1、Mrz 2014 Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 21DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 07.100.30Zur Erstellung ein
2、er DIN SPEC knnen verschiedene Verfahrensweisen herangezogen werden: Das vorliegende Dokument wurde nach den Verfahrensregeln einer Vornorm erstellt.!$F7“1913520www.din.deDDIN CEN ISO/TS 17919Mikrobiologie der Lebensmittelkette Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogenenMikroorganism
3、en in Lebensmitteln Nachweis von Botulinum-Neurotoxin Typ A, B, E und F produzierendenClostridien (ISO/TS 17919:2013);Deutsche Fassung CEN ISO/TS 17919:2013Microbiology of the food chain Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens Detection of botulinum type A, B, E and
4、 F neurotoxin-producing clostridia(ISO/TS 17919:2013);German version CEN ISO/TS 17919:2013Microbiologie de la chane alimentaire Raction de polymrisation en chane (PCR) pour la dtection de micro-organismespathognes dans les aliments Dtection des clostridies productrices de neurotoxine botulique de ty
5、pe A, B, E et F(ISO/TS 17919:2013);Version allemande CEN ISO/TS 17919:2013Alleinverkauf der Spezifikationen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlin www.beuth.deGesamtumfang 57 SeitenDIN SPEC 10793DIN CEN ISO/TS 17919 (DIN SPEC 10793):2014-03 2 Nationales Vorwort Eine DIN SPEC nach dem Vornorm-Verfahre
6、n ist das Ergebnis einer Normungsarbeit, das wegen bestimmter Vorbehalte zum Inhalt oder wegen des gegenber einer Norm abweichenden Aufstellungsverfahrens vom DIN noch nicht als Norm herausgegeben wird. Zur vorliegenden DIN SPEC wurde kein Entwurf verffentlicht. Erfahrungen mit dieser DIN SPEC sind
7、erbeten vorzugsweise als Datei per E-Mail an naldin.de in Form einer Tabelle. Die Vorlage dieser Tabelle kann im Internet unter http:/www.din.de/stellungnahme abgerufen werden; oder in Papierform an den Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DIN Deutsches Institut fr
8、Normung e. V., Burggrafenstrae 6, 10787 Berlin. Dieses Dokument enthlt unverndert die internationale Technische Spezifikation ISO/TS 17919:2013, die von der Arbeitsgruppe 6 Mikrobiologie der Lebensmittelkette“ (Sekretariat: Frankreich) des Technischen Komitees CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizon
9、tale Verfahren“ (Sekretariat: DIN, Deutschland) erarbeitet wurde. Die Internationale Technische Spezifikation wurde in Zusammenarbeit mit dem ISO/TC 34/SC 9 Microbiology“ (Sekretariat: Frankreich) im Rahmen der Wiener Vereinbarung erstellt. Sie liegt auch als Europische Technische Spezifikation CEN
10、ISO/TS 17919:2013 vor. Die Mitarbeit des DIN im SC 9 des ISO/TC 34 Food products“ und in der Arbeitsgruppe 6 des CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren“ wird ber den Arbeitsausschuss Mikrobiologische Lebensmitteluntersuchung einschlielich Schnellverfahren“ des Normenausschusses Lebens
11、mittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) wahrgenommen. Zustndiges nationales Gremium zur Erarbeitung dieser Technischen Spezifikation ist der Arbeitskreis NA 057-01-06-01 AK Polymerase-Kettenreaktion zum Nachweis von Mikroorganismen“ des Arbeitsausschusses Mikrobiologische Lebensmitteluntersuch
12、ung einschlielich Schnellverfahren“. Fr die in diesem Dokument zitierten internationalen Normen wird im Folgenden auf die entsprechenden Deutschen Normen hingewiesen: ISO 6887-1 siehe DIN EN ISO 6887-1 ISO 7218 siehe DIN EN ISO 7218 ISO 11133 siehe DIN EN ISO 11133 ISO 20837 siehe DIN EN ISO 20837 I
13、SO 20838 siehe DIN EN ISO 20838 ISO 22174 siehe DIN EN ISO 22174 DIN CEN ISO/TS 17919 (DIN SPEC 10793):2014-03 3 Nationaler Anhang NA (informativ) Literaturhinweise DIN EN ISO 6887-1, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Vorbereitung von Untersuchungsproben und Herstellung von Erstverdn
14、nungen und von Dezimalverdnnungen fr mikrobiologische Untersuchungen Teil 1: Allgemeine Regeln fr die Herstellung von Erstverdnnungen und Dezimalverdnnungen DIN EN ISO 7218, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Allgemeine Anforderungen und Leitlinien fr mikrobiologische Untersuchungen D
15、IN EN ISO 11133, Mikrobiologie von Lebensmitteln, Futtermittel und Wasser Vorbereitung, Herstellung, Lagerung und Leistungsprfung von Nhrmedien DIN EN ISO 20837, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogenen Mikroorganismen in Lebensmit
16、teln Anforderungen an die Probenvorbereitung fr den qualitativen Nachweis DIN EN ISO 20838, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogenen Mikroorganismen in Lebensmitteln Anforderungen an Amplifikation und Nachweis bei qualitativen Verf
17、ahren DIN EN ISO 22174, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogenen Mikroorganismen in Lebensmitteln Allgemeine Anforderungen und Begriffe DIN CEN ISO/TS 17919 (DIN SPEC 10793):2014-03 4 Leerseite TECHNISCHE SPEZIFIKATION TECHNICAL SP
18、ECIFICATION SPCIFICATION TECHNIQUE CEN ISO/TS 17919 November 2013 ICS 07.100.30 Deutsche Fassung Mikrobiologie der Lebensmittelkette Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von pathogenen Mikroorganismen in Lebensmitteln Nachweis von Botulinum-Neurotoxin Typ A, B, E und F produzierenden Clostri
19、dien (ISO/TS 17919:2013) Microbiology of the food chain Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens Detection of botulinum type A, B, E and F neurotoxin-producing clostridia (ISO/TS 17919:2013) Microbiologie de la chane alimentaire Raction de polymrisation en chane (PCR
20、) pour la dtection de micro-organismes pathognes dans les aliments Dtection des clostridies productrices de neurotoxine botulique de type A, B, E et F (ISO/TS 17919:2013) Diese Technische Spezifikation (CEN/TS) wurde vom CEN am 16. April 2013 als eine knftige Norm zur vorlufigen Anwendung angenommen
21、. Die Gltigkeitsdauer dieser CEN/TS ist zunchst auf drei Jahre begrenzt. Nach zwei Jahren werden die Mitglieder des CEN gebeten, ihre Stellungnahmen abzugeben, insbesondere ber die Frage, ob die CEN/TS in eine Europische Norm umgewandelt werden kann. Die CEN-Mitglieder sind verpflichtet, das Vorhand
22、ensein dieser CEN/TS in der gleichen Weise wie bei einer EN anzukndigen und die CEN/TS verfgbar zu machen. Es ist zulssig, entgegenstehende nationale Normen bis zur Entscheidung ber eine mgliche Umwandlung der CEN/TS in eine EN (parallel zur CEN/TS) beizubehalten. CEN-Mitglieder sind die nationalen
23、Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dnemark, Deutschland, der ehemaligen jugoslawischen Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Sch
24、weden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, der Trkei, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern. EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION COMIT EUROPEN DE NORMALISATION CEN-CENELEC Management-Zentrum: Avenue Marnix 17, B-1000 Brs
25、sel 2013 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten. Ref. Nr. CEN ISO/TS 17919:2013 D CEN ISO/TS 17919:2013 (D) 2 Inhalt Seite Vorwort 3 Einleitung .4 1 Anwendungsbereich .5 2 Normative Verweisungen 5
26、3 Begriffe .5 4 Symbole und Abkrzungen 5 4.1 Symbole 5 4.2 Abkrzungen 5 5 Kurzbeschreibung .6 5.1 Allgemeines 6 5.2 Mikrobielle Anreicherung 6 5.3 Nukleinsureextraktion .6 5.4 Amplifikation mittels PCR .6 5.5 Nachweis von PCR-Produkten .6 5.6 Besttigung 6 6 Reagenzien .6 6.1 Allgemeines 6 6.2 Nhrmed
27、ien 7 6.3 Nukleinsureextraktion .8 6.4 Reagenzien fr die PCR 9 7 Gerte und Ausrstungen 9 7.1 Allgemeines 9 7.2 Ausrstung zur Probenvorbereitung vor der Anreicherung .9 7.3 Ausrstung fr die mikrobielle Anreicherung 9 7.4 Bei der Nukleinsureextraktion eingesetzte Ausrstung . 10 7.5 Fr die PCR eingeset
28、zte Ausrstung . 10 7.6 Fr den Nachweis des PCR-Produktes eingesetzte Ausrstung 10 8 Probenahme 10 9 Durchfhrung 11 9.1 Probenvorbereitung vor der Anreicherung 11 9.2 Mikrobielle Anreicherung . 11 9.3 Prparation von Nukleinsuren . 12 9.4 Amplifikation mittels PCR 13 9.5 Besttigung eines positiven PCR
29、-Ergebnisses . 13 Anhang A (normativ) Flieschema fr das Verfahren 14 Anhang B (informativ) Multiplex PCR-Verfahren zum Nachweis von Genen, die Botulinum-Neurotoxin Typ A, B, E und F kodieren, mit Agarose Gelelektrophorese . 15 Anhang C (informativ) Verfahren zum Nachweis von Genen, die Botulinum-Neu
30、rotoxin Typ A, B, E und F kodieren, mit Real-time-PCR . 33 Anhang D (informativ) Prparation von C. botulinum-Sporen. 46 Literaturhinweise . 52 DIN CEN ISO/TS 17919 (DIN SPEC 10793):2014-03 CEN ISO/TS 17919:2013 (D) 3 Vorwort Dieses Dokument (CEN ISO/TS 17919:2013) wurde vom Technischen Komitee ISO/T
31、C 34 Food products“ in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat vom DIN gehalten wird. Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Elemente dieses Dokuments Patentrechte berhren knnen. CEN und/oder CENELE
32、C sind nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglichen Patentrechte zu identifizieren. Entsprechend der CEN-CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Technische Spezifikation anzukndigen: Belgien, Bulgarien, Dnemark, Deutschland, die
33、 ehemalige jugoslawische Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, Schweiz, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Trkei
34、, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. Anerkennungsnotiz Der Text von ISO/TS 17919:2013 wurde vom CEN als CEN ISO/TS 17919:2013 ohne irgendeine Abnderung genehmigt. DIN CEN ISO/TS 17919 (DIN SPEC 10793):2014-03 CEN ISO/TS 17919:2013 (D) 4 Einleitung Botulinum-Neurotoxin produzierende Clostridie
35、n kommen berall in der Umwelt vor. Botulismus ist eine schwere neuroparalytische Erkrankung, die durch die Wirkung von Botulinum-Neurotoxinen (BoNT) hervorgerufen wird. Bis jetzt wurden sieben verschiedene Serotypen von BoNT (Typ A bis G) und eine Reihe von Subtypen identifiziert. BoNT Typ A (BoNT/A
36、), Typ B (BoNT/B), Typ E (BoNT/E) und Typ F (BoNT/F) sind vorwiegend fr Botulismus beim Menschen verantwortlich und die Gene, die diese Toxine kodieren, sind die Zielmolekle der vorliegenden Technischen Spezifikation. BoNT Typ A, B, E, und F produzierende Clostridien existieren in vier physiologisch
37、 verschiedenen Gruppen (Gruppe I Clostridium botulinum, Gruppe II C. botulinum, C. baratii, C. butyricum). Die Internationale Organisation fr Normung (ISO) weist darauf hin, dass die bereinstimmung mit diesem Dokument die Verwendung von Patenten bedeuten kann. ISO nimmt keine Stellung zur Rechtmigke
38、it, zur Gltigkeit und zum Anwendungsbereich dieser Patentrechte. Der Halter dieser Patentrechte hat ISO zugesichert, dass er bereit ist, ber Lizenzen zu vernnftigen und nicht diskriminierenden Geschftsbedingungen mit Antragstellern in der ganzen Welt zu verhandeln. In diesem Zusammenhang ist die Erk
39、lrung des Halters dieser Patentrechte bei ISO registriert. Informationen sind erhltlich bei: Applied Biosystems, LLC Scott Miller, Legal Department 5781 Van Allen Way CARLSBAD CA 92008 USA Tel: +1 760 476 4387 Fax: +1 760 476 6048 e-mail: S Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Element
40、e dieses Dokuments Patentrechte berhren knnen, ohne dass diese vorstehend identifiziert wurden. ISO ist nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglichen Patentrechte zu identifizieren. ISO (www.iso.org/patents) stellt online eine aktuelle Liste mit den fr ihre Normen relevanten Patenten be
41、reit. Anwender werden ermutigt, sich diese Liste anzusehen, um die aktuellsten Informationen hinsichtlich Patente zu erhalten. DIN CEN ISO/TS 17919 (DIN SPEC 10793):2014-03 CEN ISO/TS 17919:2013 (D) 5 1 Anwendungsbereich Die vorliegende Technische Spezifikation legt ein horizontales Verfahren zum Na
42、chweis von Clostridien, die ber Gene fr die Botulinum-Neurotoxine A, B, E und F verfgen, auf molekularer Ebene unter Anwendung eines PCR-Verfahrens fest. Mit diesem Verfahren werden die Gene und nicht die Toxine nachgewiesen, deshalb bedeutet ein positives Ergebnis nicht zwangslufig, dass diese Toxi
43、ne in der untersuchten Probe vorliegen. Diese Technische Spezifikation ist anwendbar auf Produkte fr den menschlichen Verzehr, Futtermittel und Umgebungsproben. Die PCR-Verfahren zum Nachweis von Gensequenzen, die spezifische Toxintypen kodieren, sind in den Anhngen B und C beschrieben. 2 Normative
44、Verweisungen Die folgenden zitierten Dokumente sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). ISO 6887-1,
45、Microbiology of food and animal feeding stuffs Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs Gene
46、ral requirements and guidance for microbiological examinations ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water Preparation, production, storage and performance testing of culture media ISO 20837, Microbiology of food and animal feeding stuffs Polymerase chain reaction (PCR) for the detection
47、of food-borne pathogens Requirements for sample preparation for qualitative detection ISO 20838:2006, Microbiology of food and animal feeding stuffs Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens Requirements for amplification and detection for qualitative methods ISO 2217
48、4, Microbiology of food and animal feeding stuffs Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens General requirements and definitions 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gelten die Begriffe nach ISO 22174. 4 Symbole und Abkrzungen 4.1 Symbole c Stoffmengenkonzentr
49、ation Massenkonzentration Volumenanteil w Massenanteil 4.2 Abkrzungen BoNT Botulinum-Neurotoxin DIN CEN ISO/TS 17919 (DIN SPEC 10793):2014-03 CEN ISO/TS 17919:2013 (D) 6 5 Kurzbeschreibung 5.1 Allgemeines Das Verfahren umfasst die folgenden aufeinanderfolgenden Schritte: a) mikrobielle Anreicherung (siehe 5.2); b) Nukleinsureextraktio
