1、iL - CD m F Norme internationale INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION.MEWYHAPOP(HAR OPl-AHM3AlJ4R l-l0 CTAHAPTM3ALWl.ORGANISATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en phase gazeuse sur colonne remplie - Mthode gnrale Essential ois - Analysis
2、b y gas chromatograph y on packed columns - General method Premire dition - 1985-12-01 CDU 665.5: 543.544 Rf. no : ISO 73594985 (F) Descripteurs : huile essentielle, analyse chimique, mthode chromatographique, chromatographie en phase gazeuse. Prix bas sur 7 pages Avant-propos LISO (Organisation int
3、ernationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de IISO). Llaboration des Normes internationales est confie aux comits techniques de IISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effe
4、t. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne- mentales, en liaison avec IISO participent galement aux travaux. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
5、nationales par le Conseil de IISO. Les Normes internationales sont approuves confor- mment aux procdures de IISO qui requirent lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. La Norme internationale ISO 7359 a t labore par le comit technique ISO/TC 54, Huiles essentielles . Lattention des
6、utilisateurs est attire sur le fait que toutes les Normes internationales sont de temps en temps soumises rvision et que toute rfrence faite une autre Norme internationale dans le prsent document implique quil sagit, sauf indication contraire, de la dernire dition. 0 Organisation internationale de n
7、ormalisation, 1985 Imprim en Suisse NORME INTERNATIONALE ISO 73594985 (FI Huiles essentielles - Analyse par chromatographie en phase gazeuse sur colonne remplie - Mthode gnrale 0 Introduction La description des mthodes danalyse par chromatographie tant longue, il a t estim utile dtablir, dune part,
8、des normes gnrales donnant en dtail tous les paramtres rpti- tifs : appareillage, produits, .mthodes, formules de calcul, etc., et, dautre part, des normes constituant des fiches danalyse abrges relatives au dosage des composs dans les huiles essentielles, et ne reprenant que les conditions opratoir
9、es sp- cifiques au dosage concern. Ces fiches se rfreront, selon le cas, soit la prsente Norme internationale pour les analyses effectues par chromatogra- phie en phase gazeuse sur colonne remplie, soit IISO 7669 pour les analyses effectues sur colonne capillaire. 1 Objet et domaine dapplication La
10、prsente Norme internationale spcifie une mthode gn- rale danalyse des huiles essentielles par chromatographie en phase gazeuse sur colonne remplie, dans le but de doser un compos spcifique et/ou de rechercher un profil caract- ristique. 2 Rfrences I S 0 356, Huiles essentielles - Prparation de lchan
11、 til/on pour essai. I SO 7609, Huiles essentielles - Analyse par chroma tographie en phase gazeuse sur colonne capillaire - Mthode gnrale. 3 Principe Analyse par chromatographie en phase gazeuse, dans des con- ditions spcifies, dune petite quantit dhuile essentielle sur une colonne avec un remplissa
12、ge appropri. Localisation ventuelle des diffrents composs par mesure de leurs indices de rtention. Dtermination quantitative des composs spcifiques par mesure de laire de leurs pics. 4 Ractifs et produits Au cours de lanalyse, sauf indications diffrentes, utiliser uni- quement des ractifs de qualit
13、analytique reconnue et des pro- duits rcemment distills. 4.1 Gaz vecteur: hydrogne? hlium ou azote, selon le type de dtecteur que lon utilise. Lorsquon utilise des dtec- teurs exigeant lemploi de gaz vecteurs autres que ceux indi- qus ci-dessus, le gaz vecteur utiliser devra tre indiqu. 4.1.1 Gaz au
14、xiliaires: tous gaz utiles selon le dtecteur uti- lis. Pour un dtecteur ionisation de flamme, air et hydrogne de haute puret. 4.2 Produit pour le contrle de linertie chimique de la colonne: actate de linalyle, de puret minimale 98 % . 4.3 Produits colonne.*) 4.3.1 Linalol, matographie. pour le contr
15、le de lefficacit de la de puret minimale 99 % dtermine par chro- 4.3.2 Mthane, de puret minimale 99 % dtermine par chromatographie. 4.4 Substance de rfrence, correspondant au compos doser ou localiser. Elle sera indique dans chaque Norme internationale particulire. 4.5 talon interne. Ltalon interne
16、sera prcis dans chaque Norme internationale particulire, et devra luer aussi prs que possible du compos doser et ne se superposer aucun des pics correspondant aux composs de Ihuile essentielle. 4.6 Alcanes normaux, de puret minimale 95 % dtermi- ne par chromatographie. La gamme des alcanes normaux u
17、tiliser dans une certaine Norme internationale dpend de lindice de rtention des composs concerns dans les condi- tions de lessai. NOTE - Les alcanes normaux sont utiliss uniquement si lon dsire dterminer les indices de rtention. 1) Se conformer strictement aux consignes de scurit en cas dutilisation
18、 de ce gaz. 2) Dautres produits peuvent tre utiliss pour dterminer lefficacit de la colonne; ils seront prciss dans chaque Norme internationale particulire. 1 ISO 7359-1985 (FI 4.7 Mlange dessai. 7 Conditions opratoires Prparer gales de un mlange contenant des proportions peu prs 7.1 Tempratures Les
19、 tempratures du four, de linjecteur et du dtecteur seront prcises dans chaque Norme internationale particulire. - limonne, - actophnone, - linalol, 7.2 Dbit du gaz vecteur Rgler le dbit de manire obtenir lefficacit ncessaire (voir 8.2). - actate de linalyle, - naphtalne, 7.3 Dbit des gaz auxiliaires
20、 - alcool cinnamique. Se rfrer aux instructions du constructeur de lappareil, de manire respecter les conditions optimales de rponse du dtecteur. Tous ces ractifs doivent tre mine par chromatographie. de puret minimale 95 % dter- NOTE - Dautres produits peuvent tre utiliss dans chaque Norme internat
21、ionale particulire. ; ils seront prciss Performances de la colonne 5 Appareillage 8.1 Test dinertie chimique Injecter une quantit dactate de linalyle dans les conditions danalyse (voir 7.1). 5.1 Chromatographe, quip dun dtecteur appropri et dun programmateur de temprature. Les systmes dinjection et
22、de dtection doivent tre munis de dispositifs permettant le rglage indpendant de leurs tempratures respectives. On doit obtenir un seul pic (dans la limite de puret dfinie). 8.2 Efficacit de la colonne 5.2 Colonne, en matriau inerte (par exemple verre ou acier inoxydable), dun diamtre intrieur compri
23、s entre 2 et 4 mm, et dune longueur de 2 4 m de prfrence. . Dterminer lefficacit de la colonne sur le pic du linalol, tem- prature isotherme de 130 OC. Dterminer le nombre de pla- teaux effectifs, N, qui doit tre au moins gal 3 000, laide de lune ou lautre des formules suivantes: Le support doit tre
24、 aussi inerte que possible, par exemple: terre de diatomes fossile lave aux acides et silanise. Sil est ncessaire dutiliser une granulomtrie spcifique, celle-ci sera indique dans la Norme internationale particulire. Formule no 7 (voir figure 1) La nature de la phase stationnaire sera prcise dans cha
25、que Norme internationale particulire. Actuellement, les phases sta- tionnaires les plus couramment utilises sont des phases non polaires telles que les dimthylpolysiloxanes, et des phases polaires telles que le polythylne glycol. Formule no 2 La charge de phase stationnaire sur le support est exprim
26、e en nombre de grammes de phase stationnaire par 100 g de support. o d; est la distance de rtention rduite, en units de lon- gueur (distance de rtention du pic du linalol moins la dis- tance de rtention du pic de lair ou du pic du mthane 130 OC, assimilable au pic de lair) ; La composition du rempli
27、ssage de la colonne dans chaque Norme internationale particulire. sera prcise NOTE - En cas demploi dun remplissage sans phase stationnaire et support distincts, il y a lieu de caractriser de facon adquate ce rem- plissage. cc) est la distance, en mmes units de longueur que la dis- tance de rtention
28、, comprise entre les deux points dinter- section de la ligne de base avec les deux tangentes aux points dinflexion du pic du linalol; 53 sont Enregistre compatibles ur et avec intgrateur, lensemble de dont les pet-forma lappareillage. nces du pic du b est la largeur, en millimtres, (linalol) mi-haut
29、eur du pic. compos spcifi 6 Prparation de lchantillon pour essai La vitesse de droulement du papier de lenregistreur doit tre telle que u soit au moins gale 10 mm, de facon avoir une prcision suffisante. Voir ISO 356. Si lchantillon pour essai injecter doit subir une prparation spciale, celle-ci ser
30、a indique dans la Norme internationale particulire. La vitesse de droulement du papier de lenregistreur doit tre telle que b soit au moins gale 5 mm, de facon avoir une prcision suffisante. 2 ISO 7359-1985 (FI Figure 1 8.3 Rsolution et sparation Pour dterminer la rsolution et/ou la sparation, inject
31、er une quantit du mlange dessai (4.7) dans les conditions de lessai. 8.3.1 Dhermination de la rsolution (voir figure 2) Calculer le facteur de rsolution, R, de deux pics avoisinants I et II, laide de la formule R=2 dr(ll - drcI) QJ(I) + W) o dr(l) est la distance de rtention du pic 1; dr(llj est la
32、distance de rtention du pic II; o(l) est la largeur de la base du pic I ; w(lI) est la largeur de la base du pic II. 1 II si ql) = qllb calculer R laide de la formule R= 4(ll, - 41) 4(ll, - ddl) = CO 40 o a est lcart-type (voir figure 1). Si la distance entre les deux pics, drfllj - drto, est gale 4
33、 o, le facteur de rsolution R = 1. Si les deux pics ne sont pas compltement spars, les tangen- tes aux points dinflexion des deux pics se croisent au point C. Pour sparer compltement les deux pics, la distance entre les deux pics doit tre gale 4(H) - 4(l) = 60 do R = 1,5 (voir figure 3). Figure 2 Fi
34、gure 3 ISO 73594985 (FI Figure 4 8.3.2 Dtermination de la sparation (voir figure 4) Tracer une droite passant par les sommets des pics concerns. A partir de la ligne de base, tracer une perpendiculaire passant par le minimum entre les deux pics. Mesurer la distance, h, sur cette perpendiculaire, ent
35、re la ligne de base et son point dintersection avec la droite passant par les sommets des pics concerns. Mesurer galement la distance, v, sur la perpendiculaire entre la ligne de base et le point minimal entre les deux pics. Calculer la sparation, p, exprime en pourcentage, laide de la formule lOO(h
36、 - v) P= h 8.3.3 Contrle de la sparation en temprature programme Travailler dans les conditions suivantes : - colonne de dimthylpolysiloxane ou de polythylne glycol ; . - temprature programme de 80 220 OC, raison de 2 ou 3 OC/min. Le dbit du gaz vecteur doit permettre llution de tous les com- posant
37、s du mlange dessai (4.7) et des alcanes normaux (4.6) ncessaires pour la dtermination de leurs indices de rtention avant la fin de la programmation de temprature. 8.3.3.1 Injecter une quantit approprie du mlange dessai (4.7). Sur le chromatogramme obtenu : a) sur les colonnes de dimthylpolysiloxane,
38、 les pics du limonne et de Iactophnone doivent tre spars 95 % au moins (voir 8.3.2); 1) lavenir, les limites de ces diffrences seront prcises. 4 b) sur les colonnes de polythylne glycol (M, = 20 000), les pics du linalol et de lactate de linalyle doivent tre spa- rs 95 % au moins (voir 8.3.2). Pour
39、les autres remplissages ventuellement indiqus dans la mthode danalyse, les exigences seront prcises dans celle-ci. 8.3.3.2 Injecter une quantit approprie du mlange dessai (4.7) et calculer les indices de rtention (voir chapitre 9) des constituants du mlange dessai. Sur les colonnes de dimthylpolysil
40、oxane, utiliser les alcanes clO c16- Sur les colonnes de polythylne glycol (M, = 20 OOO), utiliser les alcanes CI1 est la distance, en millimtres, entre le sommet du pic dont il faut calculer lindice de rtention, et le sommet du pic dit de lair (ou le pic du mthane) (voir 9.1 .l) ; Comparer les chro
41、matogrammes (A H (voir 10.1.1) et G B ) (voir chapitre 9) et reprer dans le chromatogramme ( B H les pics correspondant aux alcanes normaux. d; est la distance, en millimtres, entre le sommet du pic de Ialcane normal n atomes de carbone, et le sommet du pic dit de lair (ou le pic du mthane) (voir 9.
42、1 .l) ; Sur le suit. chromatogramme a B H, effectuer les mesures comme C+l est la distance, en millimtres, entre le sommet du pic de Ialcane normal (II + 1) atomes de carbone, et le sommet du pic dit de lair (ou le pic du mthane) (voir 9.1.1). 9.1.1 Conditions isothermes 9.1.1.1 Si lon utilise un dt
43、ecteur conductivit thermique, calculer la diffrence des distances de rtention entre le som- met du pic de lair et le sommet du pic considr. Soit d; cette diffrence, en millimtres. NOTE - Pour que les calculs soient valables, il faut que G+l d; d;- 9.2.2 Opration effectue en program temprature linair
44、e ds Ii Injection mation de Calculer la diffrence des distances de rtention entre le sommet du pic de lair et le sommet du pic de Ialcane normal dont le temps de rtention est immdiatement infrieur celui du pic considr. Soit dh cette diffrence, en millimtres. Ce calcul nest valable que pour les const
45、ituants dont les temps de rtention sont compris dans la zone linaire de program- mation. Calculer la diffrence des distances de rtention entre le som- met du pic de lair et le sommet du pic de Ialcane normal dont le temps de rtention est immdiatement suprieur celui du pic considr. Soit dk + 1 cette
46、diffrence, en millimtres. Calculer lindice de rtention, 1, laide de la formule I A, = 100- + mon AY o 9.1.1.2 Si lon utilise un dtecteur ionisation de flamme, cal- culer la diffrence des distances de rtention entre le sommet du pic considr et le sommet du pic du mthane. Soit dX cette diffrence, en m
47、illimtres. A.x est la distance, en millimtres, entre le sommet du pic dont il faut calculer lindice de rtention, et le sommet du pic de Ialcane normal n atomes de carbone (voir 9.1.2) ; Calculer la diffrence des distances de rtention entre le som- met du pic du mthane et le sommet du pic de lalcane normal dont le temps de rtention est immdiatement infrieur celui du pic considr. Soit d; cette diffrence, en millimtres. Ay est la distance, en millimtres, entre le sommet du pic de Ialcane normal n atomes de carbone, et le sommet du pic de Ialcane normal (n + 1) ato
