1、ICS 65120B 46中华人民共和国国家标准农业部1068号公告一12008猪尿中士的宁的测定气相色谱一质谱法Determination of strychnine in swine urineGas chromatography-mass spectrometry method20080725发布 20080725实施中华人民共和国农业部发布刖 吾农业部1068号公告一12008本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位：农业部饲料质量及畜产品安全监督检验测试中心(沈阳)、农业部饲料质量监督检验测试中心(济南)、河北省饲料监察所
2、。本标准起草人：杨希国、张建勋、王丽娜、李永才、刘全、刘笑、陈玉艳、李会荣、李金超、刘怡菲。1范围猪尿中士的宁的测定气相色谱一质谱法农业部1068号公告一12008本标准规定了以气相色谱质谱法(GcMs)测定猪尿中士的宁残留量的方法。本标准适用于猪尿中士的宁残留量的测定。本方法检测限为0005 mgL，定量限为001 ragL。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
3、GBT 6682分析实验室用水规则和试验方法3原理在碱性条件下用甲基叔丁基醚提取猪尿中的士的宁，提取液经固相萃取柱净化，吹干，用气相色谱质谱仪测定。4试剂和溶液除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水应符合GBT 6682一级水的规定。4 1氯化钠。4 2氢氧化钾。4 3甲基叔丁基醚：色谱纯。4 4冰乙酸：优级纯。4 5甲醇：色谱纯。4 6乙酸乙酯：优级纯。47氨水。4 8 5toolL氢氧化钾溶液：称取2805 g氢氧化钾(42)溶解于水，定容至1 000mL。4 9 l乙酸溶液：取lmL冰乙酸(44)于i00mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。4 10 1乙酸-甲醇溶液：取100 mL
4、1乙酸溶液(49)与400 mL甲醇混匀。4 11 5氨化甲醇：取5mL氨水(47)于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。4 12 3 mL60 mg MCX固相萃取柱或同等效果净化柱。4 13士的宁标准溶液4 13 1士的宁标准贮备液：称取50mg(精确到0000 01 g)士的宁标准品(纯度99o)，溶于甲醇并定容至50 mL。该贮备液每毫升含士的宁1 mg。冒：-20 oc保存，有效期6个月。4 13 2士的宁标准中间液：取贮备液(4131)2mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。该中间液每毫升含士的宁20*g。置-20。0冰箱保存，有效期3个月。4 13 3士的宁标准工作
5、液：移取适量标准中间液(4132)于100mL容量瓶中，用甲醇稀释成浓度为】农业部1068号公告一1200801“gmL、025 pgmL、05 pgmL、1 pgmI。、4 pgmL、10 pgmL士的宁标准工作液。置4冰箱保存，有效期1周。5仪器和设备5 1气相色谱质谱仪。52分析天平：感量0000 01 g。5 3天平：感量001 g。5 4离心机。5 5固相萃取装置。56氮气吹干仪。5 7涡旋混合器。6试样制备猪尿样品经5 000 rmin离心5 rain，取上清液备用。7分析步骤7 1提取准确移取5 mL尿样于离心管中，加入05 mL 5 molL氢氧化钾溶液(48)并于涡旋混合器(
6、57)上混匀。加20 g固体氯化钠(41)及10mL甲基叔丁基醚(43)，涡旋提取1min，10 000 rmin离心5 min，将上层有机相转入25 mI。离心管中。水相再加入5 mL甲基叔丁基醚重复提取一次，合并有机相，40。C水浴中氮气吹干，用4 mL 1乙酸一甲醇溶液(410)溶解残余物，备用。7 2净化固相萃取柱先用3 mL甲醇、3 mL水活化。备用液过柱，过柱速度不超过2 mLmin，用3 mL水和3 mI。甲醇淋洗固相萃取柱，抽干。用4 mL 5氨化甲醇(411)洗脱。洗脱液在50。C水浴中氮气吹干。用200“L乙酸乙酯(46)溶解，经022 pm滤膜过滤后进行测定。7 3测定7
7、 3 1 C,CMS测定参数色谱柱：HP 5MS，长30 m，内径025 mm，膜厚025 pm。载气：氦气(纯度99999)；流速：10mLrain。进样口温度：280。C。进样方式：不分流。进样量：20“L。柱温程序：初始温度为120。C，然后以25。Cmin升温速率升温至280。C，保持11rain，冉以25。Crain升温至300并保持4 rain。EI源电子轰击能量：70 eV。离子源温度：230。四极杆温度：160。GOMS传输线温度：280。EM电压：高于调谐电压200 V。溶剂延迟：8 rain。质量扫描范围(mz)：40450。选择离子监测(mz)：120、319、334、3
8、35，其中334为定量离子。2农业部1068号公告一120087 3 2定性定量方法7 321定性方法样品峰与标准品峰保留时间的相对偏差不大于05，且选择离子相对强度(以mz334为基峰)与标准品相差不大于20。7322定量方法选择离子监测(SIM)法计算峰面积进行单点或多点校准定量。当单点校准定量时，根据样品液中士的宁含量情况，选择峰面积相近的标准工作溶液进行定量。同时，标准工作溶液和样品液中士的宁响应值均应在仪器检测线性范围内。8结果计算与表述8 1试样中士的宁的含量按式(1)计算：x一弩甓熹手州，式中：x试样中士的宁的含量，单位为毫克每升(mgL)；C。标准溶液中士的宁含量，单位为微克每毫升(tLgmL)； 卜试样最终定容体积，单位为毫升(mL)；P试液峰面积积分值；P。标准溶液峰面积积分值；m试样体积，单位为毫升(mL)。8 2测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9允许差两个平行测定结果的相对偏差不大于20。
