1、ICS 87050B 50中华人民共和国国家标准农业部1077号公告一52008水产品中喹乙醇代谢物残留量的测定高效液相色谱法Determination of olaquindox metabolite residues in fishery produetsby high performance liquid chromatography20080811发布 2008-0811实施中华人民共和国农业部发布司。前 言农业部1077号公告一52008本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位：农业部渔业环
2、境及水产品质量监督检验测试中心(舟山)、舟山市越洋食品有限公本标准主要起草人：郑斌、虞岚、陈雪昌、张小军、陈伟斌、朱婧睿、梅光明、蔡水根。农业部1077号公告一52008水产品中喹乙醇代谢物残留置的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了水产品中喹乙醇代谢物3方法。本标准适用于水产品中喹乙醇代谢物32规范性引用文件甲基喹嘿啉2羧酸(MQCA)残留量的高效液相色谱测定甲基喹嗯啉一2一羧酸残留量的测定。下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版
3、本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法SCT 3016水产品抽样方法3原理以乙酸乙酯提取样品中残留的喹乙醇代谢物3一甲基喹嗯啉一2羧酸，用pH8的磷酸盐缓冲液萃取，萃取液用盐酸调至酸性，再用乙酸乙酯进行反萃取，萃取液浓缩至干后，残渣用流动相溶解，反相色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。t试剂和材料除有特殊说明外，所用试剂均为分析纯。41试验用水应符合GBT 6682一级水的要求。4 2甲醇：色谱纯。4 3乙酸乙酯：色谱纯。4 4盐酸。45甲酸。4 6 01molL磷酸盐缓冲液：称取120 g磷酸二氢钠和142 g磷酸氢二钠，加水溶解
4、，用1moL氢氧化钠调pH至80，加水定容至1 000mL。47 1o甲酸水溶液：量取10 mL甲酸并加水定容至1 000 mL。4 8 3一甲基喹嚼啉一2一羧酸标准品：纯度98。4 9 MQCA标准储备液：准确称取10mg的标准品，用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，配成标准储备液，浓度为100 mgL。避光冷藏保存。保存期为3个月。4 10 MQCA标准工作液：用流动相稀释成各质量浓度的标准溶液，现配现用。5仪器5 1高效液相色谱仪：配紫外检测器。5 2天平：感量001 g。5 3分析天平：感量0000 01 g。5 4旋涡混合器。1农业部1 077号公告5200855离心机：最大转
5、速14 000 rrain。56氮吹仪。57高速组织捣碎机。5 8分液漏斗：150mL。6操作方法6 1样品处理6 1 1试样制备按soT 3016的规定执行。6 12提取称取(5士o。02)g样品置于50mL离心管中，加入15mL乙酸乙酯，匀浆5rain，盖塞，旋涡混匀，4 000 rmin离心5rain，取上清液转入150mL分液漏斗中。再用15mL乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液于同一分液漏斗中。往样品残渣中加入01 toolL磷酸盐缓冲液10 mL，旋涡混匀，振荡30 S，8 000 rrain离心10 rain，取上清液合并到分液漏斗中。手摇振荡分液漏斗30 s，静置分层，收集下层溶
6、液至25 mL具塞离心管中。加人盐酸200“L，混匀，再加入乙酸乙酯6mL，旋涡混匀，振荡30 s，8 000 rmin离心10rain，上层溶液转入玻璃试管中，再用6 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并上层溶N于N-玻璃试管，55氮气流下吹千，用1 mL流动相溶解残渣，旋涡混匀，O45肿微孔滤膜过滤，待测。6 2样品测定621色谱条件a)色谱柱：ZORBAXSBC18柱(250 mmX46 rnm，5 Urn)；或性能相当者。b)流动相：甲醇+10甲酸水溶液(40+60)。c)流速：10mLrain。d)柱温：30。e)进样量：50“L。f)检测波长：320 nln。6 2 2标准工作曲线的锚作
7、准确取MQCA标准储备液，用流动相稀释成为000529mL、001 pgmL、005弘gmL、025“gmL、050lgmL、10 pgmL系列标准工作液，供高效液相色谱分析。6 23色谱分析根据样品液中MQCA残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液进行定量。分别注入50 pLMQCA标准工作溶液及样品溶液于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据MQCA标准品的保留时间定性，外标法定量。色谱图参见附录A。7空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8结果计算样品中MQCA的残留量按公式(1)计算，计算结果需扣除空白值。结果保留3位有效数字
8、。X：CXV1 000(1)m2式中：x试样中MQCA的含量，单位为微克每千克(ttgkg)；c试样溶液中MQCA的含量，单位为微克每毫升(ttgmI。)m试样质量，单位为克(g)；V试样溶液体积，单位为毫升(mL)。9方法灵敏度、准确度和精密度农业部1077号公告-5-20089 1灵敏度本方法最低定量限为4gkg。92准确度本方法添加浓度为40“gkg200pgkg时，加标回收率为70120。9 3精密度本方法批内相对标准偏差15，批间相对标准偏差15。农业部1077号公告一52008附录A(资料性附录)色谱图A1 MQCA标准品的液相色谱图025 PgmL MQCA标准品的液相色谱图见图A1。图A 1 0 25 vcJmL MOCA标准品的液相色谱图A 2空白草鱼样品的液相色谱图空白草鱼样品的液相色谱图见图A2。图A 2空白草鱼样品的液相色谱图A3加标草鱼样品的液相色谱图10 pgkg加标草鱼样品的液相色谱图见图A3。农业部1077号公告一520084图A 3 10 Igkg加标草鱼样品的液相色谱图
