1、ICS65.020.01 CCSB 16 中华人民共和国检验检疫行业标准 SN/T53732021 大灰蛞蝓检疫鉴定方法 Detection and identification of limax maximus Linnaeus,1758 2021-06-18发布2022-01-01实施 中华人民共和国海关总署发布 1 2 0 2 3 7 3 5 T/ N S 中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 大灰蛞蝓检疫鉴定方法 SN / T 5373 2021 * 中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲1号( 100023 ) 编辑部:( 010 ) 65194242-75
2、31 网址 / book 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本8801230 1 / 16 印张1 字数23千字 2021年7月第一版 2021年7月第一次印刷 印数 1 500 * 书号: 155175 666定价16.00元 前 言 本文件按照GB / T 1.1 2020 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国福州海关。 本文件主要起草人:王沛、周卫川、胡美玲、陈泰林、王宇、林阳武。 SN/T5373202
3、1 大灰蛞蝓检疫鉴定方法 1 范围 本文件规定了大灰蛞蝓limax maximus Linnaeus , 1758的检疫鉴定方法。 本文件适用于大灰蛞蝓的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 SN / T 3067 2011 软体动物常规检疫规范 3 术语和定义 SN / T 3067 2011界定的以及下列界定的术语和定义适用于本文件。 3.1 呼吸孔 blowhole 为气体进出孔道,位于体右侧外套膜边缘靠后
4、位置。 3.2 生殖孔 gonopore 生殖系统的开口,位于右触角基部稍后位置。 3.3 外套膜 mantle 为陆生软体动物躯体背部皮质层皱褶延伸而成,是一层覆盖内脏囊的膜状物,肺血管网密布其上, 可行呼吸作用,且能分泌碳酸钙形成贝壳。 注: 软体动物外套膜通常由 3层组成:即靠近体外的表皮层,能分泌碳酸钙形成贝壳;中间的皮层,由肌肉与结缔组 织交织而成;靠近内脏团的皮层,常生有纤毛。 3.4 阴茎 penis 阴茎系统一般由阴茎、阴茎本体、阴茎牵引肌和鞭状体组成,其中后三者常因种类不同而缺失。 注: 大灰蛞蝓无鞭状体。 3.5 软体 soft body 蛞蝓柔软的身体。 注: 软体的颜色
5、和长度可用于分类。 3.6 盾板 scutum 蛞蝓退化的贝壳。 1 SN/T53732021 3.7 尾嵴 tail keel 尾部中央的嵴状突起。 注: 有些种类的尾嵴发达,可直达外套膜后缘。 4 基本信息 中文名:大灰蛞蝓;豹纹蛞蝓 英文名: g reat g re y slu g ; Leo p ard slu g 学名:limax maximus Linnaeus , 1758 异名:limax cinereus Lister , 1678 ; limax cinereus Muller , 1774 ; limacella parma Brard , 1815 ; limax ma
6、culatus Nunnele y , 1837 ; limax cellarius Lessona et Polonera , 1882 ; limax carbonarius al- banicus Jaeckel , 1954 分类地位:软体动物门Mollusca ,腹足纲Gastro p oda ,柄眼目St y lommato p hora ,蛞蝓科Limacidae , 蛞蝓属Limax Linnaeus , 1758 。蛞蝓属有35个种,大灰蛞蝓的近似种有4个,分别为康氏蛞蝓 L.conemenosi Bott g er , 1882 、黄蛞蝓L.flavus Linnaeus
7、, 1758 、 杂色蛞蝓 L. aeolianus Giusti , 1973 和维罗纳蛞蝓L.veronensis Lessona 对于软体外形有变异的个体,需同时符合8.4.2 和8.4.3判定 为大灰蛞蝓。 9.2 实时荧光PCR检测 在阳性对照、阴性对照和空白对照结果均正常的情况下,则: 待测样品的Ct值=40时,判定为非大灰蛞蝓; 待测样品的Ct值35时,判定为大灰蛞蝓; 待测样品的35Ct值40时,应重新进行测试;如果重新测试的Ct值=40时,判定为非大灰 蛞蝓;如果重新测试的Ct值40时,则判定为大灰蛞蝓。 10 标本处理和保存 10.1 标本处理 按照SN / T 3067
8、2011 。 10.2 保存时间 经过鉴定的大灰蛞蝓标本应制作成浸泡标本永久保存,并注明时间、产地、寄主、采集人等信息。 4 SN/T53732021 附 录 A (资料性) 大灰蛞蝓的寄主、地理分布及危害性 A.1 寄主 无特定的寄主,主要取食各种蔬菜、花卉、腐殖质,枯死的植物以及菌类、藻类等。 A.2 地理分布 大灰蛞蝓起源于欧洲,主要分布在英国、爱尔兰、比利时、荷兰、卢森堡、法国、瑞士、保加利亚、捷克、 波兰、斯洛伐克、匈牙利、德国、澳大利亚、斯堪的纳维亚、挪威、瑞典、法罗群岛,拉脱维亚,立陶宛,白俄 罗斯,乌克兰等国家。 入侵地区: 北美洲的东海岸和西海岸地区,包括纽波特、罗德艾兰州、
9、匹兹堡、加利福尼亚、蒙大納、 安大略、新斯科舍、纽芬兰等地。 A.3 生物学特性及危害特点 大灰蛞蝓经常在人类居住地附近出没,如草丛、花园、地下室等。该蛞蝓无群居性,常栖息于花园、 潮湿隐蔽的灌木丛中,石块和落叶下,或其他阴暗潮湿的地方,尤其是偏好于潮湿的地下室。该蛞蝓具 杂食性,主要取食各种蔬菜、花卉、腐殖质,枯死的植物以及菌类、藻类等,可以15 cm / min的爬行速度 捕食其他蛞蝓。该蛞蝓还可严重危害农作物幼苗,被美国的弗罗里达州和俄勒冈州的农业局列为重要 的农业危险性有害生物。此外,大灰蛞蝓是线虫Agfa flexilis、Angiostoma limacis、Angiostrong
10、ylus costaricensis 和 Angiostrongylus cantonensis的中间寄主,误食后可引起呕吐、胃疼、脑膜炎等疾病。 5 SN/T53732021 附 录 B (资料性) 大灰蛞蝓形态特征 大灰蛞蝓形态特征见图B.1 、图B.2 、图B.3 。 图 B.1 卵形态特征(引自htt p s :/ ima g es.a pp . g oo. g l / 5wWmmDhNBwo6rrbZ9 ) 图 B.2 成年蛞蝓软体形态特征(引自htt p s :/ en.wiki p edia.or g / wiki / Limax _maximus ) 6 SN/T5373202
11、1 说明: BC 受精囊; PBC 受精囊柄; VD 输精管; OV 输卵管; P 阴茎; PRM 阴茎牵引肌; SO 输精卵管; HG 两性腺; HD 两性管; AG 蛋白腺 图 B.3 生殖系统形态特征(仿Scharff R F , 1891 ) 7 SN/T53732021 附 录 C (规范性) 大灰蛞蝓实时荧光PCR检测 C.1 DNA提取 取腹足肌肉约30 m g ,用动物基因组DNA试剂盒方法按照商品化试剂盒说明书要求提取DNA 。 C.2 引物及探针 LMF : 5 -CCTGGAGGTGCCATGGGTTT-3 。 LMR : 5 -ACGACGGGCTCGATGTGAAA-
12、3 。 LMP : 5 -FAM-ACGCCGCGCCGTCGTCTCCA-BHQ1-3 。 C.3 反应体系 反应体系为25 L :其中DNA模板2 L ( 100 n g / L ), LMF ( 10 M ) 1 L , LMR ( 10 mol / L ) 1 L , LMP ( 10 mol / L ) 1 L , 2Premix Ex Taq TM PCR ( Probe q PCR ) 12.5 L , RoxII 0.5 L , ddH 2 O 7 L 。 C.4 反应程序 第一步: 95 5 min ; 第二步: 95 10 s , 60 40 s , 40个循环。 C.5
13、阳性对照、阴性对照和空白对照的设置 阳性对照:大灰蛞蝓;阴性对照:非大灰蛞蝓;空白对照: ddH 2 O 。 C.6 结果判定 C.6.1 质控标准 C.6.1.1 阳性对照 阳性对照Ct值应35 ,并出现典型的扩增曲线。 C.6.1.2 阴性对照 空白对照、阴性对照无Ct值且无扩增曲线。 C.6.1.3 有效原则 如阳性对照、阴性对照任意一项不满足以上条件,此次试验视为无效。 C.6.2 结果描述与判定 待测样品的Ct值=40时,判定为非大灰蛞蝓。 待测样品的Ct值35时,判定为大灰蛞蝓。 待测样品的35Ct值40时,应重新进行测试;如果重新测试的Ct值=40时,判定为非大灰蛞 蝓;如果重新测试的Ct值40时,则判定为大灰蛞蝓。 8 SN/T53732021
