1、DB43/T 27002023 43湖南省地方标准ICS CCS 65.020.20B 35发 布湖南省市场监督管理局羊肚菌液体发酵制种技术规程Technical regulation for liquid fermentation of morchella strains2023-08发布-222023-11实施-22DB43/T 27002023 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 场地与设施 1 5 液体菌种发酵 2 6 液体菌种转接 3 7 废弃物处理 3 8 档案管理 3 附录 A（资料性）羊肚菌摇瓶种培养基配方 4 附录 B（资料性）羊肚
2、菌液体发酵培养基配方 5 附录 C（资料性）羊肚菌液体发酵制种档案 6 DB43/T 27002023II DB43/T 27002023 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省微生物研究院、中南林业科技大学、湖南省产商品质量监督检验研究院、益阳欣博农业发展有限公司、湖南湘蕈生物科技有限公司、常德市永春堂生物科技有限公司。本文件主要起草人：许隽、范婷婷
3、、钟文涛、杨迪、唐少军、马文华、任锐、贺月林、喻桃生、邵晨霞、杨祎、朱华珺、马文杰。DB43/T 27002023IV DB43/T 27002023 1 羊肚菌液体发酵制种技术规程 1 范围 本文件规定了羊肚菌液体发酵制种的场地与设施设备、液体菌种发酵、液体菌种转接、废弃物处理、档案管理等技术要求。本文件适用于湖南省内梯棱羊肚菌液体发酵制备栽培种。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 150.4 压力容器 第 4 部分
4、：制造、检验和验收 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 12728 食用菌术语 GB 50073 洁净厂房设计规范 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 NY/T 1935 食用菌栽培基质质量安全要求 DB43/T 2326 桑黄液体菌种生产技术规程 DB43/T 2327 羊肚菌菌种质量检验规程 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 羊肚菌 morchella spp.隶属子囊菌门（Ascomycota）、盘菌纲（Discomycetes）、盘菌目（Pezizales）、羊肚菌科（Morche
5、llaceae）、羊肚菌属（Morchella），因其外表凹陷状似羊肚而得名。4 场地与设施设备 4.1 场地环境 液体发酵制种场地环境条件应符合 NY/T 528 的规定，生产用水应符合 GB 5749 的规定。4.2 设施设备 厂房应符合 GB 50073 的规定，压力容器应符合 GB/T 150.4 的规定。DB43/T 270020232 5 液体菌种发酵 5.1 工艺流程 母种制备摇瓶种制备发酵罐准备基质配制灭菌冷却接种发酵培养菌种检测菌种保藏。5.2 母种制备 母种制备应符合 NY/T 528 的规定。5.3 摇瓶种制备 5.3.1 培养基 原料应符合 NY/T 1935 的规定，
6、配方参照附录 A。5.3.2 装液量 采用 1000 mL 三角瓶，装液量为 300 mL400 mL,用纱布和牛皮纸封口。5.3.3 灭菌 采用高温高压灭菌，在 121 126，0.11 MPa0.16 MPa 条件下，保持 20 min30 min。5.3.4 接种 培养基冷却至常温，在无菌条件下将母种打孔成直径约 10 mm 的菌丝块，每 100 mL 液体培养基接种 35 个菌丝块。5.3.5 培养 在 18 条件下静置培养 2 d3 d，待菌丝块萌发出白色菌丝体后，置于振荡培养箱，120 r/min振荡培养 4 d5 d，即可培养出成熟的摇瓶菌种，菌种检测应符合 NY/T 1846
7、的规定。5.4 发酵罐液体菌种制备 5.4.1 发酵罐准备 发酵罐检查、清洗和空消应符合 DB43/T 2326 的规定。5.4.2 基质配制 原料应符合 NY/T 1935 的规定，配方参照附录 B，原料搅拌均匀后加入发酵罐，装液量不超过罐体容量的 70为宜。5.4.3 灭菌 当罐体压力达到 0.11 MPa，温度达到 121 以上，保持 40 min60 min。5.4.4 冷却 灭菌后将冷水通入发酵罐夹层循环降温，培养液温度降至 20以下。DB43/T 27002023 3 5.4.5 接种 把火焰圈套在接种口上，点燃火焰圈后打开接种口盖，然后快速倒入摇瓶液体种，接种量为 0.51.0。
8、5.4.6 发酵培养 罐温为 18，罐压为 0.020.04 MPa，通气量为 10.5 V/Vmin，搅拌速度为 120 r/min130 r/min，培养时间为 4 d5 d。5.4.7 菌种检测 接种后第 2 d 和第 4 d 取样检测，检测方法应符合 NY/T 1846 的规定，菌种质量应符合 DB43/T 2327的规定。5.5 菌种保藏 在 46避光条件下可保藏 5 d7 d，在 1520避光条件下可保藏 2 d3 d。6 液体菌种转接 将待接种的羊肚菌栽培种转入无菌接种房，使用无菌的接种器将液体菌种注入栽培袋，每袋接种量为 15 mL25 mL。7 废弃物处理 废弃物应按要求分类
9、，并进行无害化处理。8 档案管理 应建立羊肚菌液体发酵制种档案，资料记录完整准确，档案内容见附录 C，档案应保存 3 年以上。DB43/T 270020234 附 录 A（资料性）羊肚菌摇瓶种培养基配方 A.1 马铃薯（煮汁）20，葡萄糖 2，磷酸二氢钾 0.06，硫酸镁 0.05。A.2 葡萄糖 2，蛋白胨 0.2，酵母膏 0.2，磷酸二氢钾 0.05，磷酸氢二钾 0.1，硫酸镁 0.05。DB43/T 27002023 5 附 录 B（资料性）羊肚菌液体发酵培养基配方 B.1 葡萄糖（蔗糖）2，黄豆粉 2.5，麦麸 5，磷酸二氢钾 0.1，硫酸镁 0.05。B.2 玉米粉 3，酵母粉 0.5，蛋白胨 0.3，磷酸二氢钾 0.1，硫酸镁 0.05。DB43/T 270020236 附 录 C（资料性）羊肚菌液体发酵制种档案 表 1 羊肚菌液体发酵制种记录表 公司名称 负责人 联系电话 地址 所属单位名称 制种时间 制种数量 发酵技术情况 发酵培养基制备 时间 培养基体积 原料配方 灭菌条件 记录人 发酵罐接种 时间 罐体温度 摇瓶种来源 接种量 记录人 发酵培养管理 转速 温度 罐压 通气量 记录人 菌种质量检测 形态色泽 气味 酸碱度 菌丝球数量 记录人 转接栽培袋 转接时间 菌丝萌发时间 记录人 其他情况
