1、1现代生物科技专题12018全国卷生物选修 3：现代生物科技专题回答下列问题：(1)博耶(H. Boyer)和科恩(S. Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_(答出两点即可)。(2)体外重组的质粒可通过 Ca2 参与的_方法导入大肠杆菌细胞；而体外重组的噬菌体 DNA通常需与_组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体 DNA导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是_。(3)真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解
2、，在实验中应选用_的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加_的抑制剂。答案：(1)体外重组的质粒可以进入受体细胞；真核生物基因可在原核细胞中表达(2)转化 外壳蛋白(或答噬菌体蛋白) 细菌 (3)蛋白酶缺陷型 蛋白酶解析：(1)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌中，该过程利用的技术是基因工程。该研究除了证明质粒可作为载体外，还证明了体外重组的质粒可以进入受体细胞，真核生物基因可在原核细胞中表达等。(2)重组质粒导入大肠杆菌细胞可采用Ca2 参与的转化方法；体外重组噬菌体要通过将体外重组的噬菌体 DNA和外壳蛋白(或噬菌体蛋白)进行组装获得；因为噬菌体是专门寄生在细菌中的
3、病毒，所以宿主细胞选用细菌。(3)为防止蛋白质被降解，在实验中应选用蛋白酶缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞；在蛋白质纯化过程中，为防止目的蛋白质被降解，需要添加蛋白酶的抑制剂。22018全国卷生物选修 3：现代生物科技专题某种荧光蛋白(GFP)在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白(L1)基因连接在 GFP基因的 5末端，获得了 L1GFP 融合基因(简称为甲)，并将其插入质粒 P0，构建了真核表达载体 P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中 E1E4 四种限制酶产生的黏性末端各不相同。回答下列问题：(1)据图推断，该团队在
4、将甲插入质粒 P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_。2使用这两种酶进行酶切是为了保证_，也是为了保证_。(2)将 P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明 L1基因在牛的皮肤细胞中完成了_和_过程。(3)为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的_移入牛的_中、体外培养、胚胎移植等。(4)为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用 PCR方法进行鉴定，在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的_(填“mRNA” “总 RNA”或“核 DNA”)作为PCR模板。答案：(1)E1 和 E4 甲的完整 甲与载体正确连接 (2)转录 翻译 (
5、3)细胞核 去核卵母细胞 (4)核 DNA解析：(1)由题意可知，L1 基因和 GFP基因合成了 L1GFP融合基因(简称为甲)，题图中显示了四个酶切位点，当将 L1GFP融合基因插入质粒 P0时，可用 E1和 F4限制酶进行酶切，用这两种酶进行酶切不会破坏甲的完整性，同时能保证甲按照正确的方向与载体连接。(2)若在牛皮肤细胞中观察到了绿色荧光，则说明 L1GFP融合基因得到表达，即目的基因在受体细胞中通过转录和翻译合成了荧光蛋白。(3)为了获得含有甲的牛，可将含有目的基因的细胞的细胞核移入牛的去核卵母细胞中，然后进行体外培养、胚胎移植等。(4)利用 PCR技术扩增目的基因，可以检测目的基因是
6、否存在。PCR 扩增的模板是 DNA。32019四川成都经开区实验中学月考下面是将四倍体兰花的叶片通过植物组织培养形成植株的示意图，请结合图解回答相关问题：四 倍 体 兰 花 叶 片 愈 伤 组 织 胚 状 体 植 株(1)选取四倍体兰花叶片时，要选择_的叶片；剪下叶片后需要经过一系列的消毒过程，一般先用流水冲洗 20 min左右，在无菌操作台上用体积分数为_的酒精消毒 30 s，取出后在无菌水中清洗，再用_溶液处理 30 min，立即用无菌水冲洗23 次。(2)离体组织培养常用 MS培养基，其主要成分包括大量元素、微量元素、有机物(如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素以及_等)，在配制好的 MS培养
7、基中，常常需要添加植物激素，其中，_和_是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。(3)过程称为_；从、的结果看，它们的实质都是_。答案：(1)生长旺盛(或幼嫩) 70% 次氯酸钠 (2)蔗糖 生长素 细胞分裂素 (3)脱分化 基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果解析：(1)生长旺盛的(幼嫩)叶片其细胞分裂能力强，全能性较高，有利于组织培养，叶片消毒时，一般先用流水冲洗 20 min左右，在无菌操作台上用体积分数为 70%的酒精消毒 30 s，取出后用无菌水清洗，再用次氯酸钠溶液处理 30 min，最后用无菌水冲洗 233次。(2)离体组织培养常用 MS培养基，其主要成分包括大量元素、
8、微量元素、有机物(如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素以及蔗糖等)；在配制好的 MS培养基中，常常需要添加植物激素，其中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。(3)过程称为脱分化，是再分化，、的实质都是基因的选择性表达。42019宁夏银川一中月考甲图为牛胚胎移植示意图，乙图为胚胎发育某时间示意图。请据图回答：(1)甲图牛胚胎移植过程中，用_(填激素名称)处理使供体母牛超数排卵。冲卵的实质是获得_。(2)冲卵后，对胚胎进行质量检查，这时的胚胎应发育到_或_阶段。收集的胚胎可直接向受体移植，方法有_、_；或放入_中保存。(3)胚胎移植时，早期胚胎容易从供体中收集的生理基础是_。(4)
9、乙图中 1是_，4 是_；将来发育成胎儿各种组织的是_。答案：(1)促性腺激素 早期胚胎 (2)桑椹胚 囊胚 手术法 非手术法 (196 )液氮 (3)早期胚胎形成后，在一定时间内不会与母体子宫建立联系，处于游离状态 (4)滋养层 囊胚腔 内细胞团解析：(1)给供体母牛注射促性腺激素可促使其超数排卵；冲卵的实质是获得早期胚胎。(2)冲卵后，对胚胎进行质量检查，这时的胚胎应发育到桑椹胚或囊胚阶段。收集的胚胎可通过手术法和非手术法直接向受体移植，或放入196 的液氮中保存。(3)早期胚胎形成后，在一定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系，处于游离状态，所以可以从母体内通过冲卵获得早期胚胎供胚胎移植
10、所用。(4)乙图的 1为滋养层，4 为囊胚腔；滋养层将来发育成胎膜和胎盘，内细胞团将来发育成胎儿的各种组织。52019东北三省四市教研联合体模拟2018 年 1月 25日， 细胞杂志报道了我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶(Kdm4d)的 mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物食蟹猴，作为研究癌症等人类疾病的动物模型。如图为体细胞核移植技术培育食蟹猴的操作过程，请回答：4(1)2001年，美国科学家已经培育出胚胎细胞核移植猴。获得食蟹猴的体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是_。(2)进行过程时，为提供成纤维细胞培养所需的无毒环境，应进行的实验措施是_，其目的是_。
11、(3)据图分析，过程是利用_法将成纤维细胞注入猴去核的 M中期卵母细胞的_。(4)图中过程的实质是早期胚胎在_条件下空间位置的转移。(5)上述实验的突破之处是使用了去甲基化酶(Kdm4d)的 mRNA，在确定其作用时，研究人员用正常培养液培养融合细胞得到 A组实验数据，用正常培养液培养注入去甲基化酶(Kdm4d)mRNA的融合细胞得到 B组实验数据。图中 X为融合细胞发育成的胚胎数、 Y为囊胚数、 Z为内细胞团数。分析实验数据可知，Kdm4d 的 mRNA的作用是既能提高_，又能提高_。答案：(1)体细胞分化程度高，恢复其全能性较难 (2)定期更换培养液 防止成纤维细胞代谢产物的积累对细胞自身
12、造成危害 (3)显微注射 卵细胞膜与透明带之间 (4)相同生理 (5)融合细胞发育成囊胚的成功率 囊胚中内细胞团的形成率解析：(1)与胚胎细胞相比，动物体细胞的分化程度高，恢复其全能性更难，因此利用体细胞核移植难度更大。(2)动物细胞培养过程中，应定期更换培养液，其目的是防止代谢产物的积累对细胞自身造成危害。(3)过程是核移植过程，通过显微注射的方法将供体细胞注入 M中期卵母细胞的卵细胞膜与透明带之间。(4)胚胎移植时要求供体与受体具有相同生理状态。(5)从图中数据可知，与 A组相比，B 组的融合细胞(注入了 Kdm4d的 mRNA)发育成囊胚的成功率和囊胚中内细胞团的形成率都较高。62019
13、江西四校联考应用生物工程技术可获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：5(1)在培育转人生长激素基因牛过程中，过程常用的方法是_，采用胚胎分割技术对处在_的胚胎进行分割，可以获得多头基因型相同的转基因牛。这些基因型相同的转基因牛的产生属于_繁殖。(2)转人生长激素基因牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，在构建基因表达载体时，人生长激素基因的首端必须含有_。(3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，代表的细胞具有_的特点。(4)在抗虫棉培育过程中，过程常采用的方法是_；过程采用的技术是_；在分子水平上可采用_法来检测转基因抗虫棉的抗虫基因是否
14、成功表达。(5)下面是获取目的基因的几种方法，其中核酸序列要求已知的是_。从基因组文库中获取目的基因利用 PCR技术扩增目的基因构建 cDNA文库的目的基因通过 DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因A BC D(6)当获能后的精子与卵子相遇时，首先发生_，释放出有关的酶直接溶解卵丘细胞间的物质，形成精子穿越放射冠的通路。防止多精入卵的生理反应依次有透明带反应、_。答案：(1)显微注射法 桑椹胚或囊胚 无性 (2)牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件(不可只答启动子) (3)既能无限增殖，又能产生特定抗体 (4)农杆菌转化法 植物组织培养 抗原抗体杂交 (5)C (6)顶体反应 卵细胞膜反应解析
15、：(1)将目的基因导入动物受精卵的常用方法是显微注射法。采用胚胎分割技术对处在桑椹胚或囊胚期的胚胎进行分割，可以获得多个基因型相同的个体，这种繁殖方法属于无性繁殖。(2)若通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，在构建基因表达载体时，目6的基因的首端必须含有牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件。(3)在制备单克隆抗体时，经检测、筛选后得到的细胞既能无限增殖，也可以产生特定的抗体。(4)在抗虫棉培育过程中，将目的基因导入受体细胞常用的方法是农杆菌转化法，再通过植物组织培养技术将受体细胞培育成抗虫棉。在分子水平上可采用抗原抗体杂交技术来检测抗虫基因是否成功表达。(5)利用 PCR技术扩增目的基因所使用的引物是根据一段已知目的基因的核苷酸序列合成的，而通过 DNA合成仪用化学方法人工合成目的基因时，需要知道目的基因的全部核苷酸序列，故选 C。(6)精子与卵子相遇时，首先发生顶体反应，使顶体内的酶释放出来。防止多精入卵的生理反应有透明带反应和卵细胞膜反应。
