1、ICS 67.120 C 53 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 8242020 代替 DB34/T 824-2008 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定 胶体金免疫层析法 Determination of clenbuterrol hydrochloride residue in animal tissues Colloidal gold immunochromatographic method 文稿版次选择 2020 - 08 - 03 发布 2020 - 09 - 03 实施 安徽省市场监督管理局 发布 DB34/T 8242020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-200
2、9 给出的规则起草。 本标准代替 DB34/T 824-2008动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定 胶体金免疫层析法，除编 辑性修改外主要技术变化如下： 修改了标准名称，删除了标准名称中的连接符“”； 修改了试剂和材料内容（见第 4 章）； 增加了仪器设备（见第 5 章）； 修改 “实验步骤 ”为 “检测步骤 ”，并修改了部分内容，优化了样品制备（见第 6 章）； 修改了结果判断内容， “方法确认 ”改为 “有效性确认 ”（见第 7 章）； 修改结果确认方法表述（见第 8 章）； 增加了附录 A（见附录 A）。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准
3、起草单位：安徽省兽药饲料监察所、宁国市金东坊农业开发有限公司、合肥谱尼测试科技有 限公司、望江县畜牧兽医局、合肥市动物疫病预防与控制中心、合肥市动物卫生监督所、宁国市自然资 源和规划局、安徽省水产技术推广总站、铜陵市义安区畜牧兽医局。 本标准主要起草人：许世富、吴昊、赵家喜、司宏富、何广、徐勇、许晓靖、孙德祥、何为俊、胡 林林、王振。 DB34/T 8242020 1 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定 胶体金免疫层析法 1 范围 本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留测定的胶体金免疫层析法。 本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留的快速检测。 本标准检测限为 3 g/k
4、g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本方法采用胶体金竞争抑制法。 将氯金酸用枸橼酸钠还原法制成一定直径的金溶胶颗粒， 标记抗体。 硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，将样本滴加在胶体金检测条样品垫一端，使液体慢 慢向吸水纸另一端渗移。在样本移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显 示出来。样本中的克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了
5、抗体和硝酸纤维素 （NC）膜检测线上的克伦特罗人工抗原的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显紫红 色，结果为阴性。 4 试剂和材料 4.1 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。 4.2 胶体金免疫层析快速检测卡组成 4.2.1 盐酸克伦特罗特异性抗体。 4.2.2 胶体金。胶体金溶液采用氯金酸还原法制备，应为带负电的紫红色疏水胶体金溶液，金颗粒大 小应在 30 nm60 nm 之间。 4.2.3 硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜表面应平整、光滑、白净，没有划痕、凹印、小孔、水迹、橘皮 状或其他肉眼能见的瑕疵，无灰尘、油渍或其他杂物。硝酸纤
6、维素膜宽度为 25.4 0.5 mm，长度在 100 2 mm，厚度在 185 19 m，毛细流速度为 180 45 s/40 mm。 4.2.4 聚酯纤维膜。聚酯纤维膜表面形状应为基本均匀的矩形，无明显歪斜现象。色泽好，白色，表 面洁净，均匀度好，无破损，无起皱，无污点，无色斑，无霉点，无异味，无杂质及灰尘。聚酯纤维膜 重量在 98.3 10.0 g/m 2 ，厚度在 0.42 0.07 mm，长度为 305.0 2.5 mm，宽度为 254.0 2.5 mm。 4.2.5 吸水纸。 4.2.6 底板。 4.2.7 塑料盒。 DB34/T 8242020 2 4.2.8 塑料吸管。 4.2.
7、9 金标样品稀释液。 4.3 阴性对照：取不含盐酸克伦特罗的空白样品，作为空白试料。 4.4 阳性对照：取盐酸克伦特罗标准工作液用水稀释为 10 g/L。 4.5 盐酸克伦特罗标准品。 5 仪器设备 5.1 电子天平：感量分别为 0.01 mg 和 1 mg。 5.2 离心机： 3 000 rpm。 5.3 水浴锅。 6 检测步骤 6.1 样品制备 取新鲜或解冻后的供试样品适量（约 1 g），剪碎，装入 3 mL 离心管中，盖紧管盖，100加热 5 min，取出，自然冷却，3 000 rpm 离心 5 min，取上清组织渗出液 100 L，加入 100 L 金标样品 稀释液（4.2.9），混匀
8、，备用。 6.2 溶液制备 6.2.1 盐酸克伦特罗储备液 准确称取盐酸克伦特罗标准品适量，用甲醇溶解后稀释成 1 mg/mL 的储备液，18冰箱中贮存 备用，有效期 3 个月。 6.2.2 盐酸克伦特罗标准工作液 取盐酸克伦特罗储备液，用水稀释至 100 g/L，4中贮存备用，有效期 1 个月。 6.3 样品检测 6.3.1 从包装袋中取出盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测卡，置于平整的台面上，检测卡应即开 即用。 6.3.2 用塑料吸管（4.2.8）垂直滴加 2 滴（约 60 L80 L）无气泡上清液（6.1）于加样孔（S） 内，每批需做阴性对照和阳性对照各一个，加样方法同待测样品。 6.
9、3.3 加样后 5 min 时观察结果。 7 结果判断 7.1 有效性确认 7.1.1 阴性对照在检测区（T）出现显色条带（参见附录 A，下同），所有阳性对照在检测区（T）均 不出现显色条带，且质控区（C）出现一条显色条带，说明检测卡有效，可进行检测。 7.1.2 如阴性对照检测区（T）不出现显色条带，或阳性对照检测区（T）出现显色条带，或质控区（C） 不出现一条显色条带，说明检测卡无效，不能进行检测。 DB34/T 8242020 3 7.2 测定结果 7.2.1 阳性（+）：仅质控区（C）出现一条显色条带，在检测区（T）内无显色条带出现。阳性结果表 明：样本中含有盐酸克伦特罗且含量在检测限以上。 7.2.2 阴性（-）：两条显色条带出现。一条位于检测区（T）内，另一条位于质控区（C）内。阴性结 果表明：样本中不含盐酸克伦特罗或其含量在检测限以下。 7.2.3 无效：质控区（C）未出现显色条带，表明本次检测无效（失效原因包括操作过程不当或检测卡 已过有效期等）。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，更换检测卡重新检测。 8 结果确认 阳性样品应使用色谱质谱联用法进行确认。 DB34/T 8242020 4 A A 附 录 A （资料性附录） 检测结果判断示意图 阴性（-） 阳性（+） 无效 图A.1 检测结果判断示意图 _
