50g，高湿度的样品.称取100gC精确到0.1g).放入1000mL锥形瓶中。GB/T 18969-2003 8.3 提取加水使试样总含水量约100g.浸泡5min左右。加200mL丙酬。塞紧瓶塞，在摇床上振荡提取2 h或在均浆机上匀浆2minc 用真空泵抽滤，在布式漏斗(5.3)中用中性滤纸，滤液接入500mL的吸滤瓶(5.2)中。分两次加入25 mL丙嗣清洗容器和滤纸上的残渣，滤液收集到同一个滤瓶中。将滤液转入1000mL分液漏斗中。滤瓶用100mL二氯甲烧
16、清洗，清洗液也倒入分液漏斗中，加水250 mL和50mL饱和氯化纳溶液振摇2min。使相分离，放出下层(二氯甲炕)到500mL分液漏斗中，再用50mL二氯甲烧萃取两次，合并二氯甲烧到同一分液漏斗中。用100mL水清洗二氯甲炕提取物两次，弃去水相。将20g元水硫酸锅(4.9)加J滤纸上，真空过滤二氯甲炕提取物，滤液接入500时，烧瓶中。用10时，二氯甲炕冲洗分液漏斗和硫酸销两次。减压浓缩至2mL左右。温度不超过40c。用1mL2 mL的正己烧将浓缩物转移到10mL J 度管中，在氮气下浓缩至1mL。不要让溶液干了，否则农药会由于挥发或溶解度差而损失。8.4 桂净化8.4.1 柱的制备加5g质量分
17、数为10%的水脱活硅胶到玻璃层析柱内(5.5)。在硅胶顶部，加5g无水硫酸销(4.9)。再用20mL正己炕预洗柱子。注g硅石或弗罗里硅土(PMillipore-SEP PAK)也可代替硅胶，但需检验柱效及干扰情况-8.4.2 净化用1mL2 mL正己统(4.2)将浓缩的提取物(8.3)定量转移到层析柱顶部。用50mL洗脱液(4.7)洗出有机磷农药，收集洗脱液到100mL的真空蒸发器的烧瓶中。按8.3浓缩洗脱液，用乙酸乙黯定容到10mLo 当使用内标法时，在加乙酸乙黯定容到10mL之前，加0.5mL磷酸三丁酶内标中间液.用空白试液(8.)做参比标准溶液。8.5 气相色谱仪在推荐使用条件下，待气相
18、色谱仪(5.8)稳定。先注射1L2L标准工作液(4.13.3).再注射等量的样品净化液(8.4.2)必要时需稀释。根据保留时间，确定各种农药的峰。通过标准工作液中各已知浓度农药的峰值进行比较，确定试样溶液中各农药的浓度。如果结果相当或大于最高残留限量(MRLs).将适量标准中间液(4.13.2)加到空白试液中，以保证参比液的峰值在试样液峰值的25%以内。用乙酸乙酶(4.5)稀释J10 mL.进样量与试液进样量相同。通过比较试样与相应的已知农药浓度的参比试液(8.4.2)的峰值来确定农药的浓度。9 结果9.1 计算根据式(1)计算试样中各农药的残留量=AXm, xV w=(。A , XmXV,
19、式中:W 试样中各种农药的残留量，单位为毫克每千克(mg/kg); A一一试样(8.4.2)峰值eA，工作液(4.13.3)或参比试液(8.4.2)中对应农药的峰值，m , 标准品的进样质量，单位为纳克(ng);V 稀释后试样总体积，单位为恋升(mL);V，一一试样进辛辛堡，单位为徽升L);陆一一试牵羊必质量，单位为克(g队2黯收率GB/T 18969-2003 根据0.1mg!kg水平添加空白样品(4.14)中傲的回收率试验，确证方法的可行性。每种农药的阴收率应在70%110%之间。农药残留超过最高允许残留限量时，阁收水平应与试样栩近。1吕定性确证当结果稳当军宜太子最允许残留段最(M汉Ls)
20、尉，需要进行主运俊确证，可使用另一个极俊不同的色谱柱进行确证，也可以fllGC-MS进行确证。11 精密度11.1 允许是大于0.1mg!kg时两次乎行测定的相对偏差不大于10%。小子0.1自g/kga才两次平行吉普定前车曾对偏差不大于20%。11. 2 重复性在同一实验寞，由向一操作者使用相同的设备，按相同的测试方法，并在短时间内，对同一被测对象，相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值，超过重复性限r值的情况不大于5%。11.3 再现性在不同的实验寞，由不同的操作者使用不同的设备，按相肉的测试方法，对同一被测对象相互独立始进行测试获得湾次独立刻测试结果的绝对美篷，超过再现位提itR
21、的情况不大于5%，12 检验报告检验报告应详细说明E完整的样品鉴定所需的全部详细内容，如果知激，应写出采祥方法p一一使用的检验方法g德哥哥标准中统定的条件或可选择龄条件，以及所有可能影响结果的环境条伶步一一获得的结巢g如果做了重复性检验，报告中应含有获得的两次结果。GB/T 18969-2003 附录A(资料性附录)用气相色谱法测定有机磷农药的操作条件实例示例1，柱=石英玻璃毛细管OV-1，长25m，内径。.25mm，膜厚0.25m。柱温初温60C保持2min，以20C/min升温至130C，然后再以6C/min升至240C，保持5 min。进样器:250C，不分流延迟45s，或柱头进样。检测
22、器:选择N、F检测器P型，280C，或质谱检测器。示例2:柱=石英玻璃毛细管SE-54，长25m，内径。.25mm.膜厚0.25m，柱温初温60C保持0.5min，以30C/min升温至130C，然后再以8C/min升至240C，保持2mino 进样器:250C，不分流延迟45s.或柱头进样。检测器选择N、P检测器P型.280C，或质谱检测器。示例3:柱z石英玻璃毛细管OV-17，长30m，内径。.25mm，膜厚0.25m，柱温初温60c保持0.5min，以30C/min升温至160C，然后再以6C/min升至240C，保持4min。进样器:250C.不分流延迟455，或柱头进样。检测器z选择N、P检测器P型，285C，或质谱检测器。
