1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准GBjT 5009.170-2003 保健食品中褪黑素含量的测定Determination of melatonin in health foods 2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员E403 GB/T 5009. 170-2003 前言本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准第一法负责起草单位g卫生部食品卫生监督检验所。本标准第二法负责起草单位2中国预防医学科学院蕾养与食品卫生研究所、卫生部食品卫生监督检验所、北京市卫生防疫站。本标准第一法主要起草人z杨大进、王竹天、方从容
2、、吴国华、李萍。本标准第二法主要起草人z李萍、吴永宁、王绪卿、杨大进、吴国华。405 GB/T 5009. 170-2003 引言褪黑素(Melatonin)是松果体内分泌的一种呵|喋类激素，其化学名称为N乙酷基-4甲氧基色胶，该物质具有广泛的生理作用。褪黑素类产品已在国外广泛应用，近年来我国也开始大量生产和销售此类产品。为达到保证褪黑素类产品的质量、保护消费者身体健康的目的，特建立保健食品中褪黑素的测定方法。406 GB/T 5009.170-2003 保健食品中槌黑素含量的测定1 范围本标准规定了以褪黑素为有效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定方法。本标准适用予以褪黑素为有效成分
3、的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定。本标准第一法商效液相色谱紫外检测法的检出限为O.5鸣，取祥量。.5g时，检出浓度为。自7白宫/险。第二t最高效液相色谱-荧光法的检出限为30况，线俭范自量为0.05ng白.50吨.第一法割草效液梧色诺-紫外检溅法2 原理试样中的褪黑署营经溶解、稀释、过滤后，使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。3 试剂除非另有说哥哥，在分析中仅使用确定为分析线的试剂和蒸锵水或去离子水或稽当纬度的水。3.1 甲醇s色谱纯。3.2 元水乙蹲z优级纯。3.3 三氟乙酸g优级纯。3.4 高效液相包I普流动相3甲醇+水十三氟乙酸=45+5
4、5+0.05.3.5 褪黑素(Melatonn)标准品。3.6 褪黑素标准溶液部配和j精确称量30mg褪黑素标准品于100mL容量瓶中，加入70%乙喜事溶解后定容至要tlJr.准确吸取2 mL上述溶液于10mL容量瓶中，加人流动相(3.的定容至IJ度，此溶液浓度为0.060mg/mL. 4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪s附紫外检测器。4.2 超声波清洗器。4.3 离心机。5 分析步骤5.1 试样处理2使用研钵将片剂或胶囊研成粉末并使之混合均匀。5.2 精确称量约粒片剂或胶囊的质量子10mL容量瓶中，以70%乙蹲定容至刻度，使用超声波清洗器提取10min。将提取液离心至澄清。准确量取上清液2m
5、L于10mL容量瓶中，以流动相定容至刻度，混匀后经0.45m滤摸过滤后进行包遵毒分析a5.3 吉普定5.3.1 液棺色t曾参考条件5.3. 1. 1 色谱校I-BondaPakC1 .4. 6 mmX 250 mm , 5.3. 1. 2 紫外检涮器z检测波长222nm。5. 3. 1. 3 流速，0.8mL/ min。5.3.1.4 柱温!草挂在。5.3.2 色港分析407 GBjT 5009. 170-2003 量取10L标准溶液及试样净化液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高成峰面积与标准比较定量。5.3.3 色谱图见图1.1 部1色漫画6 结果计算按式(1)计算:10 -
6、X c X 10 X =i- x 1 000 x=: 智Z主主中zX一一-试样中褪黑素的含章，单位为毫克每千克(mg!kg);h一一试样的峰高统峰面积3h，一一标准的峰高成峰商积3C一一褪黑素标准溶浓的浓度，单位为毫克锋毫升(mg!mL);m 试样质量，单位为克(g)0 计算结果保留两位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。第二法高效液相色谱荧光法8 最重建( 1 ) t式样中褪黑素经!jl董事反复提取，制成甲酶溶液，按一定比例进行稀帮后，注入高效液穗色i普仪，经反精色谱分离，以荧光检测者曾进行检测，根据保留时间定性和与标准品峰面积比较进行
7、定量。9 试剂9.1 甲醇z重蒸。9.2 褪黑素标准品z纯度为99.7%09.2.1 储备溶液z稽密称踉褪黑素标准品0.01号Q草，海甲醇溶解并要E成1g/L始储各滚滚，于2白保存。9.2.2 使用洛液z使用前精密量取一定量标准品储备溶液，根据褪黑蒙在仪器上的响应情况，用吁i醇稀稀成标准使用溶液。10 仪器10.1 高效液梧色谱仪g姆荧光检测器和微处辈辈机。408 10.2 离心机。10.3 超声波清洗机。11 试样制备片剂研细备用g胶囊内容物混合均匀备用。12 分析步骤12.1 提取GB/T 5009. 170-2003 精密称取试样0.2000日于5mL的刻度试管中，加甲醇约3mL，超声振
8、荡10min，离心，取上清液于10mL容量瓶中，再加甲醇约3mL于残渣中，按前述方法重复提取2次，合并上清液，加甲醇至刻度，摇匀。取此溶液适量，用甲醇稀释并定容，制成试样溶液待测。12.2 测定12.2.1 高效浪相色谱条件12.2. 1. 1 色谱柱，AlltimaCj8 4.6 mmX250 mm不锈钢柱。12. 2. 1. 2 流动相z甲醇。12.2. 1. 3 流速，1mL/ mino 12.2.1.4 进样量，10L。12.2. 1. 5 检测器:荧光检测器，激发光波长286nm，发射光波长352nmo 12.2.2 色谱分析将仪器调至最佳状态后，分别将10L标准溶液及净化后试样液注
9、入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。本方法线范性围为O.05 ng-O. 50吨。12.2.3 色谱圄色谱图见图2。13 结果计算按式(2)计算z式中g1 x=?!.j XV, X 1000 , =-= mXVj X 1000 X 试样中褪黑素的含量，单位为毫克每千克(mg/kg), mj一一被测样液中褪黑素的含量，单位为纳克(ng), m一一试样质量，单位为克(g), V j 样液进样体积，单位为微升(L)，V, 试样稀释液总体积，单位为毫升(mL)，n一一稀释倍数。计算结果保留两位有效数字。14 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。.( 2 ) 409
