1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准GBjT 5009.1972003 保健食品中盐酸硫肢素、盐酸毗哆醇、烟酸、烟酿服和咖啡因的测定Determination of tbiamine bydrocbloride, pyridoxine bydrocbloride, niacin,niacinamide and caffeine in bealtb foods 2003心8-11发布2004心1心1实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员高555 前言本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口.本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人g杨大进、方从容、王
2、竹夭。GB/T 5009. 197-2003 557 GB/T 5009. 197-2003 引言盐酸硫E费1宫、盐酸il!t哆醇、炮酸、烧就胶等B族维生素是人体不可缺少的重要喜曹营养素，对于多种疾病的预防治疗有重要辅助作用。目前B族维生素和咖啡因已作为功效成分添加于保健食品中。本方法在参考日本大正制药株式会社维生索检测方法的基础上，然合我国具体的仪器分析条件，制定了适用于片剂、胶囊、口服液、饮料等保健食品类型中所添加的盐酸硫胶素、盐酸毗哆醇、烟酸、烟酸胶等B族维生素和咖啡隐含量的离效液相色滋测定方法。558 1 范围保健食品中盐酸硫膜素、盐酸毗哆醇、烟酸、烟酷服和咖啡因的测定GB/T 500
3、9. 197-2003 本标准规定了保健食品中盐酸硫胶素、盐酸毗哆醇、烟酸、烟酷胶和咖啡因的高效液相色谱测定方法。本标准适用于盐酸硫胶素、盐酸毗哆醇、烟酸、烟Il胶和咖啡因作为膳食补充剂添加于片剂、胶囊、口服液、饮料等试样类型中的高效液相色谱测定方法。本方法的检出限为z盐酸硫胶素。.02问、盐酸毗哆醇0.02阅、烟酸。.10阅、烟酷胶0.06g、咖啡因0.05阅。线性范围s盐酸硫胶素O.500g/mL50. 0g/mL，盐酸咣哆肆O.500g/mL 50.。g/mL，烟酸1.00g/mL100g/mL，烟酷胶1.00g/mL100g/mL，咖啡因5.00g/mL500g/mL. 2原理将粉碎混
4、匀的片剂、胶囊或液体试样使用甲醇+水十磷酸=100+400+0.5进行提取和稀释，根据高效液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。3 试剂除非另有说明，在分析中所用的水为双蒸水。3.1 甲醇s优级纯。3.2 乙腊g色谱纯.3.3 磷酸2分析纯。3.4 硫酸月桂醋销(sodiumdodecylsu!fate)，高效液相色谱用试剂。3.5 1樊炕磺酸销(sodium1-decanesu!fonate)，离效液相色谱用试剂。3.6 标准储备液A，准确称量己扣除水分的盐酸硫胶素和盐酸毗哆醇标准品各0.0500 g.滚于水中并定容至50mL. 3.7 标准储备液B，准确称量已扣除水分的烟酷胶和烟酸标准品各
5、0.0400 g.溶于水中并定容至20 mL。3.8 混合标准使用液g准确称量经80C干燥4h的咖啡因0.0500g.准确加人标准储备液A5 mL.标准储备液B10 mL.再加入甲醇+水+磷酸=100+400+0.5混合溶液至20mL. 4 仪器4.1 高效液相色谱仪g附紫外检测器。4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5 分析步骤5.1 试样处理5. 1. 1 取20粒以上片剂或胶囊试祥研磨或混匀，称取一定量试样于试管中(准确至0.001g).加人甲GB/T 5009. 197-2003 醇+水+磷酸=100+400+0.5混合溶液，使浓度为每毫升中大约含盐酸硫胶素、盐酸毗哆醇0.25mg.
6、 烟酸、烟酸胶1mgo超声提取5min后以3000 r/min离心5min，上清液经0.45m滤膜过滤后待进样。5. 1. 2 液体试样直接以甲醇+水+磷酸=100+400+0.5混合溶液稀释，充分混匀后经0.45m滤膜过滤后待进样。5.2 色谱条件5.2.1 色谱柱:TSKCl8 4.6 mmX150 mm.5m。5.2.2 柱温s室温。5.2.3 检测波长2盐酸硫胶素260nm，咖啡因、烟酸、烟酿胶、盐酸毗哆醇280nm。5.2.4 流动相盐酸硫胶素s硫酸月桂黯销溶液(5g 530 mL)+乙腊+磷酸=530+470+1，咖啡因、烟酸、烟l!II;胶、盐酸毗哆醇:1樊烧磺酸销溶液(1.22
7、 g 850 mL)+乙脯+磷酸=850+150+105.2.5 流速:1mL/mino 5.2.6 进样量:10Lo 5.3 色谱图L l 盐酸硫胶素.1 咖啡因$固1盐磁硫肢素色谱回2一一烟酸g3一一烟酷跤，4一一盐酸毗哆障。圈2咖啡团、烟醺、姻酷腹、盐戳、毗哆醇色谱图在该色谱条件下，盐酸硫胶素保留时间14.305min，盐酸毗哆醇保留时间18.512min、烟酸保留时间8.728min、烟酷胶保留时间9.341min、咖啡因保留时间4.986mino浓度分别为盐酸硫胶素8.80g/mL、盐酸毗哆醇9.60g/mL、烟酸23.8g/mL、烟酷胶25.0g/mL、咖啡因50.4g/mL。6 结果计算式中=x = h, X c X V X 100 -h2 X m X 1000 X一一试样中单一成分的含量，单位为毫克每百克(或毫克每百毫升)mg/lOOg(mL)J , h 试样峰高或峰面积Fc一一标准溶液浓度，单位为微克每毫升(fLg/mL), 560 V 试样定容体积，单位为毫升(mL); h, 标准溶液峰高或峰面积3m一一试样量，单位为克(或毫升)g(或mL)J。计算结果保留两位有效数字。7 精密度GB/T 5009. 197-2003 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。561
