1、河南省地方标准DB41DB41/T 769 2012红掌组培苗繁育技术2012-12-18 发布 2013-02-18 实施河南省质量技术监督局发布DB41/T 769-20121前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由河南省花卉协会提出并归口。本标准起草单位：济源市农业科学研究所。本标准主要起草人：王梅、陈丽、刘星明、李铭、尹国红、牛立平、郝浩浩。本标准参加起草人：成东梅、张庆社、牛小沛、李冰、汤曙光、田瑞昌、原维梓。DB41/T 769-20121红掌组培苗繁育技术1范围本标准规定了红掌组培苗的培养基准备、外植体选择、接种与培养、炼苗、移栽及成苗标准内容。本标准适用
2、于河南省境内红掌组培苗繁育技术。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4285 农药安全使用标准GB 17323-1998 瓶装饮用纯净水中华人民共和国农业部公告 第 199 号（2002 ）3 培养基准备3.1 培养容器准备3.1.1 培养容器的清洗3.1.1.1 新的培养容器直接放入洗洁精或洗衣粉溶液中浸泡；用过且无污染培养容器先倒掉容器中的残留物再浸泡；污染的培养容器先按照4.3的要求灭菌后倒掉污染物再浸泡；浸泡时间不低于6h。3.1.1.2 洗刷
3、瓶内外残留物，用清水再冲洗 3遍5遍，放入专用框中晾干。3.1.2 接种器械的清洗3.1.2.1 清除接种器械上的残留物，在洗洁精溶液中浸泡数分钟。3.1.2.2 洗刷干净后用清水冲洗 3遍5遍并晾干。3.1.2.3 用棉布或纸包好，按 3.3的要求灭菌。3.2 培养基配制3.2.1 母液配制3.2.1.1 MS培养基母液的配制见附录 A。3.2.1.2 植物生长物质 KT、6-BA用少量0.1 mol/L 的HCI 溶解后用蒸馏水定容，IBA、NAA用少量的95%的酒精或 0.1mol/L NaOH溶解后用蒸馏水定容。3.2.2 培养基制作3.2.2.1 依据培养基成分准备好蒸馏水、蔗糖、琼
4、脂和各类母液。3.2.2.2 加定容总量 2/3左右的水（水符合 GB 17323-1998），再加琼脂粉放入锅中加热搅拌使其融化。DB41/T 769-201223.2.2.3 琼脂粉融化后，加入蔗糖，搅拌使蔗糖溶解。3.2.2.4 蔗糖溶解后，停止加热，放入吸取的各类母液，并充分搅拌。3.2.2.5 搅拌均匀后，加入蒸馏水混合定容并搅拌均匀。3.2.2.6 定容后，用 pH计或pH试纸测 pH值，用0.1mol/L 的 NaOH或 0.1mol/L的 HCl 调节pH值至5.86.0。3.2.2.7 根据不同定量分装，每瓶 30ml40ml，盖好瓶盖或用封口膜封口，3.3 灭菌将分装好的培
5、养基、蒸馏水、接种器械、无菌纸、工作服、口罩、帽子等放入高压蒸汽灭菌锅内，采用湿热空气灭菌法（灭菌压力0.11 MPa0.14MPa、温度120 126、时间15min20min）进行灭菌。培养基高压灭菌取出后，置于室温至培养基凝固后即可使用。4 外植体的选择与处理4.1 外植体的选择选择观赏性状好、生长健壮、无病虫害、花期长的优良盆栽红掌品种，并选用带芽茎段为外植体。4.2 外植体处理选择生长健壮的带芽茎段，在自来水下冲洗20min。在无菌室内把嫩茎放入75的酒精中浸泡20s，用无菌水冲洗一遍，再用10的次氯酸钠浸泡8min10min，然后用无菌水冲洗6遍7遍。5 接种与培养5.1 培养条件
6、光照强度2000Lx,光照时间每天12h，温度252。5.2 接种5.2.1 初代培养在无菌纸上，将带芽茎段切成1cm2cm小段，转接到初代培养基上诱导：MS+K T2.0mg/L+IBA5mg/L+蔗糖30mg/L+琼脂7mg/L。5.2.2 继代培养初代培养55d65d后，可将诱导形成的幼芽转接到MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L增殖培养基上，35d45d转接1次，继代次数为10次12次。5.2.3 生根培养具有3片4片叶，高2cm3cm的无根幼苗转接到生根培养基1/2MS +IBA0.3mg/L+ NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+
7、琼脂7g/L。DB41/T 769-201236炼苗6.1 环境消毒炼苗半月前，用4g6g/m硫磺对温室进行熏蒸消毒，用高锰酸钾8001000倍溶液对工具浸泡30分钟后，晾干备用。6.2 环境条件白天温度以2532，夜温以2124为宜，最高温度不能高于32，最低温度不能低于15，空气湿度为7585，光照以1000lux4000lux为宜。6.3 方法幼苗基部长出3条以上长1.5cm3cm的新根即可进行炼苗。 炼苗时将瓶苗从培养室移到炼苗温室中，放置7d10d后，然后打开瓶口放置2d3d，然后再出瓶。7 移栽与管理7.1 环境条件最适温度为2026，最高温度不能高于33，最低温度不能低于15，空
8、气湿度为7585，遮光率为5060，光照逐步提高到10000lux。7.2 基质要求7.2.1 要求排水透气、保水保肥、不易分解、不含有害物质、能固定植物，主要成分是草炭。7.2.2 消毒基质符合 GB 4285标准。用前用 40甲醛稀释 50倍液均匀洒于基质上充分搅拌后用薄膜密封，堆置5d后揭开薄膜摊开基质，每日翻动 1次，让甲醛气体充分发挥，7d后使用。7.3 移栽方法移栽前用镊子小心从瓶中取出苗，放入清水中把琼脂洗净，用800倍100倍的50多菌灵药液浸苗5min后移栽，移栽时用小木棍将穴盘的基质挖个小洞，然后轻轻地把苗放入，再覆上基质将根部盖住。7.4 管理7.4.1 幼苗阶段基质含水
9、量 7080，用水符合 GB 17323-1998。7.4.2 当新根开始生长、新叶出现时进行首次施肥， 以后每隔 23 周追肥1 次， 施用 N： P:K=20:10:20的复合肥速溶液态肥。7.4.3 隔 15d25d 喷洒杀菌、杀虫剂一次，施用50多菌灵 1000倍或 50甲维盐1000倍。预防为主综合防治为原则。按照GB4285和中华人民共和国农业部第 199号（2002）公告规定，优先采用物理防治、生物防治，科学合理的结合化学防治，农药使用采用合理混用、轮换、交替使用。8 成苗标准小苗规格为5cm14cm，中苗规格为15cm20cm，大苗规格为21cm27cm。DB41/T 769-
10、20124附录 A（资料性附录）MS 培养基母液配制用量表表A.1 给出了MS培养基母液配制用量。表A.1种类 成分配1L 母液称取量(mg)使用浓度(mg/L)配 1L培养基吸取母液量（ml）大量元素硝酸钾 KNO319000 1900100硝酸铵NH4NO316500 1650磷酸二氢钾KH2PO41700 170硫酸镁MgSO4.7H2O 3700 370氯化钙CaCl2.2H2O 4400 440微量元素碘化钾 KI 83 0.8310硼酸 H3BO3620 6.2硫酸锰MnSO4.4H2O 2230 22.3硫酸锌ZnSO4.7H2O 860 8.6钼酸钠Na2MoO4.2H2O 25 0.25硫酸铜CuSO4.5H2O 2.5 0.025氯化钴CoCl22.5 0.025铁盐乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA.2H2O3730 37.310硫酸亚铁FeSO4.7H2O 2780 27.8有机物肌醇 10000 10010甘氨酸 200 2盐酸硫胺素/VB140 0.4盐酸吡哆醇/VB650 0.5烟酸 VB5或 VPP 50 0.5
