1、前言本标准是依据我国动植物油脂检测技术的实际与发展状况 等效采用国际标准 动植物油脂 脂肪酸甲酯制备 制定的为使其更具实用性将试剂色谱纯庚烷 己烷改为分析纯庚烷己烷 在标准的编写与表述上按照 标准化工作导则第单元标准的起草与表述规则第部分标准编写的基本规定和 标准化工作导则化学分析方法标准编写规定 的要求进行编写同时将 第 章关于试剂和操作步骤的说明作为标准的组成部分列入附录本标准第 章三氟化硼一般方法 和第 章适用于从各类动植物油脂和脂肪酸制备六碳或六碳以上的脂肪酸甲酯 对于大多数油脂 通常采用三氟化硼一般方法本标准第 章不适用于含有下列基团的脂肪酸甲酯的制备次氧基化合物 如 羟基 氢过氧基
2、酮基环氧基环丙烷和环丙烯基化合物共轭多不饱和化合物及炔类化合物蜡为此可采用第 章所述方法 但如果油脂中仅含有少量的上述化合物如棉籽油 仍可按第 章的一般方法进行酯化另见附录 中本标准第 章适用于从中性油脂酸价小于 制备四碳或四碳以上的脂肪酸甲酯用于气相色谱分析本标准由中华人民共和国国内贸易部提出本标准由中华人民共和国国内贸易部归口本标准起草单位 国内贸易部谷物油脂化学研究所本标准主要起草人应珊红李歆 郝希成前言国际标准化组织是由各国标准化协会 成员团体组成的世界性联合会 制定国际标准工作通常由 的技术委员会完成 各成员团体若对某技术委员会已确立的标准项目感兴趣均有权参加该委员会的工作 与 保持
3、联系的各国际组织官方的或非官方的 也可参加有关工作由技术委员会正式通过的国际标准草案由 委员会批准为正式国际标准之前需提交各成员团体通过国际标准 是由 农产食品技术委员会制定的于 年 月分发给各成员团体由下列国家的成员团体通过澳大利亚匈牙利波兰奥地 伊朗罗马尼亚加拿大以色列 南非智利朝鲜西班牙捷克斯洛伐克墨西哥泰国埃塞俄比亚荷兰土耳其法国 新西兰英国德国 秘鲁南斯拉夫没有成员团体对此文件表示不赞成中华人民共和国国家标准动植物油脂脂肪酸甲酯制备国家质量技术监督局 批准 实施范围本标准规定了脂肪酸甲酯的制备方法本标准适用于气相色谱薄层色谱 红外光谱等需要甲酯衍生物的各种分析过程引用标准下列标准所包
4、含的条文通过在本标准中引用而构成为本标准的条文 本标准出版时所示版本均为有效 所有标准都会被修订 使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性油脂试样制备三氟化硼一般方法警告 三氟化硼有毒 建议分析人员尽量不用甲醇和三氟化硼制取三氟化硼甲醇溶液 见附录 中方法中涉及到危险试剂的使用 应采取适当的防护措施以保护眼睛并避免腐蚀性化学灼伤的危险原理甘油酯皂化后释出的脂肪酸在三氟化硼存在下进行酯化试剂所有试剂均为分析纯 水为蒸馏水氢氧化钠甲醇溶液 约将 氢氧化钠溶于 含水不超过 的甲醇中 该溶液存放时间较长时 也许形成少量白色的碳酸钠沉淀 但不会影响甲酯的制备三氟化硼甲醇溶液 可购用 和 的溶液
5、 见附录 中庚烷 或己烷 见附录 中 和附录 中重蒸石油醚 沸程 溴值低于 无残渣见附录 中氯化钠饱和水溶液无水硫酸钠甲基红 溶于 的乙醇中氮气 含氧量低于仪器磨口烧瓶 或回流冷凝器有效长度 具有磨口接头脱脂沸石移液管或自动加液器至少通氮导管试管具磨口玻璃塞分液漏斗试样制备按 制备试样步骤三氟化硼有毒以下操作请在通风橱里进行 玻璃器具用后应立即用水冲洗试样试样的质量是为了按表 选择合适的烧瓶及适量的试剂和溶液不需准确称量 见附录 中表 试样取样量试样质量 烧瓶 氢氧化钠甲醇溶液 三氟化硼甲醇溶液 庚烷注 如果甲酯用于气相色谱分析 试样最好取 左右 少于此量时应确保样品具有代表性 见附录 中皂化
6、见附录 中油脂将试样置于烧瓶中加入适量氢氧化钠甲醇溶液 及沸石然后将冷凝管固定于烧瓶上注 在含有两个以上双键的脂肪酸存在时 建议导入氮气 将甲醇溶液里和烧瓶中的空气排掉 皂化时从冷凝器顶部持续通入氮气在水浴上回流直至油滴消失通常需要 见附录 中 用移液管从冷凝器顶部加入适量的三氟化硼甲醇溶液 于沸腾的溶液里脂肪酸将试样置于烧瓶中用移液管加入适量的三氟化硼甲醇溶液 装上冷凝器并在水浴中煮沸甲酯制备继续煮沸经冷凝器顶部加入适量庚烷 于沸腾混合物中数量的准确性不影响反应 继续煮沸停止加热 冷却至室温后取下冷凝器加入少量氯化钠溶液 并轻摇烧瓶数次继续加入氯化钠溶液 至烧瓶颈部吸取上层溶液 庚烷层 约
7、于试管中加适量无水硫酸钠 去除溶液中痕量水即可直接取一定量注入气相色谱仪分析回收干酯如果需要回收全部干酯可将氯化钠溶液和庚烷液移入分液漏斗中分层 保留庚烷液 氯化钠溶液用每次 的石油醚 或己烷萃取两次将庚烷液和两次萃取物合并 然后用每份 蒸馏水洗涤直至用甲基红指示剂 检验不显酸性为止 用无水硫酸钠 干燥过滤 并在水浴上于氮气流 下蒸发溶剂 见附录 中不足 的试样 最好按比例减少溶剂和蒸馏水体积不用三氟化硼的替代方法适用中性油脂的方法 酸价小于原理甘油酯在碱性介质中酯化试剂所有试剂均为分析纯 水为蒸馏水甲醇 含水不超过氢氧化钾甲醇溶液约净 氢氧化钾溶于 甲醇 中庚烷 或己烷 见附录 中 和附录
8、中无水硫酸钠氮气含氧量低于仪器高速搅拌器及适当的加热器 如带加热器的电磁搅拌器磨口烧瓶氮气导管回流冷凝器具有磨口接头脱脂沸石分液漏斗细颈锥形瓶试样制备按 制备试样步骤试样称取试样约 见附录 中甲酯制备见附录 中将试样置于烧瓶中加入约 甲醇 氢氧化钾甲醇溶液 及沸石装上冷凝器注 在含有两个以上双键的脂肪酸存在时 建议导入氮气 将甲醇溶液里和烧瓶中的空气排掉 皂化时从冷凝器顶部持续通入氮气煮沸溶液至变清一般 后反应完全见附录 中在流水中将烧瓶冷却 然后将溶液移入分液漏斗用 庚烷 冲洗烧瓶并将溶液并入分液漏斗加入 蒸馏水 摇动使之分层 甲酯进入上层液庚烷 将水层分离到第二分液漏斗中 再次用 庚烷萃取
9、 合并两次萃取物并用每次 蒸馏水冲洗两遍分离甲酯溶液并用无水硫酸钠 干燥 经脱脂棉滤入 锥形瓶中在氮气 见附录 中 保护下 于沸水浴上将溶液蒸发至约适用酸性油脂酸价大于 和脂肪酸的方法原理对于酸性油脂中和游离脂肪酸 并使甘油酯碱解后脂肪酸在酸性介质中酯化对于脂肪酸直接在酸性介质中酯化试剂所有试剂均为分析纯 水为蒸馏水甲醇钠甲醇溶液将 金属钠溶于 含水不超过 的甲醇中盐酸无水甲醇溶液约注少量的无水氯化氢气体可以在实验室制取将市售浓盐酸 滴入浓硫酸 中通过置换反应产生 释出的气体通入硫酸中使其干燥 由于盐酸能迅速被甲醇吸收在溶解时应适当采取防护措施例如可用一个倒置的边缘刚好接触液面的小漏斗将气体导
10、入 因为盐酸甲醇溶液可在有玻璃塞的瓶中于暗处贮存 故可事先制备大量溶液可用约 的硫酸甲醇溶液代替盐酸甲醇溶液但酯化时间至少需要 且形成的硫酸钠沉淀会妨碍沸腾因而需要过滤或使用电磁搅拌器庚烷 或己烷 见附录 中 和附录 中无水硫酸钠甲基红 溶于 乙醇中氮气 含氧量低于仪器高速搅拌器及适当的加热器 如带加热器的电磁搅拌器磨口烧瓶氮气导管回流冷凝器具有磨口接头脱脂沸石分液漏斗细颈锥形瓶试样制备按 制备试样步骤试样称取试样约 见附录 中甲酯制备见附录 中酸性油脂将试样置于烧瓶中加入 甲醇钠溶液 及沸石装上冷凝器注也可以在加入试样前先将 甲醇和 金属钠置于烧瓶中 直接制备甲醇钠溶液在含有两个以上双键的脂
11、肪酸存在时建议导入氮气 将甲醇溶液里和烧瓶中的空气排掉 皂化时从冷凝器顶部持续通入氮气煮沸溶液至变清一般 内反应完全 见附录 中 向烧瓶中至少加入 盐酸甲醇溶液注 由于溶液中的甲醇钠含量相当高 会出现氯化钠沉淀继续煮沸时会导致过热 暴沸 所以可将沉淀物滤去但由于上述煮沸时间不长 故一般不需过滤脂肪酸将试样置于烧瓶 中加入 盐酸甲醇溶液 及沸石装上冷凝器注 在含有两个以上双键的脂肪酸存在时 建议导入氮气 将甲醇溶液里和烧瓶中的空气排掉 在随后的煮沸过程中继续从冷凝器顶部通入氮气甲酯制备煮沸 后 将烧瓶放在流水中冷却加入 蒸馏水 然后将溶液移入分液漏斗中 加入庚烷 见附录 中 用力振摇后静置至分层
12、 收集庚烷层 用 庚烷再次萃取水层 合并两次庚烷萃取物并用每次 的蒸馏水冲洗直至用甲基红指示剂 检验不显酸性为止 用无水硫酸钠 将其干燥后经脱脂棉滤入 锥形瓶中并在氮气保护下 于沸水浴上见附录 中 将溶液蒸发至约四碳或四碳以上脂肪酸甲酯的特殊制备方法原理甘油酯在氢氧化钾甲醇溶液中进行酯基转移反应试剂所有试剂均为分析纯 水为蒸馏水氢氧化钾甲醇溶液 约将 氢氧化钾溶于 含水不超过 的甲醇中庚烷 或己烷 见附录 中 和附录 中参比溶液称取约 精确至 甲基戊酸盐置于 容量瓶中用庚烷 稀释至刻度参比溶液称取约 精确至 甲基戊酸盐置于 容量瓶中用庚烷 稀释至刻度仪器试管 具磨口玻璃塞容量瓶移液管 或稍大量
13、筒试样制备按 制备试样步骤试样称取 试样置于试管中 精确至注 如果不需要测定丁酸含量 则试样不必称量至规定的精确度甲酯制备用量筒量取 庚烷 置于试管中如果要用气相色谱准确测定丁酸含量也仅是在此种情况下需使用参比溶液 若估计丁酸含量高于 可用移液管吸取 的参比溶液 置于试管中 若估计丁酸含量低于可吸取 参比溶液 置于试管中加入 氢氧化钾甲醇溶液 后塞住试管摇匀直至溶液变清 此过程约需 澄清之后由于甘油的离析溶液重新变混 甘油将迅速沉析分离出含有甲酯的上层溶液甲酯贮存应尽快分析甲酯溶液必要时可将含甲酯的庚烷溶液在惰性气体保护下贮存于冰箱中 较长时间贮存时可以加入一定浓度而不影响以后分析的抗氧化剂防
14、止甲酯的自动氧化 例如 的 二叔丁基对甲酚溶液含丁酸的甲酯只能贮存于密封的安瓿里而且必须采取特殊的防护措施以避免灌装和密封安瓿期间的蒸发损耗不含溶剂的干酯应立即分析 必要时可用惰性气体封存于冰箱中保存 或在真空密封管内于冰箱中保存更长的时间附录标准的附录关于试剂和操作步骤的说明如果油脂中含有不皂化物而且数量较大 可能会影响以后的分析可用蒸馏水稀释皂化液并用乙醚己烷或石油醚萃取除去不皂化物然后将溶液酸化并分离脂肪酸 按照 或 制备甲酯如果必须制备三氟化硼甲醇溶液可按下法进行将一个装有 甲醇溶液的 烧瓶称重并置于冰水浴中冷却而且保持在冰水浴中 让钢瓶中的三氟化硼通过玻璃管导入甲醇液中 直至吸收 三
15、氟化硼为止 操作应在通风罩内进行 在玻璃管浸入甲醇之前至移去为止 都应通以三氟化硼气体 以避免液体回流到气体减压系统 不能让气体从烧瓶中逸散得太快而产生白烟 该试剂如在冰箱内保存 可在 年内保持稳定各种试剂和溶剂在进行气相色谱分析时不得产生干扰脂肪酸甲酯峰的峰 特别是三氟化硼甲醇溶液 可能在色谱图的 碳脂肪酸区域内产生额外峰 因此 每批新试剂或溶剂都应制备纯油酸的甲酯 并进行色谱分析 如有额外峰出现 则这批试剂应当舍弃若试样中不含 碳或 碳以上脂肪酸 己烷可代替庚烷如果要用内标以气相色谱法定量测定脂肪酸则必须准确地称取 即精确到 试样如果建议的试样量不合适 可取 或更少 所用试剂的量及容器的大小也要按比例缩减当油样 如海狸油 可溶于甲醇时 将看不到油滴 因而澄清与否就不能做为判断反应完全的标志如果溶剂蒸发时间太长或氮气流太足 则甲酯中最易挥发的成分可能会损失做红外光谱分析时必须将溶剂尽可能除尽 但做气相色谱分析时 如果有八碳或更少碳的脂肪酸存在时 就不应将溶剂除去
