1、 ICS 67.080.20 CCS B 31 34 安徽省地方标准 DB34/T 3891 2021 蔬菜中腐霉利快速检测 胶体金免疫层析法 Rapid detection of procymidone in vegetables Colloidal gold immunochromatography assay 2021-06-08 发布 2021-07-08 实施 安徽省市场监督管理局 发布 DB34/T 3891 2021 I 前言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机
2、构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽省产品质量监督检验研究院提出。 本文件由安徽省市场监督管理局归口。 本文件起草单位：安徽省产品质量监督检验研究院、合肥工业大学、食品营养与安全研究中心、安 徽省食品药品检验研究院、杭州傲敏生物科技有限公司、江苏美正生物科技有限公司、安徽华测检测技 术有限公司。 本文件主要起草人：姚帮本、陈伟、姚丽、陈赵然、李云、闫超、童宁、郭佳佳、张居舟、祝红蕾、 陆乐、徐建国、乔东晴、吴基杰、庄琼、陶云峰、王相召、王平、王海翔、陆华进、高君、陈欣。 DB34/T 3891 2021 1 蔬菜中腐霉利快速检测 胶体金免疫层析法 1 范围 本文件规定了蔬菜中腐霉利的胶体金免
3、疫层析快速检测方法。 本文件适用于韭菜、番茄、茄子、辣椒、黄瓜、蘑菇类（鲜）中腐霉利的快速检测。 检测限：韭菜为 0.2 mg/kg；番茄、 黄瓜为 2 mg/kg；茄子、辣椒、蘑菇类（鲜）为 5 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 本方法
4、采用竞争抑制免疫层析原理。样品中残留的腐霉利与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了 抗体和检测线（T线）上包被原的结合，从而导致检测线（T线）颜色变浅或消失，通过检测线（T线） 与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中残留的腐霉利进行定性判定。 5 试剂或材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。 5.1 水：应符合 GB/T 6682，二级水。 5.2 腐霉利：纯度99，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5.3 甲醇（CH 3OH） 5.4 氯化钠（NaCl） 5.5 氯化钾（KCl） 5.6 磷酸氢二钠（Na 2HPO4） 5.7 磷酸二氢钾（KH 2PO4） 5.8 10甲醇溶液：吸
5、取 10 mL 甲醇（5.3 ），用水（5.1）定容至100 mL，混匀。 5.9 稀释液：分别称取氯化钠（5.4）8 g、氯化钾（5.5）0.2 g 磷酸氢二钠（5.6）1.44 g、磷酸二 氢钾（5.7）0.24 g于 1000 mL 烧杯中，加水（5.1）充分搅拌溶解后定容至 1000 mL。 5.10 10 g/L 的腐霉利标准储备液：准确称取腐霉利（5.2）0.1 g（精确至 0.0001 g），用甲醇（5.3） 溶解，定容至 10 mL。-20冷冻避光保存，有效期 12 个月。 DB34/T 3891 2021 2 5.11 200 mg/L 的腐霉利标准中间液：准确移取 10 g
6、/L 的腐霉利标 准储备液（5.10）200L至 10 mL 容量瓶中，甲醇（5.3）定容。4冷藏避光保存，有效期 3个月。 5.12 2 mg/L 的腐霉利标准工作溶液：准确移取 200 mg/L 的腐霉利标准中间液（5.11）100L至 10 mL 容量瓶中，10甲醇溶液（5.8）定容。4冷藏避光保存，有效期 1 个月。 6 仪器和设备 6.1 电子天平：感量分别为 0.01 g 和0.01 mg。 6.2 移液器：20200 L，1001000 L，110 mL。 6.3 旋涡混合器。 6.4 匀浆机。 6.5 离心机：转速4000 r/min。 6.6 胶体金免疫层析检测试纸条。 6.
7、7 离心管：1.5 mL、50 mL。 7 样品制备 7.1 试样制备 蔬菜样品取样部位按 GB 2763 的规定执行，将 适量（约 500 g）待测样品切碎混匀均一化制成匀 浆备用。 7.2 试样前处理 7.2.1 韭菜 准确称取制备后试样 2 g(精确至 0.01 g)于 50 mL 离心管中，加入稀释液（5.9）6.0 mL，振荡 混匀 2 min，4000 r/ min 室温离心 2 min，取上清液即为待测液。 7.2.2 番茄、黄瓜 准确称取制备后试样 2 g(精确至 0.01 g)于 50 mL 离心管中，加入稀释液（5.9）6.0 mL，振荡 混匀 2 min， 4000 r/
8、min 室温离心 2 min， 上清液备用。 取 1.5 mL 离心管， 吸取 900 L 稀释液 （5.9） ， 加入 100 L 上清液，混匀即为待测液。 7.2.3 茄子、辣椒、蘑菇类（鲜） 准确称取制备后试样 2 g(精确至 0.01 g)于 50 mL 离心管中，加入稀释液（5.9）6.0 mL，振荡 混匀 2 min， 4000 r/min 室温离心 2 min， 上清液备用。 取 1.5 mL 离心管， 吸取 960 L 稀释液 （5.9） ， 加入 40 L 上清液，混匀即为待测液。 8 测定 8.1 所有操作需在室温下（205）进行。 8.2 吸取 100 L待测液于金标微孔
9、中，上下抽吸 510 次，室温条件下进行孵育 5 min。将试纸条吸 水海绵端垂直向下插入金标微孔中，室温条件下反应 6 min。从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的 样品垫，观察显色情况，进行结果判定。 8.3 空 8.4 加 标准工 作 9 结果 9.1 结 9.1.1 控 制 9.1.2 检 测 明样品 中 9.1.3 检 测 量高于 方 9.2 质 空 白 批样品 结 10 性 能 10.1 灵 灵 敏 10.2 特 白试验：称 取 标质控试验 作 液（5.12） 分析 果判定 无效 制 线（C线） 不 阴性 测 线（T线） 颜 中 腐霉利残 留 阳性 测 线（T线） 不 方 法检测限
10、， 控试验要求 白 试验测定 结 结 果无效。 能 指标 灵 敏度 敏 度应95 特 异性 取 空白试样 ， ：准确称取 空 ，使待测液 中 不 显色，表 明 颜 色比控制 线 留 低于方法 检 不 显色或检 测 判定为阳 性 结 果应为阴 性 。 ， 按照 7和 8 空 白试样 2 中 腐霉利的 终 明 操作不正 确 图 1 线 （C线）颜 检 测限，判 定 测 线（T线） 性 。判定示 意 性 ，加标质控 .2 的步骤 同 g（精确至 0 终 浓度为 0. 2 确 或试剂条 无 目视判 定 色深或者检 测 定 为阴性。判 颜色比控制 意 图见图1。 试验测定结 果 同 法操作。 .01 g
11、）置 于 mg/kg， 按 无 效。判定 示 定 示意图 测 线（T线） 定示意图见 线（C线） 颜 果 应为阳性 。 于 50 mL 离 心 按 照7和8.2 示 意图见图1 。 颜色与控制 图1。 颜 色浅，表 明 。 否则表示 不 DB34/T 心 管中，加 入 的步骤同法 操 。 线（C线） 颜 明 样品中腐 霉 不 满足质控 试 3891 2021 3 入 适量腐霉 利 操 作。 颜 色相当， 表 霉 利残留的 含 试 验要求， 此 利 表 含 此 DB34/T 3891 2021 4 特异性应95。 10.3 假阴性率 假阴性率应5。 10.4 假阳性率 假阳性率应5。 注： 性能
12、指标计算方法见附录A。 DB34/T 3891 2021 5 附录A （资料性） 定性方法性能指标计算方法 表A.1 性能指标计算表 样品情况 a 检测结果 b 总数 阳性 阴性 阳性 N 11 N12 N1.=N11+N12 阴性 N 21 22 2.=N21+N22 总数 N .1=N11+N12 N.2=N21+N22 N=N1.+N2.或N .1+N.2 显著性差异（ 2 ） 2=（|N 12-N21|-1） 2 /（N 12+N21）， 自由度（df）=1 灵敏度（p+，） p+=N 11/N1. 特异性（p-，） p-=N 22/N2. 假阴性率（pf-，） pf-=N 12/N1.=100-灵敏度 假阳性率（pf+，） pf+=N 21/N2.=100-特异性 相对准确度（，） c （N11+N22）/（N 1.+N2.） 注： a 由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果； b 由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果； C 为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。 N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。 示例： N11表示第一行，第一列，N 1.表示所有的第一行，N 2.表示所有的第二列；N 12表示第一行，第二列。
