1、 ISO 2013 Produits drivs de lamidon Dtermination de la composition des sirops de glucose, des sirops de fructose et des sirops de glucose hydrogns Mthode par chromatographie en phase liquide haute performance Starch derivatives Determination of the composition of glucose syrups, fructose syrups and
2、hydrogenated glucose syrups Method using high-performance liquid chromatography NORME INTERNATIONALE ISO 10504 Deuxime dition 2013-09-01 Numro de rfrence ISO 10504:2013(F) ISO 10504:2013(F)ii ISO 2013 Tous droits rservs DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2013 Droits de reproduction rservs. Sauf indica
3、tion contraire, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie, laffichage sur linternet ou sur un Intranet, sans autorisation crite pralable. Les demandes dautorisation peuvent
4、tre adresses lISO ladresse ci-aprs ou au comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ISO 10504:2013(F)Sommaire Page Avant-propos iv 1 Domain
5、e dapplication . 1 2 Rfrences normatives . 1 3 Principe 1 4 Ractifs . 1 5 Appareillage 2 6 Mode opratoire 3 6.1 Choix de la colonne 3 6.2 Mise en marche du systme . 3 6.3 talonnage de la colonne . 3 6.4 Prparation de lchantillon 4 6.5 Analyse de lchantillon . 5 7 Calcul 5 8 Fidlit 5 8.1 Rptabilit 5
6、8.2 Reproductibilit . 6 Annexe A (informative) Exemples de solutions talons . 7 ISO 2013 Tous droits rservs iii ISO 10504:2013(F) Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration de
7、s Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux
8、travaux. L ISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les procdures utilises pour laborer le prsent document et celles destines sa mise jour sont dcrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en
9、particulier de prendre note des diffrents critres dapprobation requis pour les diffrents types de documents ISO. Le prsent document a t rdig conformment aux rgles de rdaction donnes dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www. iso.org/directives). Lattention est appele sur le fait que certains d
10、es lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. Les dtails concernant les rfrences aux droits de proprit intellectu
11、elle ou autres droits analogues identifis lors de llaboration du document sont indiqus dans lIntroduction et/ou dans la liste des dclarations de brevets reues par lISO (voir www.iso.org/brevets). Les appellations commerciales ventuellement mentionnes dans le prsent document sont donnes pour informat
12、ion, par souci de commodit, lintention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement. Pour une explication de la signification des termes et expressions spcifiques de lISO lis lvaluation de la conformit, ou pour toute information au sujet de ladhsion de lISO aux principes de lOMC concern
13、ant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos Informations supplmentaires. Le comit charg de llaboration du prsent document est le Comit de Projet ISO/PC 271, Systmes de management de la conformit. Cette deuxime dition annule et remplace lISO 10504:1998, dont ell
14、e constitue une rvision mineure.iv ISO 2013 Tous droits rservs Produits drivs de lamidon Dtermination de la composition des sirops de glucose, des sirops de fructose et des sirops de glucose hydrogns Mthode par chromatographie en phase liquide haute performance 1 Domaine dapplication La prsente Norm
15、e internationale spcifie une mthode danalyse par chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP) pour dterminer la composition de solutions de dextrose, de sirops de glucose, de sirops contenant du fructose, de sirops de glucose hydrogns, du sorbitol, du mannitol et du maltitol. Les consti
16、tuants sont, principalement, le glucose, le maltose, le maltotriose, le fructose, le sorbitol, le mannitol, le maltitol et les maltooligosaccharides. Lutilisation dune colonne garnie dune rsine changeuse de cations est indispensable. 2 Rfrences normatives Les documents ci-aprs, dans leur intgralit o
17、u non, sont des rfrences normatives indispensables lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire usage a
18、nalytique Spcification et mthodes dessai ISO 5381:1983, Produits dhydrolyse de lamidon ou de la fcule. Dosage de leau. Mthode Karl Fischer modifie 3 Principe Les diffrents saccharides sont spars par chromatographie en phase liquide haute performance. La sparation est obtenue en utilisant une colonne
19、 changeuse de cations avec de leau comme luant. Les luats sont dtects par un rfractomtre diffrentiel et quantifis laide dun intgrateur lectronique. 4 Ractifs Tous les ractifs utiliss doivent tre de qualit ractif analytique reconnue. 4.1 Eau distille spciale. Leau utilise peut tre de leau bidistille
20、de qualit 1 selon ISO 3696. Leau dminralise, qui vite la contamination de la rsine changeuse dions, est celle qui convient le mieux. Il convient de filtrer leau sur un filtre de 0,22 m. Il est galement recommand de la dgazer par un traitement sous vide, ou laide dun appareil de dgazage en ligne. Il
21、convient de conserver leau sous atmosphre inerte et, de prfrence, une temprature de 70 C pour inhiber la croissance microbienne. NOTE Certains dispositifs de purification deau disponibles dans le commerce permettent dobtenir de leau filtre et dgaze. NORME INTERNATIONALE ISO 10504:2013(F) ISO 2013 To
22、us droits rservs 1 ISO 10504:2013(F) 4.2 Solutions talons primaires. Prparer des solutions (voir Annexe A) dont la teneur en matire sche est infrieure ou gale 10 %, en fonction de la sensibilit du rfractomtre, et ayant une composition aussi proche que possible de celle des chantillons analyser. NOTE
23、 Des matriaux de rfrence appropris pour les constituants numrs dans lArticle 1 peuvent tre obtenus auprs dentreprises reconnues dans le domaine de la chimie. 4.3 Rsines changeuses dions, pour la dminralisation des chantillons lextrieur de lappareillage de chromatographie. Les sels prsents dans lchan
24、tillon co-luent dans la colonne et sont dtects par le rfractomtre, faussant ainsi la dtermination. Ces sels doivent donc dabord tre limins au moyen de rsines changeuses dions. Pour ce faire, la mthode la plus approprie consiste utiliser une pr-colonne en ligne comprenant un systme de cartouches (5.5
25、), mais cela peut aussi tre ralis lextrieur de lappareillage de chromatographie en utilisant les rsines suivantes 1) : a) type cation: 1) rsine de polystyrne divinylbenzne rticul 4 %, fortement changeuse de cations, sous forme H + ; 2) sous forme de poudre, granulomtrie: 200 mesh 400 mesh; b) type a
26、nion: 1) rsine de polystyrne divinylbenzne rticul 4 %, faiblement changeuse danions et contenant des groupes amines tertiaires, sous forme base libre; 2) sous forme de poudre, granulomtrie: 200 mesh 400 mesh. 5 Appareillage 5.1 Chromatographe en phase liquide, muni des quipements suivants. 5.1.1 Pom
27、pe, sans pulsation, permettant de maintenir le dbit requis un niveau constant. 5.1.2 Rfractomtre diffrentiel, thermostat 5.1.3 Four pour colonne thermostat, permettant de maintenir la colonne des tempratures allant jusqu 95 C, prcis 0,5 C prs. 5.2 Injecteur dchantillon, comprenant une boucle dinject
28、ion (manuelle ou faisant partie dun injecteur automatique) ayant une capacit infrieure ou gale 20 l. 5.3 Intgrateur, comprenant un intgrateur lectronique ayant une capacit de calcul et denregistrement, compatible avec la tension la sortie du dtecteur. 1) Bien que plusieurs rsines conformes ces spcif
29、ications soient proposes par divers fournisseurs, leurs performances sont variables. Des expriences menes dans plusieurs laboratoires ont dmontr que les rsines AG 50W-X4 et AG 3-X4 permettent dobtenir des rsultats satisfaisants. (AG 50W-X4 et AG 3-X4 sont des appellations commerciales de produits ve
30、ndus par Bio-Rad. Cette information est donne par souci de commodit lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne saurait constituer un engagement de lISO lgard de ces produits. Des produits quivalents peuvent tre utiliss sil est dmontr quils conduisent aux mmes rsultats.)2 IS
31、O 2013 Tous droits rservs ISO 10504:2013(F) 5.4 Colonne de sparation, comprenant une colonne pr-remplie changeuse de cations, sous la forme la mieux adapte lanalyse. La rsine recommande est constitue de polystyrne divinylbenzne sulfon rticul 6 %-8 %, le diamtre des particules tant compris entre 9 m
32、et 25 m. NOTE Il est possible de se procurer des colonnes de qualit acceptable auprs des principaux fournisseurs. 5.5 Pr-colonnes, systme double cartouche prpar sur mesure, mont en ligne et non chauff, pour dminraliser lchantillon. 2) 5.6 S y st me de filtr atio n de lchantillon, comprenant une seri
33、ngue sur laquelle peuvent tre adaptes des membranes filtrantes circulaires appropries. Il convient que la porosit de ces dernires soit de 0,45 m. Les sirops disponibles dans le commerce sont gnralement hautement raffins, une membrane dune porosit de 0,45 m est donc approprie. Cependant, si le chroma
34、tographe se bouche trop souvent, il est recommand dutiliser une membrane de 0,22 m de porosit. 6 Mode opratoire 6.1 Choix de la colonne Pour les applications gnrales, il convient dutiliser une rsine changeuse de cations sous forme calcium, en particulier sil sagit de sirops de fructose ou de sirops
35、de glucose hydrogns. Cependant, si la teneur en maltose est leve, sa sparation du maltotriose est difficile lorsque la teneur en maltotriose est suprieure ou gale environ 6 %. Dans un tel cas, une meilleure rsolution est obtenue avec une rsine changeuse de cations sous forme potassium ou sodium. 6.2
36、 Mise en marche du systme Installer la colonne dans le four et raccorder les pr-colonnes (5.5), si elles sont utilises, lentre de la colonne. Il nest pas ncessaire de chauffer les pr-colonnes. Raccorder linjecteur lentre de la colonne (ou des pr-colonnes si elles sont utilises) et raccorder lentre d
37、u dtecteur la sortie de la colonne. Installer le dtecteur de faon que leffluent soit vacu et limin. Mettre en marche la pompe un dbit de 0,1 ml/min et injecter le solvant dans la colonne. Rgler la colonne la temprature prconise par le fournisseur. Saisir les paramtres de commande de lintgrateur. Lor
38、sque la temprature de la colonne est stable, augmenter le dbit du solvant 0,5 ml/min et purger la cellule de rfrence. Suivre les instructions dutilisation du rfractomtre pour rgler le dtecteur de faon permettre des mesurages corrects du signal de la cellule de lchantillon. Rgler lattnuation selon ce
39、 qui est requis. 6.3 talonnage de la colonne 6.3.1 Conformment la mthode spcifie dans lISO 5381, dterminer la teneur en eau de chaque substance individuelle utilise dans la prparation des solutions talons primaires mixtes (voir Annexe A). Aucun talon nest disponible dans le commerce pour les polyols
40、 suprieurs (tri-itol et suprieurs). 6.3.2 Prparer une solution talon pour chaque substance individuelle (voir 4.2) puis, dans les mmes conditions que celles de lanalyse, injecter plusieurs fois une partie aliquote dans la colonne. Pour 2) Il existe quelques systmes disponibles sur le march mais leur
41、 efficacit est variable. Il a t dmontr dans plusieurs laboratoires que les cartouches Bio-Rad 125-0118 taient les plus efficaces tout point de vue. (Cette information est donne par souci de commodit lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne saurait constituer un engagement
42、 de lISO lgard de ces produits. Des produits quivalents peuvent tre utiliss sil est dmontr quils conduisent aux mmes rsultats.) ISO 2013 Tous droits rservs 3 ISO 10504:2013(F) le constituant principal, il convient que lcart entre trois rsultats au moins, bass sur la rponse de lintgrateur, ne dpasse
43、pas 0,1 %. Effectuer, pour chaque lment, la moyenne des rsultats danalyse. NOTE Pour les substances individuelles de dpart, on admet que la rponse relative est la mme pour tous les sucres, et que les valeurs normalises de pourcentage daire refltent la valeur vraie. Pour obtenir le niveau requis de c
44、omposs poids molculaire lev, une dextrine ou une fraction dhydrolysat damidon spcialement prpare peut tre utilise. 6.3.3 Prparer, partir des substances individuelles, des mlanges dont la composition est aussi proche que possible de celle des chantillons analyser. Il convient que ces mlanges soient p
45、rpars de faon obtenir la concentration choisie (voir 4.2). NOTE Voir lexemple donn dans lAnnexe A. 6.3.4 Injecter deux fois la partie aliquote choisie dans le chromatographe. Le volume inject doit tre suffisant pour obtenir des pics mesurables pour les constituants mineurs, et le rsultat obtenu pour
46、 le principal constituant doit se situer dans le domaine de rponse linaire du dtecteur. 6.3.5 Vrifier laire des pics sur le chromatogramme. Il convient que lcart entre les aires des pics principaux sur au moins deux chromatogrammes ne dpasse pas 0,2 %. Le facteur de rponse, r x , pour le constituant
47、 x, est calcul comme suit: r x= o m x est la teneur relle, en pourcentage, du constituant x dans la solution talon; a x est le pourcentage de laire du pic normalis attribu au constituant x. En gnral, les facteurs de rponse sont peu prs quivalents lunit. Si un cart suprieur 2 % est observ, il convient de vrifier le systme de chromatographie, et en particulier les paramtres dintgration. 6.4 P
