1、GB/T 18204.2-2000 前皇fr=t 为贯彻执行公共场所卫生管理条例和GB96639673-1996、GB16153一1996.加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标准中的方法是与GB9663-9673-1996、GB 16153-1996相配套的监测检验方法，4 本标准为首次发布。本标准由中华人民共和国卫生部提出.本标准起草单位z江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所、北京市卫生防疫站.本标准主要起草人=封幼玲、符晓梅、杭万双、周淑玉、高晖。 中华人民共和国国家标准公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定Methods of microbiological ex
2、amination for tea set in public places -Determination of aerobic bacterial count 1 范围本标准规定了公共场所茶具细菌总数的测定方法.本标准适用于公共场所内公用茶具细菌总数的测定.2 引用标准G/T 18204.2-2000 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性.GB/T 18204.2-2000 公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定3定义本标准采用下列定义.细菌总数aerobic ba
3、cterial count 指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后(培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等)，1cm2表面上所含菌落的总数.本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数是公用茶具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用茶具消毒效果的判定和评价提供了依据.4 仪器4. 1 高压蒸汽灭菌器.4.2 干热灭菌箱。4. 3 培养箱，36C士lC.4.4 冰箱.4.5 电炉.4.6 天平.4.7 灭茵平皿s直径9cmo4.8 灭菌刻度吸管，lmL.10mL.4.9 灭菌棉拭子.4. 10 灭菌剪刀.4. 11 放大镜。国家质
4、量技术监督局却-09-30批准2001- 01-01实施5 一4.12 pH计或精密pH试纸.5 培养基和试剂5. 1 生理盐水5. 1. 1 成分g氯化纳8.5 g 蒸饱水1 000 mL GS/T 18204.2-20 5. 1.2 司司法z将氯化纳(8.5 g)溶解子蒸馆水(1000 mL)中，分装到试管内.每管10mL. 121C20 min 高压灭菌.5.2 营养琼脂见GB/T18204.1-2000中第4章第1节.5 位验程序细菌总数检验程序如下z植样提捆各lmL.1J入二块页菌平皿36(土1(48h 菌蕾计量报告7 操作步骤7. 1 采样方法7. 1. 1 随机抽取消洗消毒后准备
5、使用的茶具.7. 1. 2 用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘，涂抹50cm2 t即1-1.5 cm高处一回(口唇接触处).用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人10mL生理盐水内.4h内送检.7.2 检验方法7.2. 1 将放有棉拭子的试管充分振摇.此液为1; 10稀挥液.7.2.2 以无茵操作，吸取2mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1mL.如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1mL加3日tl9 mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1, 100稀释液。每个稀释度做两块平皿.7.2.3 将已融化冷至45c左右的营养琼脂培养基倾人平皿.每皿约15mL.并立即旋摇平皿。冷凝后放36C
6、士1C培养箱培养48h. 8 菌落计数方法作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后.求出同一稀稀度各平皿生长的平均菌落数.若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数s若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中商落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2.所得结果代表全皿茵落数.实际公用茶具菌落数，按式(1)计算:6 式中2a一一细菌总数，cfu/cm2; b一一平均菌落数sn-一-稀释倍数.9 菌落计鼓的报告GB/T 18204.2-20 b n a=一-一50 . ( 1 ) 9. 1 选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告(见表
7、1中j!J1). 9.2 若有两个稀释度.其平均菌落数均在30-300之间.!i1U由两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2.应报告其平均数，若大于2.则报告其中稀释度较低的平皿菌落数(见表1中例2、例3).9.3 若所有稀释度的平均商落数均大于300.则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中伊ij4).9.4 若所有稀释度的平均菌落数均小子30.!i1U应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5).9. 5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一个稀释度平均菌落数大于300.而相邻的另一个稀释度平均菌落数小于30，则以接近30或300的平
8、均菌落数乘以稀释倍数报告之见表l中例6).9.6 若所有的稀释度均元菌生长.报告数为每毫升小于1cfu (见表l中例7).9. 7 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以囚舍五人法计算.为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示(见表1中报告方式栏).在报告菌落数为不可计时，应注明样品的稀释度.表1细菌计数结果及报告方式不同稀释度平均菌落数两稀释度菌落总数报告方式倒次菌数之比cfu/mL cfu/mL 10-1 10-2 10- 1 1 365 164 20 16400 16000或1.6X102 2 760 295 46 1.6 38000 38000或3.8X103 2890 271 60 2. 2 27 100 21000或2.7XI04 不可计4 650 513 513000 510000或5.1X105 27 11 5 270 270或2.7X106 不可计305 12 30500 31 000或3.1X107 。1 7
