1、 Numro de rfrence ISO 11348-2:2007(F) ISO 2007NORME INTERNATIONALE ISO 11348-2 Deuxime dition 2007-12-01 Qualit de leau Dtermination de leffet inhibiteur dchantillons deau sur la luminescence de Vibrio fischeri (Essai de bactries luminescentes) Partie 2: Mthode utilisant des bactries dshydrates Wate
2、r quality Determination of the inhibitory effect of water samples on the light emission of Vibrio fischeri (Luminescent bacteria test) Part 2: Method using liquid-dried bacteria ISO 11348-2:2007(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres.
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8、rg Publi en Suisse ii ISO 2007 Tous droits rservsISO 11348-2:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv Introduction v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives 1 3 Principe 2 4 Interfrences . 2 5 Ractifs et matriaux 2 6 Appareillage 3 7 chantillonnage et prtraitemen
9、t des chantillons 4 8 Mode opratoire 5 9 valuation 6 10 Expression des rsultats . 9 11 Critres de validit 11 12 Fidlit . 11 13 Rapport dessai . 11 Annexe A (informative) Mthode de correction de la couleur . 12 Annexe B (informative) Niveau de dilution D Prparation des sries de dilutions. 16 Annexe C
10、 (informative) Donnes de fidlit 19 Annexe D (informative) Essai de bactries luminescentes sur des chantillons deau sale utilisant des bactries dshydrates 20 Bibliographie 24 ISO 11348-2:2007(F) iv ISO 2007 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdr
11、ation mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internation
12、ales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles d
13、onnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lappr
14、obation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de pro
15、prit et averti de leur existence. LISO 11348-2 a t labore par le comit technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 5, Mthodes biologiques. Cette deuxime dition annule et remplace la premire dition (ISO 11348-2:1998), qui a fait lobjet dune rvision technique. LISO 11348 comprend les parties s
16、uivantes, prsentes sous le titre gnral Qualit de leau Dtermination de leffet inhibiteur dchantillons deau sur la luminescence de Vibrio fischeri (Essai de bactries luminescentes): Partie 1: Mthode utilisant des bactries frachement prpares Partie 2: Mthode utilisant des bactries dshydrates Partie 3:
17、Mthode utilisant des bactries lyophilises ISO 11348-2:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs v Introduction Les mesurages spcifis dans lISO 11348 peuvent tre raliss au moyen de bactries frachement prpares, de mme quavec des prparations bactriennes lyophilises ou dshydrates. Les travaux de normalisation
18、 mens par le DIN Normenausschuss Wasserwesen et lISO/TC 147/SC 5/WG 1 ont montr que, dans certains cas particuliers, ces diffrentes techniques pouvaient donner des rsultats diffrents, notamment en prsence de mtaux lourds. Une telle varit dans la sensibilit rsulte des diffrences de composition des mi
19、lieux utiliss pour la prparation de bactries lyophilises ou dshydrates. Ces milieux protecteurs influent sur la biodisponibilit des produits toxiques et/ou sur lmission de lumire des bactries luminescentes. Cela signifie que lorigine et le type de prparation doivent tre pris en considration lors de
20、linterprtation des rsultats. Cette prise en compte peut savrer parfois difficile, du fait que les bactries lyophilises et dshydrates peuvent tre obtenues auprs de fournisseurs diffrents. Il peut donc en rsulter une mconnaissance des dtails de la composition, qui, par consquent, ne peut pas tre inter
21、prte par lutilisateur. Pour cette raison, la prsente partie de lISO 11348 comprend, en complment des mesurages de toxicit laide de bactries frachement prpares (ISO 11348-1) et de bactries lyophilises (ISO 11348-3), la description dun mode opratoire utilisant des bactries dshydrates dont les performa
22、nces peuvent tre interprtes par lutilisateur dans les moindres dtails. Les laboratoires responsables des rsultats ont lopportunit de slectionner la technique la mieux adapte, en se fondant sur des jugements dexperts et des informations relatives aux chantillons deau soumis essai. NORME INTERNATIONAL
23、E ISO 11348-2:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 1 Qualit de leau Dtermination de leffet inhibiteur dchantillons deau sur la luminescence de Vibrio fischeri (Essai de bactries luminescentes) Partie 2: Mthode utilisant des bactries dshydrates AVERTISSEMENT Il convient que lutilisateur de la prsente
24、partie de lISO 11348 connaisse bien les pratiques courantes de laboratoire. La prsente norme na pas pour but de traiter tous les problmes de scurit qui sont, le cas chant, lis son utilisation. Il est de la responsabilit de lutilisateur de mettre en place des pratiques dhygine et de scurit adquates e
25、t de sassurer de la conformit avec toutes les dispositions rglementaires nationales. IMPORTANT Il est indispensable que les essais mens selon la prsente partie de lISO 11348 le soient par du personnel qualifi. 1 Domaine dapplication LISO 11348 dcrit trois mthodes de dtermination de linhibition de la
26、 luminescence mise par la bactrie marine Vibrio fischeri (NRRL B-11177). La prsente partie de lISO 11348 spcifie une mthode utilisant des bactries dshydrates. Cette mthode est applicable: aux eaux uses; aux extraits aqueux et aux lixiviats; aux eaux douces (eaux de surface ou souterraines); leau de
27、mer ou aux eaux saumtres; aux luats de sdiments (eau douce, eau saumtre et eau de mer); aux eaux interstitielles; aux substances individuelles dilues dans leau. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates,
28、seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 5667-16, Qualit de leau chantillonnage Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques des chantillons ISO 5814, Qualit de leau Dosage de
29、loxygne dissous Mthode lectrochimique la sonde ISO 11348-2:2007(F) 2 ISO 2007 Tous droits rservs3 Principe Linhibition de la luminescence produite par des cultures de Vibrio fischeri est dtermine au moyen dun essai par lots. Celui-ci est mis en uvre par mlange de volumes spcifis de lchantillon soumi
30、s essai, ou de lchantillon dilu, et de bactries luminescentes mises en suspension dans une cuvette. Le critre suivi est la luminescence, mesure aprs un temps de contact de 15 min ou de 30 min, ou ventuellement de 5 min, prenant en compte un facteur de correction (f kt ) qui reprsente une mesure des
31、changements dintensit des tmoins pendant le temps dexposition. Leffet inhibiteur de lchantillon deau peut tre dtermin sous forme des valeurs de DMSE (voir Annexe B) ou des valeurs de CE 20et/ou de CE 50 , au moyen dune srie de dilutions (CE est la concentration effective). 4 Interfrences Des substan
32、ces insolubles, faiblement solubles ou volatiles, ou des substances qui ragissent avec leau de dilution ou avec la suspension, ou qui saltrent au cours de la priode dessai, sont susceptibles dinfluer sur les rsultats ou de nuire la reproductibilit des rsultats dessai. Les pertes de luminescence, pro
33、voques par labsorption ou la diffusion de lumire, peuvent se produire en prsence deaux fortement colores ou turbides. Cette interfrence peut tre compense en soumettant lchantillon un traitement contre la turbidit (7.2) ou, par exemple, en utilisant une cuvette de correction de labsorption double com
34、partiment (voir Annexe A). La bioluminescence 6ncessitant de loxygne, les chantillons forte demande en oxygne (et/ou possdant une faible concentration en oxygne) peuvent provoquer un dficit en oxygne et tre inhibiteurs. La prsence de substances nutritives biodgradabilit rapide dans lchantillon peut
35、provoquer une rduction de la bioluminescence indpendante de la pollution1 . Les chantillons dont le pH se trouve en dehors de la plage de pH = 6,0 pH = 8,5 affectent la luminescence des bactries 6, 7 . Un ajustement de lchantillon est ncessaire si leffet toxique du pH est indsirable. tant donn que l
36、organisme dessai Vibrio fischeri est une bactrie marine, les essais sur des chantillons deau sale suivant le mode opratoire normalis ont souvent pour rsultat une stimulation de la bioluminescence, susceptible de masquer des effets inhibiteurs (voir Annexe D). Les concentrations en sel de lchantillon
37、 initial suprieures 30 g/l de NaCl, ou les teneurs en composs autres produisant une osmolarit quivalente, peuvent conduire, en association avec ladjonction de sel requis pour lessai, des effets hyperosmotiques. Pour viter ces effets, il convient que la concentration en sel rsultante dans les chantil
38、lons soumis essai nexcde pas losmolarit dune solution de chlorure de sodium 35 g/l. 5 Ractifs et matriaux Utiliser des substances chimiques de qualit analytique reconnue. Utiliser de leau distille ou prsentant une puret quivalente. 5.1 Bactries pour essai. Utiliser une souche de bactries luminescent
39、es appartenant lespce Vibrio fischeri NRRL B-11177. Les suspensions de bactries utilises pour les mesurages de la toxicit sont prpares partir de ractifs dshydrats disponibles dans le commerce. Conserver les bactries dshydrates une temprature u 18 C et suivre les recommandations du fournisseur. Les b
40、actries commencent mettre de la lumire immdiatement aprs leur rhydratation et sont prtes tre utilises pour lessai. ISO 11348-2:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 3 5.2 Solution de chlorure de sodium, utilise comme diluant. Dissoudre 20 g de chlorure de sodium (NaCl) dans de leau et complter 1 l ave
41、c de leau. 5.3 Solution dhydroxyde de sodium, c(NaOH) = 1 mol/l, par exemple. 5.4 Acide chlorhydrique, c(HCl) = 1 mol/l, par exemple. Il peut tre ncessaire, pour lajustement du pH, dutiliser des acides ou des bases de concentrations suprieures ou infrieures. 5.5 Solution destine aux bactries dshydra
42、tes. 8,0 g D( +)-Glucose monohydrat (C 6 H 12 O 6 ,H 2 O) 20,0 g Chlorure de sodium (NaCl) 2,035 g Chlorure de magnsium hexahydrat (MgCl 2 ,6H 2 O) 0,30 g Chlorure de potassium (KCl) 11,9 g N-(2-Hydroxythyl)piprazine-N-(2-acide thanesulfonique) (HEPES) Dissoudre dans de leau, agiter pendant environ
43、30 min et ajuster le pH 7,0 0,2 avec la solution dhydroxyde de sodium (5.3) ou dacide chlorhydrique (5.4). Complter 1 l avec de leau. Cette solution peut tre conserve sous forme daliquotes de 18 C 20 C. 5.6 Substances de rfrence. Prparer les solutions mres des substances de rfrence suivantes en util
44、isant la solution de chlorure de sodium (5.2) sparment comme diluant, sans ajustement du pH: 219,8 mg/l Sulfate de zinc heptahydrat (ZnSO 4 ,7H 2 O) 9 mg/l 3,5-Dichlorophnol (C 6 H 4 OCl 2 ) (puret W 99,9%) 22,6 mg/l Dichromate de potassium (K 2 Cr 2 O 7 ) Ces concentrations reprsentent environ le d
45、ouble des valeurs de CE 50attendues pour les substances de rfrence respectives dans la prsente partie de lISO 11348. Les volumes ncessaires dpendent de la configuration des essais. NOTE Il est possible dutiliser des prparations chimiques du commerce ayant des concentrations dfinies en ZnSO 4 et en K
46、 2 Cr 2 O 7(titrisol) pour prparer les solutions mres des substances de rfrence. 6 Appareillage 6.1 Conglateur, destin la conservation des bactries prserves. 6.2 Bloc thermique thermostat, destin maintenir les chantillons soumis essai une temprature de 15 C 1 C. Au sein dun essai, il convient que lc
47、art de temprature soit au plus de 0,3 C. 6.3 Luminomtre, dont la cellule de mesure est maintenue 15 C 1 C, quip de cuvettes appropries. ISO 11348-2:2007(F) 4 ISO 2007 Tous droits rservs6.4 Cuvettes, fabriques partir dun matriau chimiquement inerte, adaptes au luminomtre choisi, ayant une capacit suffisante pour favoriser la lecture sur la plus grande surface possible et de
