1、ICS 65.020.30 B 43 DB13 河北省 地方标准 DB13/T 2442 2017 蛋种鸡场禽白血病的净化技术规程 2017 - 03 - 29 发布 2017 - 06 - 01 实施 河北省质量技术监督局 发布 DB13/T 2442 2017 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北科技师范学院提出。 本标准由河北科技师范学院动物科技学院起草。 本标准主要起草人：张香斋、 李蕴玉、李佩国、贾青辉、张文香、申红莲、张艳英、张召兴、常超越、闫艳娟。 DB13/T 2442 2017 1 蛋种鸡场 禽白血病的净化技术规程 1 范围 本标准
2、规定了蛋种鸡场禽白血病净化的 术语和定义 、净化方法与程序 、饲养管理、种鸡场建设和净化标准 。 本标准适用于蛋种鸡场禽白血病的净化。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 13078 饲料卫生标准 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 388 畜禽场环境质量标准 NY/T 1167 畜禽场环境质量 及 卫 生控制规范 NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY 5027 无公害食品 畜禽饮用水水质 NY/T
3、5038 无公害食品 家禽 养殖生产管理规范 NY/T 5339 无公害食品 畜禽饲养兽医防疫准则 DB13/T 990 鸡场消毒技术规范 中华人民共和国动物防疫法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 禽白血病 由反转录病毒科的禽白血病病毒 (Avian leukosis virus， ALV)引起的禽类多种肿瘤性传染病。 注： 主要包括 淋巴细胞性 白血病 、成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病、骨髓细胞瘤等 。 3.2 ALV p 27抗原 禽白血病病毒所有亚群共有的核衣壳蛋白，氨基酸序列比较保守，是 ALV的主要特异性抗原。 3.3 酶联免疫吸附试验 （ ELISA） 一
4、种用酶标记抗原或抗体的方法，将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的 一种新型的免疫测定技术， 可敏感地检测体液中微量的特异性抗原或抗体。 3.4 DB13/T 2442 2017 2 DF-1细胞系（ DF-1） 来源于 East Lansing Line（ ELL-0）鸡胚胎，是鸡胚成纤维细胞的可传代细胞系 。 注： 该细胞系缺少禽白血病病毒、肉瘤病毒群病毒相关的内源片段，并具有正常的成纤维形态。 DF-1细胞支持禽反转录病毒的复制，是一种自发的、无肿瘤基因的、稳定的、无限增殖的细胞系。 3.5 净化 为达到消灭和清除传染源的目的， 在某一限定地区或养殖场内 采取
5、 的 一系列措施。 4 净化方法与程序 4.1 原种鸡场核心群禽白血病的净化 4.1.1 1 日龄雏鸡胎粪检测 出壳前，将每只种鸡的种蛋置于同一出壳袋中。出壳后，逐只采集 1日龄雏鸡胎粪 ，采用 ELISA的方法 检测 ALV-p27抗原。每采集 完同一只母鸡的雏鸡胎粪后，更换一次手套。同一只母鸡所产雏鸡中，只要有一只阳性就淘汰同袋中的其他雏鸡，同时淘汰相应种母鸡。 4.1.2 6 10 周龄育成鸡检测 6 10周龄按育种规程 选择出 后备鸡 ，逐只采集血浆， 接种 DF-1细胞分离病毒 ， 培养 9 d后用 ELISA的方法 逐 孔 检测 ALV-p27抗原 ， 淘汰阳性鸡。 同一饲养笼中鸡
6、只，只要有一只阳性就淘汰同笼中的所有鸡。 4.1.3 18 20 周龄开产初期检测 取母鸡初生蛋 3个， 分离蛋清， 公鸡采集精液或 泄殖腔棉 拭子 ，分别 用 ELISA方法检测 ALV-p27抗原，淘汰阳性鸡。 4.1.4 留种继代前 (43 55 周龄 )检测 取 2 3个种蛋 ， 对蛋清做 ALV-p27抗原 检测，公鸡可采集精液检测 ALV-p27抗原 ，淘汰阳性鸡 。 逐只采集血液 ，分离血清， ELISA检测 A/B、 J抗体， 淘汰阳性鸡 ；同时采集抗凝血，分离血浆， 接种 DF-1细胞分离病毒 ， 培养 9 d后用 ELISA方法 逐 孔 检测 ALV-p27抗 原 ，淘汰阳
7、性鸡，然后 组建家系，收集种蛋入孵。 4.1.5 第 2 5 世代鸡的检测与淘汰 对经上述检测 组建家系后的 种鸡 ，收集种蛋入孵， 出壳的雏鸡，作为净化后第二世代鸡，按 4.1.1、4.1.2、 4.1.3、 4.1.4的要求进行第 2 5世代种鸡 ALV-p27的检测和净化，直至达到净化标准。 4.2 祖代或父母代种鸡群禽白血病的净化 4.2.1 选择净化的种源，加强引种检疫 引进种鸡时，应要求对方出具禽白血病净化证明和其他相关的检疫合格证或按照 NY/T 5339的要求进行。 4.2.2 严格隔离制度 DB13/T 2442 2017 3 种鸡引入后至少隔离饲养 60 d，并经 病原 学
8、检测确认为阴性，同时按照本场免疫程序进行常规免疫后方可调入鸡场。 4.2.3 定期检测 祖代 和父母代鸡场 连续三次 抽检 ，抽检比例为 1%左右 ，每次检测间隔 2个月 。 如果 病原学检测 阳性率超过净化标准，应按原种鸡场核心群禽白血病的净化方法与程序进 行净化，直至达到净化标准。 5 种鸡场建设要求 5.1 种鸡场的场址选择、布局与卫生设施应符合 NY/T 5038 的要求。 5.2 场 区的空气环境质量应符合 NY/T 388 的要求。 5.3 场区的土壤环境质量应符合 NY/T 1167 的要求。 6 饲养管理 6.1 优化饲养方式 6.1.1 实行全进全出的饲养方式。 6.1.2
9、对于原种鸡场，在育雏和育成鸡执行单家系饲养管理，产蛋鸡采取单笼饲养，执行终身跟踪制度。 6.2 出雏管理 按照 1只母鸡后代的全同胞进行装袋落盘。出雏执行严格隔离，品系之间、家系之间不交叉。 6.3 饲料质量 饲料品质应符合 GB 13078 的要求。 6.4 饮水质量 饮用水 水质应符合 NY 5027的要求。 6.5 卫生消毒 6.5.1 消毒剂的选择应符合中华人民共和国兽药典的规定，选择广谱、高效、杀菌作用强、刺激性低、对人和鸡安全的产品。消毒剂应定期轮换使用，以提高杀菌效力。 6.5.2 场区环境、人员、用具、鸡舍及种蛋的消毒按 DB13/T 990 的要求进行。 6.5.3 每天对孵
10、化室进行清扫，并喷雾消毒，保持清洁。 6.5.4 入孵前 ，对 孵化器 、入孵盘 进行清洗 、喷雾消毒，再 按每立方米 38 %甲醛溶液 14 ml、高锰酸钾 7 g、水 7 ml 的比例熏蒸 30 min。 6.5.5 落盘后 ，出雏 器内按每立方米 38 %甲醛溶液 20 ml 30 ml，自然挥发，直至出雏结束 。 DB13/T 2442 2017 4 6.5.6 出雏后， 清除出雏 器 中的 污物、死胚、死雏、蛋壳 ，并对出雏 器 、出雏盘进行清洗和喷雾消毒，再 按每立方米 38 %甲醛溶液 42 ml、高锰酸钾 21 g、水 21 ml 的比例熏蒸 30 min。 6.6 免疫接种
11、免疫接种 应符合中华人民共和国动物防疫法的要求， 根据本地区和本场疫病流行情况， 制定合理的 免疫接种计划， 选择适宜的疫苗和免疫方法 ，并做好记录 。 6.7 无害化处理 对病死鸡、蛋壳和鸡粪等和孵化场内的废弃物 应 按 GB 16548和 NY/T 1168的要求进行无害化处理。 6.8 杀虫 、 灭鼠 定期开展杀灭蚊 虫、苍蝇和老鼠等工作，消灭传播媒介和传染源。 7 净化标准 7.1 病原学检测 原种场全部为阴性，祖代场和父母代场阳性率低于 1 %。 7.2 血清学检 测 A/B、 J 抗体 检测， 原种场全部为阴性，祖代场 和 父母代场阳性率低于 1 %。 8 净化状态的维持 种鸡场达
12、到禽白血病净化状态或通过评估后，可开展维持性监测。 DB13/T 2442 2017 5 附 录 A （资料性附录） 相关技术 A.1 ALV 病毒分离 采集抗凝血置于灭菌离心管中， 1500 r/min离心 3 min，取 100 L血浆接种 24孔细胞板处于对数生长期的 DF-1细胞， 37 、 5 % CO2培养箱作用 2 h后，用灭菌 PBS润洗一遍，加入含 1 %胎牛血清的 DMEM维持培养 7 d 9 d，收集细胞上清进行 ALV-p27抗原检测。 A.2 ELISA 检测 采集的胎粪、泄殖腔 棉 拭子、蛋清上清 等样品，经过几次反复冻融后 ，按照 ELISA检测试剂盒操作说明进行 ALV-p27抗原检测 ；无菌采集血液，分离血清， 按照 ELISA检测试剂盒操作说明进行 ALV A/B、J抗体 检测 ， 操作过程详见试剂盒说明书。 _
