1、ICS 65.020.30 B 41 DB51 备案号：30915-2011 四川省地方标准 DB51/T 13122011 鸡传染性支气管炎防治技术规范 2011 - 06 - 27 发布 2011 - 07 - 01 实施四川省质量技术监督局 发布DB51/T 13122011 I 目 次 前 言 . II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 免疫接种 2 5 免疫程序 3 6 免疫监测 3 7 样品采集、保存和运送 4 8 诊断及处理 4 9 综合防治措施 5 附录A（资料性附录） 推荐的IB基础免疫程序 7 附录B（资料性附录） 血凝抑制试验（HI）操作步骤及
2、结果评定标准 8 DB51/T 13122011 II 前 言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准由四川大学起草。 本标准起草人：王红宁、张安云、高荣、李娟、樊汶樵、张毅、郭自成、杨鑫、丁梦蝶。 DB51/T 13122011 1 鸡传染性支气管炎防治技术规范 1 范围 本标准规定了鸡传染性支气管炎免疫防治过程中免疫接种、免疫程序、免疫监测、诊断及处理以及综合防治的措施和要求。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，
3、其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 GB/T 18635 动物防疫基本术语 GB/T 23197 鸡传染性支气管炎诊断技术 NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法 兽药管理条例 动物检疫管理办法 中华人民共和国动物防疫法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 鸡传染性支气管炎 avian infec tious bronchitis (IB) 鸡传染性支气管炎是由冠状病毒属传染性支气管炎病毒引起鸡的一种急性、高度传染性呼吸道疾病，其特征为气管啰音、咳嗽和打喷嚏，产蛋鸡产蛋减少和蛋品质下降。根据病变类型，可
4、分为呼吸道型、肾型等，但以经典的呼吸道型发生最为普遍。OIE将其列为B类疫病。 3.2 免疫接种 immunization 用人工方法将免疫原或免疫效应物质输入到机体内，使机体通过人工自动免疫或人工被动免疫的方法获得防治某种传染病的能力。用于免疫接种的免疫原（即特异性抗原）、免疫效应物质（即特异性抗体）等皆属生物制品。 3.3 免疫监测 immune su rveillance 免疫监测是指定期对鸡只进行特异性抗体和及HI等跟踪监测，是考核免疫是否成功的重要依据，为鸡场及时制定防疫措施，制定科学的免疫程序提出理论依据。 DB51/T 13122011 2 4 免疫接种 4.1 疫苗 4.1.1
5、 疫苗选择 按照中华人民共和国动物防疫法选择经农业部批准生产的疫苗。 4.1.2 疫苗运输和贮藏 4.1.2.1 在运输、贮藏过程中，必须按疫苗保存要求进行运输、贮藏。 4.1.2.2 疫苗的运输和贮藏应有完善的管理制度。 4.1.2.3 疫苗的入库和发放必须做好详细的记录、记载。 4.1.2.4 疫苗的运输、贮藏和使用应符合疫苗生产厂家的相关说明。 4.2 免疫前准备 4.2.1 鸡只准备 4.2.1.1 应严格按照免疫程序选择待免疫鸡群。 4.2.1.2 应选择健康鸡群进行免疫，病鸡、弱鸡要待康复后再免疫。 4.2.2 疫苗准备 4.2.2.1 冻干疫苗应在常温下解冻和使用，接种前将疫苗充
6、分混合均匀。 4.2.2.2 疫苗的使用单位及个人应对使用的每批次疫苗留样，并至少保存半年。 4.2.2.3 应确保使用的疫苗在有效保质期内，且无色泽异常、异物、发霉等问题。 4.2.2.4 凡因破损、疫苗变色、过期等问题不能使用的疫苗，均应进行高温消毒处理，避免随意到处乱扔。 4.2.3 器械准备 4.2.3.1 注射免疫：免疫接种用的注射器和针头，应在使用前对注射器和针头进行清洗，并高压灭菌或煮沸消毒至少 15 min。 4.2.3.2 点眼、滴鼻免疫：免疫用的器皿应清洁，无洗涤剂和消毒剂残留。 4.3 接种操作 接种方法有：注射、点眼、滴鼻等。 4.3.1 注射 注射部位可选择颈部皮下注
7、射或胸部肌肉、翼根内侧肌肉和腿部外侧肌肉注射。雏鸡颈部皮下注射时先用左手拇指和食指将雏鸡颈背部皮肤轻轻捏住并提起，右手持注射器将针头刺入皮肤与肌肉之间，然后注入疫苗液。 4.3.2 点眼 用一只手轻握住鸡头，使其不乱动，另一只手拿点眼瓶，向左右眼睛各轻轻点一滴，待该鸡做完一个眨眼动作，药液完全进入眼中吸收后再松开。 4.3.3 滴鼻 DB51/T 13122011 3 用一只手握住鸡颈部使其不能动，另一只手拿滴鼻瓶朝鸡鼻孔左右各轻滴一滴，也要待鸡完成一次呼吸，完全将药液吸入鼻孔内后，左手方可松开鸡。 4.3.4 注意事项 4.3.4.1 注射免疫时，针筒排气溢出的疫苗应吸于酒精棉球上，使用的酒
8、精棉球和废弃的疫苗空瓶应集中进行无害化处理。 4.3.4.2 点眼、滴鼻时，应保证疫苗在眼睛和鼻孔完全吸收。 4.3.4.3 免疫剂量参照疫苗说明书。 5 免疫程序 5.1 免疫程序 采用弱毒疫苗作基础免疫，灭活疫苗联苗加强免疫的方法。弱毒疫苗（滴鼻、点眼）和灭活疫苗（注射）同时进行。对感染途径进行占位。避免使用不同活毒株，以减少重组。在发病鸡场建议用本场毒株灭活疫苗补充免疫，多毒株混合感染的可以使用本地区IBV分离株制成多价灭活苗免疫。免疫程序应根据抗体监测结果进行制订。附录A为推荐的规模化鸡场传染性支气管炎的基础免疫程序，各鸡场应根据血清抗体检测结果进行对免疫程序做适当调整。 5.2 免疫
9、档案 5.2.1 免疫完成后建立鸡群免疫档案。免疫档案内容包括鸡场主姓名、鸡品种、年(月、日)龄、免疫日期、疫苗名称、疫苗批号、疫苗厂家、疫苗销售商、防疫员签字等。 5.2.2 免疫档案的保存与管理应符合中华人民共和国动物防疫法的相关规定。 6 免疫监测 6.1 免疫监测时间 疫苗接种后 14 d21 d 进行免疫监测样品采集。 6.2 采样比例 雏鸡、育成鸡以及种鸡按照免疫鸡群总数舍0.1%的比例采样， 但每舍不得少于15份， 常规采样2030份即可。比例进行免疫监测血清样品采集。 6.3 样品的采集、保存和运输 使用鸡血清作为免疫抗体监测对象。雏鸡采血部位为颈静脉，育成鸡和种鸡采血部位为翅
10、静脉。血样品的采集、处理、保存和运输方法按NY/T 541执行。 6.4 免疫监测方法和结果判定 对血清样品采用血凝抑制试验（HI）进行鸡传染性支气管炎抗体检测，操作方法及结果判定见附录B。 6.5 免疫监测结果的处理 DB51/T 13122011 4 6.5.1 及时分析监测结果，提出处理方案并执行，应对免疫抗体有效率低于 70%的鸡群实行该种疫苗的补免。 6.5.2 监测结果由养殖场自行备案。 7 样品采集、保存和运送 按NY/T 541执行。 8 诊断及处理 8.1 诊断指标 8.1.1 流行病学 本病潜伏期为36 h或更长。病鸡和带毒鸡是本病重要的传染源，主要传播方式是飞沫传染。各种
11、年龄的鸡都可发病，但雏鸡最为严重。本病无季节性，传播迅速，营养不良、饲养管理不当、卫生条件差等应激因素均可促使本病的发生。 8.1.2 临床症状 8.1.2.1 本病基本特征为病鸡场常看不到前驱临诊症状，突然出现呼吸临诊症状，并迅速波及全群。4周龄以下的鸡常表现伸颈、张口呼吸，喷嚏、咳嗽、啰音，全身衰弱，精神不振，食欲减少，羽毛松乱，昏睡，翅下垂。 8.1.2.2 种鸡及成年蛋鸡 IBV 发病率高，但死亡率低。主要表现在产蛋量下降，孵化率下降，软蛋壳、蛋清稀薄、畸形蛋及壳面粗糙；多伴随呼吸道症状。 8.1.2.3 呼吸型传染性支气管炎多发生于雏鸡，表现为张口呼吸，喷嚏、咳嗽、啰音等呼吸道症状发
12、病率和死亡率 25%以上。 8.1.2.4 肾型传染性支气管炎多发生于 2 周龄4 周龄的鸡，呼吸道症状轻微或不出现，或呼吸临诊症状消失后，病鸡极度沉郁，饮水量增加，持续排白色或水样下痢，迅速消瘦，死亡率为 10%40%。 8.1.2.5 腺胃型病变主要引起食欲下降、精神不振，羽毛蓬松，站立不起，采食饮水急剧下降，拉黄色或绿色稀粪。 8.1.2.6 肠型病变主要表现为脱水、呼吸道症状，严重时粪便中有尿酸盐结晶。 8.1.3 病理变化 8.1.3.1 种鸡及成年蛋鸡剖解后主要表现为输卵管水肿及各类器官或组织嗜性型病变 8.1.3.2 呼吸型传支主要是器官黏膜水肿，如果涉及气囊，24 h 内将会出
13、现水肿、上皮细胞脱落及一些纤维蛋白性渗出物。之后，还可观察到增多的异嗜细胞、淋巴小结及纤维细胞和立方上皮增生。 8.1.3.3 肾型传支病理变化主要病变是间质性肾炎。肾小管上皮细胞颗粒变性、空泡形成及脱落；急性期还可见间质中大量异嗜细胞浸润。肾小管病变主要是髓质中，不仅能看到局灶坏死，也能观察到肾小管上皮的再生趋势。严重病例，白色尿酸盐沉积可见于其他组织器官表面。某些病例退行性变持续存在并导致一部分或整个肾萎缩。 8.1.3.4 腺胃病变主要表现为皮下或肠膜几乎没有脂肪，腺胃极度肿胀，呈球型，壁增厚 2 倍3 倍，胃黏膜出血、溃疡，现为乳头平整融合，轮廓不清，可挤出脓性分泌物。 8.1.3.5
14、 肠型病变的的病例，气管中可见过多的黏液，表皮肿胀，可引起肾脏和输卵管损坏。 DB51/T 13122011 5 8.1.4 实验室诊断 8.1.4.1 病原学诊断 8.1.4.1.1 病毒分离鉴定：按照 GB/T 23197 执行。 8.1.4.1.2 反转录-聚合酶链式反应诊断：按照 GB/T 23197 执行（即针对 M 蛋白基因和 3UTR 设计了2 对引物进行扩增，定性检测是否为 IBV）。若要对病毒进行分型鉴定，则需针对 S1 蛋白全基因设计引物，并进行序列测定后聚类分析。 8.1.4.2 血清学诊断 (1) 微量血凝抑制试验：按照GB/T 23197执行。 (2) 气管环组织培养
15、血清中和试验：按照GB/T 23197执行。 (3) 酶联免疫法ELISA检测：采用进口IDEXX试剂盒，并严格按照操作方法执行。但由于试剂盒进口，成本较高，若国产化后，成本会大大降低。 8.1.5 结果判定 8.1.5.1 参照临床症状 8.1.2 和病理变化 8.1.3，可以判定为 IBV 疑似病例。 8.1.5.2 对于未接种过 IBV 疫苗，8.1.4 任何一种方法检测出阳性结果时，都可最终判断为 IBV 感染鸡群。 8.1.5.3 对接种过 IBV 疫苗的鸡只，当采用 8.1.4 的实验方法检测为阳性时，用需采用 8.1.4.1.2 的方法， 即对 S1 基因 PCR 测序结果与疫苗
16、株比对， 检测结果与疫苗株序列不一致时， 可以确定为感染 IBV。 8.2 处理 8.2.1 目前，还没有特别有效的药物可以用于 IB 的临床治疗。对发病鸡群要注意保暖、通风换气和带鸡消毒，适当增加多维用量。使用抗生素可以控制继发感染。针对检测结果可做以下处理： 8.2.1.1 对血清学试验结果呈阳性但是滴度不整齐的样品，及时采用传染性支气管炎灭活疫苗进行补充免疫。 8.2.1.2 对最终判定为 IBV 感染鸡只，通过聚类分型分析，采用与该流行株相同血清型的疫苗进行补充免疫；也可将发病鸡只送专业实验室确诊，分离病毒。大型鸡场可以用本场毒株在 GMP 生产企业定制灭活疫苗补充免疫，多毒株混合感染
17、的可以使用本地区 IBV 分离株制成多价灭活苗免疫。 8.2.2 用肾肿解毒药加速尿酸盐的排泄可以缓解症状减少鸡只的死亡。给予复方口服补液盐或碳酸氢盐，可以补充钾、钠的损失。对采用处理措施后，病症不好转或产蛋等指标得不到恢复的鸡只，及时淘汰。 8.2.3 病死鸡及被病毒污染的物品按照 GB 16548 要求进行处理。 9 综合防治措施 9.1 消毒 严格执行消毒措施，坚持作好预防性消毒，保护鸡群不受IBV的感染。按照规模化（蛋鸡、种鸡、商品肉鸡）鸡场消毒技术规范（DB51/T 2011）执行。 9.2 饲料 DB51/T 13122011 6 给予优质饲料，并在饲料中添加适量维生素和矿物质，适
18、当降低饲料中的蛋白含量，以增强鸡体的抵抗力。防止饲料霉变。 9.3 饲养环境 控制饲养密度，防止鸡群因过分拥挤导致卫生状况恶化，使鸡群的整体抗病能力下降。尽可能减少各种应激因素，如温度、水、电、通风换气等保持正常稳定。其是在冬季，既要加强鸡舍内的空气流通，防止有害气体的滞留，使鸡舍空气中氨的含量不超过5 ppm，硫化氢的含量不超过1 ppm，二氧化碳的含量不超过0.2%；同时又要保持鸡舍内具有适度的温度和湿度。 9.4 全进全出制度 对鸡只实行全进全出，空场不少于14 d，并对全场进行彻底清洗、消毒。进雏后，定期使用刺激性较小的消毒剂进行带鸡消毒，以减少病原微生物和尘埃的污染，尽可能地减少呼吸
19、道疾病的发生，减少和控制继发感染和合并感染。 9.5 预防及监测 对于无IB发生的鸡场要积极防范， 采取严格的综合性防制措施，禁止从疫区或不安全的种鸡场引种，严防本病的传入。对IB的预防，要根据当地的生产实际和IB以及其它疫病流行的情况综合制定科学的免疫程序，作好疫情的监测，并根据免疫的实际效果和变异毒株的出现适时调整。 DB51/T 13122011 7 AA 附 录 A （资料性附录） 推荐的 IB 基础免疫程序 日龄/品种 种鸡 蛋鸡 肉鸡 3日龄 Ma5,w93等根据情况选1种，点眼、滴鼻 Ma5,w93等根据情况选1种，点眼、滴鼻 Ma5,w93等根据情况选1种，点眼、滴鼻 7日龄
20、H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） 35日龄 H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） 110日龄 H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） 180-220日龄
21、 H120点眼、滴鼻+IB 油苗（有流行的鸡场用加本地流行株的多价苗） 注： H120： IB 弱毒疫苗产品之一，通过分别接种敏感鸡胚，收获感染胚液，加适当稳定剂，经冷冻真空干燥制成，为常用IBV 弱毒疫苗产品。 Ma5： IB 弱毒疫苗产品之一，通过分别接种敏感鸡胚，收获感染胚液，加适当稳定剂，经冷冻真空干燥制成，为常用 IBV 弱毒疫苗产品。 W93： IB 弱毒疫苗产品之一，通过分别接种敏感鸡胚，收获感染胚液，加适当稳定剂，经冷冻真空干燥制成，为常用 IBV 弱毒疫苗产品。 IB 油苗： IB 灭活疫苗，通过灭活IBV，辅之油佐剂制成的IB 疫苗。 DB51/T 13122011 8 B
22、B 附 录 B （资料性附录） 血凝抑制试验（HI）操作步骤及结果评定标准 B.1.1 抗原的制备 将含病毒的未经冻融的尿囊液以3500 r/min离心30 min，去上清以2104 r/min离心1 h后取沉淀用原体积1/100的HA缓冲液充分悬浮后置4 8 h ，再以3000 r/min 离心20 min ，取上清加入10%A 型魏氏梭菌滤液，充分混合后置37水浴感作2 h（每隔10 min 用漩涡仪震荡一次）。取出病毒液置4，48 h后使用。 B.1.2 待测血清处理方法 取0.1 ml 血清加 0.3 ml 25%高岭土悬液，震荡混匀置371 h ，6000 r/min离心 15 min，取上清56灭活30 min后再加入鸡浓血球0.05 ml ，混匀后37水浴30 min；3000 r/min离心 10min即可得到1:4 稀释的待试血清。 B.1.3 HA 及 HI 试验操作步骤 使用V 型或U 型的 96孔微量反应板，以HA缓冲液作为稀释液，操作方法按常规HI 试验方法进行。 B.1.4 结果判定标准 免疫后平均抗体效价应显著升高。免疫后2周3 周平均几何抗体效价（GMT ）必须至少是免疫前预期效价的4倍，或至少为免疫前平均抗体效价的4倍。 _
