1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准GB/T 5009.217-2008 保健食品中维生素B12的测定2008-四-03发布Determination of vitamin 812 in health foods 中华人民共租国卫生部世古中国国家标准化管理委员会。叩2009-03-01实施. 目U画本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位z中国疾病预防控制中心营养与食品安全所.本标准主要起草人z杨大进、鲁杰。GB/T 5009.217-2008 GB/T 5009.217 2008 保健食品中维生素B2的测定1 范围本标准规定了保健食品中维生素BIZ的测定方法。
2、本标准适用于片剂、胶囊、粉剂、功本方法使用固相萃取法处臂te至100mLo 3.12 维生素BIZ标准品纯量3.13 5%乙睛z量取50mL乙膀，3.14 25%乙睛:量取250mL乙脯，用水稀罕野营春雪寸000mL。3.15 维生素BIZ标准储备液g称取维生素BIZ标准品10mg(精确至0.1mg).用5%乙醇溶解，并定容至10mL棕色容量瓶中，混匀，得到维生素BIZ的标准储备液。冷藏保存。3.16 维生素BI2标准中间液=吸取1mL储备液至25mL棕色容量瓶中，用水稀释得到维生素BI2的标准中间液。冷藏保存。3.17 维生素BI2标准系列分别吸取0.05mL、0.10mL、0.50mL、1
3、.00 mL、2.00mL、5.00mL的标准中间液于10mL棕色容量瓶中，用水稀释得到维生素BI2标准洛液系列。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪，附紫外检测器。相色谱分析。3 试剂tlV-2-3.3 3.4 四丁基3.5 3.6 3.7 3.8 GB/T 5009.217-2008 4.2 超声波清洗器。4.3 离心机，4000r/min. 4.4 网相萃取柱N乙烯基毗咯烧酣和二乙烯基苯亲水亲脂平衡型固相萃取柱(60mg.3 mL). 4.5 免疫亲和净化柱z维生素B免疫亲和净化柱(EASI-EXTRACVITAIIINE B口。5 分析步骤5.1 固相萃取法(前处理方法一)操作步骤5.
4、 1. 1 试样处理将20粒片剂、胶囊试样粉碎或混匀;粉剂试样取5包10包充分混匀.5. 1. 2 提取称取试样4g10g(相当于含维生素B，24g左右，精确至O.001 g)于50mL离心管中，加10 mL15 mL 水，混匀，将其置于超声波消洗器中，超声提取约10min后以4000r/min离心5mino 用吸管吸取上消液置于另一个50mL离心管中。对残渣按上述步骤每次加入约10mL水，重复提取两次，合并提取液于50mL离心管中。5. 1. 3 净化向提取液中加入5%四丁基氯化镀溶液1mL、三氯甲烧约20mL.使用涡旋混匀器充分混匀，于离心机中以1000 r/min离心3min.将水层转入
5、蒸发皿中，置水浴锅上加热蒸发至干。残渣用乙醇溶解，转移至离心管中，超声溶解，离心，吸取上清液予蒸发皿中回再重复提取两次，合并提取液于蒸发皿中。蒸干乙晖，试样用5mL 5%乙腊溶液定量转移到试管中，待上因相萃取柱。5. 1. 4 固相萃取因相卒取桂先用3mL甲百事进行活化，再用3mL水对固相萃取柱进行平衡，速度为l滴/5.将上_._-述处现过的远是试样加到固相萃取柱上。上样后，用5mL5.%乙脯溶液作为洗脱溶剂将干扰物质从阴相萃取柱上淋洗下来，最后用25%乙痛溶液将维生素B12洗脱干.来，收集洗脱液0.5mL. 5.2 免疫亲和法(前处理方法二)操作步骤5.2.1 试样处理碳酸型功能性饮料=取1
6、50mL样液于超声波中脱气10mn，待用。果粒或果汁型功能性饮料:用1mol/L氢氧化销调pH至7.O.置离心机中以转速4000r/min离心10min，过滤，泼、液待用。片剂、胶囊、粉剂z取20粒片剂、胶囊试样粉碎或混匀。粉剂试样取5包10包充分混匀。称取试样10g50 g(相当于维生素B2的量为25g2500g.精确至0.001g)于250mL容量瓶中，加入100mL 水，振摇混匀，将其置于超声波消洗器中，超声提取约15min后用水定容，稀释样品溶液的浓度到样品中维生素B2的含量为25g/mL.如样品溶液的pH在7.0以上，用拧稼酸调节pH在4.57. 0之间，如样品溶液的pH在4.5以下
7、，则应用磷酸缓冲液代替水作为提取液并重复上面步骤。5.2.2 富集、净化维生素B2免疫亲和净化柱先用10mL水淋洗小柱中未键合的化合物，吸取20mL( 5. 2. 1)提取液上样到净化柱上，再用3mL甲蹲洗脱维生素B2至蒸发皿中，整个过程速度约为1滴/s。于60C 70 c水浴中蒸干溶剂，用1mL O. 025%的三氟乙酸m液溶解，溶液过0.45m水系滤膜，待高效液相色谱用.5.3 液徊色谱参考分析条件5.3.1 色谱柱:C，8(4.6mmX250 mm.5m)反相色谱柱。1) 给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可.如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品
8、. GB/T 5009.217-2008 5.3.2 流动相=采用梯度洗脱方式，见表1.t/min 。-3.53.5-11 11-19 19-20 20-30 5.3.3 流速1mL/min. 5.3.4 检测波长，361nm. 5.3.5 柱温=室温。5.4 测定表1流动相梯度洗脱表A，0.025%三氟乙酸(pH2.的100 75 65 90 100 ，乙睛。25 35 10 。吸取20L标准溶液和试样溶液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，用标准曲线法进行测定。6 结果计算按式。计算试样中维生素的含量。式中-x=生三工m X 试样中维生素Bl2的含量，单位为微克每克或微克每毫升(g/g或
9、g/mL); A 从标准曲线上查得的含量，单位为微克(g); f一一一试样稀释倍数zm一一试样的取样量，单位为克或毫升(g或mL)。计算结果保留两位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。8 色i昔图维生素Bi2标准色谱图见-图1;0.020 Q.018 0.016 0.014 0.012 0.010 0.008 0.006 0.004 0.002 0.000 J L一一一一4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 .9.00 10.00 11. 00 12.00 t/min 图1维生素Bl2标准色谱图. ( 1 ) SON-hFN
10、doo山H筒。Y、叫帕副4;i?吃faJrT;岛屿!吨.号牛 -，/，、:;t、;:;_. . 叫:.-:.; .;:, . ,1. : i; i :一尸， ，:工平均.1 一叩飞币、品啕吁各工; ! i!, l 、, i:.r:主任-j.j l:人，;9 也:L、. . 中华人民共和国国家标准保健食品中维生素B的测定GB/T 5009.217一2008暗中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销. 开本880X12301/16 印张0.5字数6千字2009年3月第一版2009年3月第一次印刷. 书号155066 1-36070定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话，(010)68533533
