1、1专题二 微生物的培养与应用注 意 事 项 ：1 答 题 前 ， 先 将 自 己 的 姓 名 、 准 考 证 号 填 写 在 试 题 卷 和 答 题 卡 上 ， 并 将准 考 证 号 条 形 码 粘 贴 在 答 题 卡 上 的 指 定 位 置 。2 选 择 题 的 作 答 ： 每 小 题 选 出 答 案 后 ， 用 2B 铅 笔 把 答 题 卡 上 对 应 题 目的 答 案 标 号 涂 黑 ， 写 在 试 题 卷 、 草 稿 纸 和 答 题 卡 上 的 非 答 题 区 域 均 无 效 。3 非 选 择 题 的 作 答 ： 用 签 字 笔 直 接 答 在 答 题 卡 上 对 应 的 答 题 区
2、域 内 。 写在 试 题 卷 、 草 稿 纸 和 答 题 卡 上 的 非 答 题 区 域 均 无 效 。4 考 试 结 束 后 ， 请 将 本 试 题 卷 和 答 题 卡 一 并 上 交 。一、选择题（本题包括 20 小题，每小题 3 分，共 60 分，每小题只有一个选项最符合题意）1在纤维素分解菌分离与鉴定实验中，用到的培养基按照物理状态分类分别为（ ）A固体培养基、液体培养基 B固体培养基、固体培养基C液体培养基、液体培养基 D液体培养基、固体培养基2欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应选择下列固体培养基（仅列出碳氮源）中的（ ）A蛋白胨、柠檬酸铁铵 B橄榄油、硫酸铵C乳糖、酵母膏 D葡萄糖
3、、蛋白胨3将三组生理状态相同的某植物幼根分别培养在含有相同培养液的密闭培养瓶中，一段时间后，测定根吸收某一矿质元素离子的量。培养条件及实验结果见下表：培养瓶中气体 温度 离子相对吸收量/%空气 17 100氮气 17 10空气 3 28下列分析正确的是（ ）A有氧条件有利于该植物幼根对该离子的吸收B该植物幼根对该离子的吸收与温度的变化无关C氮气环境中该植物幼根细胞吸收该离子不消耗 ATPD与空气相比，氮气环境有利于该植物幼根对该离子的吸收4通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入
4、 10%的酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出（ ）大肠杆菌 霉菌 放线菌 固氮细菌A BC D5选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为（ ）A伊红美蓝培养基、含青霉素培养基B含青霉素培养基、含氨的无机培养基C含氨的无机培养基、含青霉素培养基D含青霉素培养基、伊红美蓝培养基6消毒和灭菌是两个不同的概念，下列哪些事物适用于消毒处理（ ）皮肤 饮用水 牛奶 注射器 培养皿 接种环 培养基 果汁 酱油 手术刀A B C
5、 D7制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的描述正确的是（ ） 用左手打开皿盖等待平板冷却 5l0min，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰等培养基冷却至 60左右时，在酒精灯火焰附近倒平板右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖A B C D28如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法不正确的是（ ）A步骤使用的培养基已经灭菌B图中操作结束后需在培养基皿上标注菌种及接种日期等信息C中只有最后一次划线的区域才可以得到所需菌落D步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行9如图是使用某接种方法在适宜的培养基上培养某种微生物的结果，相
6、关叙述不正确的（ ）A该图最可能是用平板划线法进行接种B该接种方法适用于微生物的分离和计数C接种技术的核心是要防止杂菌的污染D可将未接种的培养基放在相同条件下培养，排除培养基是否有杂菌污染10用稀释涂布平板法统计细菌菌落数时，一般选择如图中哪几支试管中的稀释液来涂布平板（ ）A试管 1、2、3B试管 2、3、4C试管 3、4、5D试管 4、5、611下列有关微生物培养的说法，正确的是（ ）A制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、消毒、倒平板B在筛选纤维素分解菌时选择培养这一步骤不可以省略C配置培养不同微生物的培养基时都要将 pH 调至中性或微碱性D获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵1
7、2做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（ ）A高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上13下列有关说法，正确的是（ ）A对于频繁使用的菌种，可采用甘油管藏法保藏B甘油管藏法保存菌种时用固体体培养基C甘油管藏法一般保存温度为-20D甘油管藏法每 36 个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上14可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是（ ）A以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂B以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂
8、C以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹试剂D以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂15分离土壤中分解尿素菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是（ ）A制备浸出液的土壤取自土壤的表层B涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌C牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源D接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒16下列有关培养基和菌种鉴定的叙述错误的是（ ）A可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型B菌落的大小、颜色、有无荚膜、隆起程度等特征都可作为菌种肉眼鉴定的依据C利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌D在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌317
9、原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确的是（ ）A应选择被原油污染的土壤取样 B配制以多环芳烃为唯一碳源的选择性培养基C将土壤稀释液灭菌后接种到选择性培养基上 D能形成分解圈的即为所需菌种18下列有关刚果红染色法的叙述，正确的是（ ）A刚果红可以和纤维素、淀粉等多糖形成红色复合物B出现透明圈的菌落一定是纤维素分解菌C在倒平板时加入的刚果红溶液不需要灭菌D在菌落形成后加入的刚果红溶液不需要灭菌19分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是（
10、 ）A经选择培养后即可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少C经稀释培养后，用刚果红染色D此实验中需设置对照组20抗生素可由微生物产生，具有抑菌作用，能在琼脂培养基中扩散。在筛选产生抗生素的菌种时，先在琼脂培养基平板上划线接种一种从土壤中获得的甲菌，在 27下培养 3 天，形成菌落。然后接种乙、丙、丁三种致病菌（图 a） ，继续在同样条件下培养 3 天，结果如下图 b。分析结果，得出的结论是（ ）甲菌产生了抗生素丙菌的生长被乙菌产生的抗生素抑制乙菌的生长被甲菌产生的抗生素抑制丁菌产生的抗生素抑制了丙菌的生长A B C D二、非选择题（本题包括 3 小题，
11、每空 2 分，共 40 分）21（16 分）饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图请分析作答 （1）培养基中除了添加 以外，应含有碳源、氮源、水、无机盐等基本营养物质（2）为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行 （3）接种以前要进行的一系列操作，目的是在固体培养基表面形成 根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大致推测出样品中的活菌数通常每种稀释液需涂布 个平板，取其平均值若将最后一个试管中的菌
12、液每次吸取 0.1mL 涂布培养后获得平均值是 C，则 1g 土壤中含有此菌的菌株数是 （4）若要对上述菌株进行纯化，通常使用的划线工具是 ;接种时，在第一区域划线后须将该工具 后再划线，在第二次划线时须从第一次划线的末端开始，这样做的目的是从上一区域获得菌种。22 （12 分）幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氣型（氧气浓度在 5%8%左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存)，这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶。（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以_为唯一氮源的固体选择培养
13、基上，接种后的培养皿在_条件下，倒置于 37的恒温培养箱中培养。（2）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这4种检测过程的机理是_。（3）采用液体培养基培养幽门螺杆歯菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用_法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计菌落的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏_（填“大”或“小”)，原因是_。23 （12 分）研究人员成功地从土壤中筛选到能产生纤维素酶的微生物。请就如何从土壤中获得纤维素分解菌回答以下问题。（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即
14、 C1酶、C X酶和_酶。（2）若获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是_，操作时采用的灭菌方法是_。（3）刚果红可以与纤维素等多糖形成_色复合物，但并不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在_时就加入刚果红。_（第一种、第二种）方法会使菌落之间发生混杂。12018-2019 学 年 高 二 下 学 期 专 题 二 训 练 卷生 物 （ 二 ） 答 案1. 【答案】D【解析】在纤维素分解菌分离与鉴定实验中，梯度稀释前进行选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，这一步一般选用液体培
15、养基，筛选纤维素分解菌用了固体培养基，D 正确。2. 【答案】B【解析】欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应选择以脂肪为唯一碳源的固体培养基。只有橄榄油、硫酸铵的培养基中的碳源为脂肪（橄榄油） ，而其它培养基中的碳源都不是脂肪。综上分析，B 正确。3. 【答案】A【解析】表中信息显示：在相同的温度条件下，空气培养瓶中离子相对吸收量大，说明有氧条件有利于该植物幼根对该离子的吸收，A 正确；同是空气培养瓶，在不同的温度条件下离子相对吸收量不同，说明温度变化会影响根对离子的吸收，B 错误；在相同的温度条件下，氮气培养瓶中离子相对吸收量较空气培养瓶中离子相对吸收量小，说明幼根细胞吸收该离子消耗 ATP，
16、而且氮气环境不利于该植物幼根对该离子的吸收，C、D 错误。4. 【答案】B【解析】在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，但固氮细菌的氮源是氮气，可在该培养基上正常生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，则霉菌等真菌可正常生长；在培养基中加入 10%的酚可以抑制细菌和霉菌，但不影响放线菌的生长。5. 【答案】B【解析】伊红美蓝培养基是专一鉴别大肠杆菌的培养基，硝化细菌对青霉素敏感，含青霉素培养基不能筛选硝化细菌，A 错误；酵母菌对青霉素不敏感，但细菌对青霉素敏感，因此含青霉素培养基可以用于筛选酵母菌，硝化细菌能利用环境中的氨氧化释放的化学能将 CO2和 H2O 合成为糖类等有机物，所
17、以含氨的无机培养基可以筛选硝化细菌，B 正确；酵母菌是异养生物，不能用含氨的无机培养基筛选，硝化细菌对青霉素敏感，含青霉素培养基不能用于硝化细菌的筛选，C错误；综上分析，含青霉素培养基可以用于筛选酵母菌，伊红美蓝培养基是专一鉴别大肠杆菌的培养基，D 错误。6. 【答案】A【解析】消毒是用比较温和的物理或化学方法杀死部分微生物的方法，不包括芽孢和孢子，灭菌是用强烈的物理或化学方法杀死一切微生物包括芽孢和孢子。皮肤应进行消毒，饮用水应进行消毒，牛奶应进行消毒，注射器应进行灭菌，培养皿应进行灭菌，接种环应进行灭菌，培养基应进行灭菌，果汁应进行消毒，酱油应进行消毒，手术刀应进行灭菌。综上所述，需要中进
18、行消毒的是。A 正确。7. 【答案】A【解析】倒平板时用左手使培养皿打开稍大于锥形瓶瓶口的缝隙，错误；等待平板冷却 5l0min，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，防止皿盖上冷凝的水珠滴落在培养基上，正确；右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰，杀灭瓶口可能存在的杂菌，正确；培养基灭菌后，等培养基冷却至 50左右时倒平板，错误；右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖，防止杂菌落入，正确。A 正确。8. 【答案】C【解析】制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本过程为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板五个步骤。步骤表示倒平板，在倒平板之前培养基已经灭菌，A 正确；图中操作结束后需在培养基皿上标注菌
19、种及接种日期等信息，B 正确；在 5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落，C 错误；步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，D 正确。9. 【答案】B【解析】该图最可能是用平板划线法进行接种，A 正确；平板划线法适于微生物的分离纯化，不适于计数，B 错误；在操作时，为防止杂菌污染，需进行严格的消毒和灭菌，C 正确；为了检测培养基是否有杂菌污染，可将未接种的培养基放在相同条件下培养，D 正确。10. 【答案】C【解析】由于 1、2 号试管稀释倍数较小，试管中细菌数目较多，而 6 号试管中细菌数目较少，所以用稀释涂布平板法统计细菌菌落数时，一般选择图中试管3、4、5 中的
20、稀释液来涂布平板，C 正确。11. 【答案】D2【解析】制备固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，A 错误；在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基之前，可以通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物，但是如果样品中所要筛选的微生物数量较多，这一步可以省略，B 错误；配置培养不同微生物的培养基时都要将 pH 调至能够满足该种微生物的需要，C 错误；获得纯净培养物的关键是无菌操作，防止外来杂菌入侵，D 正确。12. 【答案】D【解析】高压灭菌加热结束时，当压力表的压力降到零时，打开排气阀，打开盖子，如果提前打开排气阀，锅内压力突然下降，灭菌容器内
21、液体会冲出容器，造成污染，A 错误；倒平板时，培养皿盖打开一缝隙，不能放到一边，B 错误；接种时，接种环经火焰灭菌冷却后挑取菌落，不能趁热挑取，以免杀死微生物，C错误；由于平板倒过来放置，则用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D 正确。13. 【答案】C【解析】对于频繁使用的菌种,可采用临时保存法保藏，A 错误；甘油管藏法保存菌种是一种长期保存菌种的方法，需要用液体培养基保存，B 错误；临时保存法的温度一般设置为 4，甘油管藏法一般保存温度为-20，C 正确；临时保存法需要每 36 个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上，甘油管藏法没有这样的要求，D 错误。14. 【答案】B【解析】
22、以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，能使酚红指示剂变红，B 正确。15. 【答案】C【解析】制备浸出液的土壤取自土壤的表层与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，A 错误；涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌可能会造成污染，与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，B 错误；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源，该操作对实验影响最大，C 正确；接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒，可能会造成污染，但与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，D 错误。16. 【答案】B【解析】不同细菌在固体培养基
23、上形成的菌落大小、颜色、隆起程度等特征不同，可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型，但不能看到细菌个体有无荚膜，A 正确，B 错误；纤维素可以与刚果红结合形成红色，纤维素被纤维素分解菌分解后，会在菌落周围形成无色的透明圈，所以可利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌，C 正确；尿素被分解后，可产生碱性物质氨，使酚红指示剂变红，所以在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂可鉴定尿素分解菌，D 正确。17. 【答案】C【解析】筛选能够利用多环芳烃为碳源的菌种，则在被原油污染的土壤中应该含有，所以配置来源于被原油污染的土壤稀释液，A 正确；配置选择性培养基，该培养基与通用培
24、养基成分的主要区别是以原油（多环芳烃）为唯一碳源，B 正确；在无菌环境下，将土壤稀释液接种到选择培养上，将土壤稀释液灭菌后会杀死原有菌种，C 错误；题干有个信息“有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈” ，所在选择性培养基上能形成分解圈的即为所需菌种，D 正确。18. 【答案】D【解析】刚果红不能与淀粉形成红色复合物，A 错误；有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈，出现透明圈的菌落不一定是纤维素分解菌。B 错误。倒平板时加入刚果红溶液，需要经过微生物的培养过程才能检测培养基中纤维素的有无，需要灭菌，C 错误；在菌落形成后加入的
25、刚果红溶液可直接检测培养基中纤维素的有无，不需要灭菌，D 正确。19. 【答案】A【解析】经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物。20. 【答案】B【解析】根据图 b 可知，乙菌落靠近甲菌落的位置生长受到抑制，说明甲菌产生了抑制乙菌生长的抗生素，正确；丙菌、丁菌菌落生长正常，说明丁菌不产生抑制病菌生长的抗生素，错误，B 正确。21. 【答案】 植酸钙 灭菌 3 单个菌落 菌落数 3 C10 6 接种环 灼烧、冷却【解析】 （1）因为要分离产植酸酶的菌株，故培养基要添加植酸钙
26、，还要有碳源、氮源、水、无机盐等基本营养物质（2）防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行灭菌。（3）接种所用的平板划线法和稀释涂布法，目的都是在培养基表面形成单个菌落。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数就能大致推测出样品中的活菌数通常每种稀释液需涂布 3 个平板，取其平均值 将最后一个试管中的菌液每次吸取 0.1mL 涂布培养后获得平均值是 C，则1g 土壤中含有此菌的菌株数是 C106。 （4）对上述菌株进行纯化，通常使用的划线工具是接种环。在第一区域划线后须将该工具灼烧灭菌后再划线。22. 【答案】 （1）尿素 氧气浓度在 5%8%左右 （2）脲酶将培养基中的尿素
27、分解成氨，该物质的水溶液会使酚红指示剂呈现红色（3）稀释涂布平板 小 有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的【解析】 （1）根据提供信息分析，幽门螺杆菌体内含有脲酶，能够降解尿素，所以应该将幽门螺杆菌接种在以尿素为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在氧气浓度在 5%8%左右条件下，倒置于 37的恒温培养箱中培养。 （2）幽门螺杆菌体内的脲酶能够将培养基中的尿素分解成氨，该物质的水溶液会使酚红指示剂呈现红色，所以可以用添加酚红指示剂的培养基鉴定幽门螺杆菌。 （3）微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以用于计数。该方法一般通过统计菌落的数量代表菌体的数量；用于有些活菌在培养过程中死亡、有些菌落是由多个活菌共同形成的，所以统计的数据往往比真实值小。23. 【答案】 （1）葡萄糖苷（2）接种环 灼烧（3）红 倒平板 第一种【解析】 （1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 C1酶、C X酶和葡萄糖苷酶。 （2）平板划线法接种菌种的工具是接种环；操作时采用的灭菌方法是灼烧。 （3）刚果红可以与纤维素等多糖形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应；常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在倒平板时就加入刚果红。其中第一种方法会使菌落之间发生混杂。
