1、ICS 11.120.20 C 30 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 5127.16 2019 植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中 有 毒有害物质的测定 第 16 部分：生物负载 薄膜过滤法 2019 - 12 - 27 发布 2020 - 01 - 28 实施 河北省市场监督管理局 发布 DB13/T 5127.16 2019 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5127植入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定 共分 16个部分： 第 1部分： 柠檬酸钠和乙二胺四乙酸二钾迁移量 原子吸收分光光度法； 第 2部分：二巯基
2、丙醇迁移量碘量法； 第 3部分：葡萄糖 迁移量 碘量法； 第 4部分：柠檬酸 迁移量 酸碱中和滴定法； 第 5部分：硫氰酸胍 迁移量 分光光度法； 第 6部分：丙酮 迁移量 气相色谱法； 第 7部分：丙交酯 迁移量 气相色谱法； 第 8部分：对苯二甲酸 迁移量 高效液相色谱法； 第 9部分：乙醇 迁移量 气相色谱法； 第 10部分：环氧乙烷 迁移量 气相色谱法； 第 11部分：戊二醛 迁移量 高效 液相色谱法； 第 12部分：异氰酸酯 迁移量 高效液相色谱法； 第 13部分：甲醛 迁移量 气相色谱质谱联用法； 第 14部分：蛋白质 迁移量 可见 -紫外分光光度法； 第 15部分： 铅、砷、镉、
3、铬、铜、锑、钡、铝、锌、锡 迁移量 电感耦合等离子体质谱法； 第 16部分：生物负载 薄膜过滤法。 本部分为 DB13/T 5127的第 16部分。 本部分由河北省药品监督管理局提出并归口。 本部分起草单位：河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院。 本部分主要起草人：康莉、刁立琴、付钊、高保栓、冯毅。 DB13/T 5127.16 2019 1 植 入性医疗器械 高分子材料 浸提液中有毒有害物质的测定 第 16 部分：生物负载 薄膜过滤法 1 范围 本标准规定了植入性医疗器械高分子材料浸提液中生物负载的测定方法。 本标准适用于植入性医疗器械高分子材料浸提液中生物负载的测定和验证。 本标准 适用
4、于具有一定生物负载水平的植入性医疗器械。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件 的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件，仅 注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单 ）适用于本文件。 GB/T 19973.1 医疗器械的灭菌微生物学 方法 第 1 部分：产品上微生物总数的测定 3 方法原理 选择适宜的洗脱方法对试样上自然污染的微生物进行洗脱处理，将洗脱液进行薄膜过滤，并对滤 膜进行培养计数，得到试样上洗脱的微生物总数。再用重复回收法确定试样的修正系数。最后，通过 修正系数对试样上洗脱的微生物总数进行修正，从而确定试样上的生物负载水平。 4 试剂
5、 与材料 4.1 胰酪大豆胨琼脂培养基 。 4.2 沙氏葡萄糖琼脂培养基 。 4.3 0.9 %氯化钠注射液。 5 仪器与设备 5.1 压力蒸汽灭菌器 。 5.2 洁净工作台 。 5.3 生化培养箱 。 5.4 电子天平 5.5 拍击式无菌均质器 。 5.6 恒温振荡器 。 5.7 过滤装置 。 DB13/T 5127.16 2019 2 5.8 0.45 m 无 菌微孔滤膜 。 6 试验步骤 6.1 微生物 采集 6.1.1 袋蠕动法 该洗脱 方法 尤其适用于软质、纤维和 /或吸附性材料，但可能不适用于能刺破袋的任何材质（如带 针或含有坚硬部分的器械）。 将试样和已知体积的洗脱液装在一无菌均
6、质袋中，设定均质器的洗脱参数，推荐将洗脱参数设定 为拍击频率 6次 /秒，运行时间 60 s，启动均质器，使洗脱液贯穿试样内外。 6.1.2 机械振摇 法 该洗脱 方法 为 通用方法， 适用于 大多数 材料 和样品。 将试样和已知体积的洗脱液装在一无菌容器中，设定振荡器的洗脱参数，推荐将洗脱参数设定为 振摇频率 200 r/min，运行时间 60 s，开启 振荡器进行振摇洗脱。 6.2 菌落总数测定 6.2.1 试样制备 在无菌环境下，打开至少 5个包装，从每个包装中取样，准确量取 3份样品，每份 10 g1 g或 100 cm210 cm2（以内外总表面积计），分别为样 1、样 2、样 3。
7、 6.2.2 试样洗脱 将 3份试样分别放入 3个无菌均质袋 /或无菌容器中，向每个无菌均质袋 /或无菌容器中加入 100 mL 洗脱液，按设定好的参数对试样分别进行洗脱。 6.2.3 移至培养基 对洗脱液进行薄膜过滤。将每份试样的洗脱液分别通过薄膜过滤等量完全过滤到两张滤膜上，每 张滤膜再用 100 mL0.9 %氯化钠注射液进行冲洗。将滤膜菌面朝上分别贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板 和沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。 6.2.4 培养计数 将 3个胰酪大豆胨琼脂培养基平板置 30 35 生化培养箱中培养 3 d 5 d，将 3个沙氏葡萄糖琼 脂培养基平板置 20 25 生化培养箱中培养 5 d
8、7 d。逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。 6.2.5 结果计算 每个试样洗脱的菌落总数按公式（ 1）计算。 Xi=2（ Ai+Bi） （ 1） 式中 ： Xi-第 i个试样洗脱的菌落总数， CFU； Ai-第 i个试样 胰酪大豆胨琼脂培养基平板菌落数， CFU； Bi-第 i个试样沙氏葡萄糖琼脂培养基平板菌落数， CFU； DB13/T 5127.16 2019 3 i=1,2,3。 3个试样洗脱的平均菌落数按公式（ 2）计算。 X= （ X1+X2+X3） （ 2） 式中 ： X-3个试样洗脱的平均菌落数， CFU。 6.3 修正系数 测定 6.3.1 试样制备 在无菌环境下，打开至少 5
9、个包装，从每个包装中取样，准确量取 3份样品，每份 10 g1 g或 100 cm210 cm2（以内外总表面积计），分别为样 a、样 b、样 c。 6.3.2 试样洗脱 在无菌环境下，将 3份试样分别放入 3个无菌均质袋 /或无菌容器中，向每个无菌均质袋 /或无菌容 器中加入 100 mL洗脱液，按设定好的参数对试样分别进行重复洗脱。每重复一次后，将洗脱液全部回 收。 6.3.3 移至培养基 对洗脱液进行薄膜过滤。将每份试样的每一次洗脱液分别通过薄膜过滤等量完全过滤到两张滤膜 上，每张滤膜再用 100 mL0.9 %氯化钠注射液进行冲洗。将滤膜菌面朝上分别贴于胰酪大豆胨琼脂培养 基平板和沙氏
10、葡萄糖琼脂培养基平板上。 用熔化的回收培养基涂在试样表面上，让培养基变硬，然后使试样在规定的培养 条件下进行培养。 6.3.4 培养计数 将贴有滤膜的胰酪大豆胨琼脂培养基平板及涂有胰酪大豆胨琼脂培养基的试样置 30 35 生化 培养箱中培养 3 d 5 d，将贴有滤膜的沙氏葡萄糖琼脂培养基平板及涂有沙氏葡萄糖琼脂培养基的试 样置 20 25 生化培养箱中培养 5 d 7 d。逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。 6.3.5 结果计算 表 1中列出了重复处理过程中经过 5次重复洗脱后的一组理想化数据。 表 1 某产品重复洗脱后测得的菌落数 产品 洗脱次数 琼脂覆盖 总菌落数 1 2 3 4 5 样
11、 a na1 na2 na3 na4 na5 ma Na=na1+na2+na3+na4+na5+ma 样 b nb1 nb2 nb3 nb4 nb5 mb Nb=nb1+nb2+nb3+nb4+nb5+mb 样 c nc1 nc2 nc3 nc4 nc5 mc Nc=nc1+nc2+nc3+nc4+nc5+mc DB13/T 5127.16 2019 4 根据表 1的数据计算回收率，见表 2。 表 2 回收率 产品回收总菌落数 第 1 次洗脱 第 1 次洗脱的回收率 第 1 次洗脱的平均回收率 样 a Na na1 Qa= na1100%/N a Q=（ Qa+Qb+Qc） /3 样 b N
12、b nb1 Qb= nb1100%/N b 样 c Nc nc1 Qc= nc1100%/N c 计算中已包括了琼脂覆盖得到的菌落数。某些医疗器械可能会无法应用琼脂覆盖。 采用首次洗脱后的平均回收率 Q，修正系数按公式（ 3）计算。 P=1/Q （ 3） 式中 ： Q -平均回收率； P -修正系数。 6.4 生物负载的计算 生物负载按公式（ 4）计算。 Y= （ 4） 式中 ： Y -每 1g/10cm2试样上的生物负载， CFU/g或 CFU/10 cm2； P -修正系数； X -3个试样洗脱的平均菌落数； CFU。 6.5 方法说明 6.5.1 在某一产品的常规检验中，在试验方法没有改变的前提下，可以依据已得到的修正系数进行计 算。 6.5.2 试验方法中的洗脱参数可根据产品特性进行调整。 6.5.3 准确的重复次数取决于若干因素，包括产品特性、构成生物负载的微生物和初始污染水平。预 实验可用于确定重复的次数。 _
